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MicroRNA-181b在多种疾病中的作用机制研究进展
MicroRNA是一大类非编码的小分子RNA,miR-181h是miR-181家族中四个成员之一.近年来的研究发现,miR-181b与多种疾病的发生发展密切相关,有可能作为生物标记物及干预治疗的潜在靶点.现对miR-181b在精神分裂症、神经系统疾病、心血管疾病、恶性肿瘤等疾病中的表达水平及其作用机制的研究进展作一综述,以帮助学者全面了解miR-181b在疾病中的作用,为疾病的临床诊疗提供新的思路和方法.
关键词： 精神分裂症 神经系统疾病 心血管疾病 恶性肿瘤 MicroRNA-181b -
has-miR-181b慢病毒表达载体的构建与鉴定
目的 构建靶向has-miR-181b基因的慢病毒表达载体.方法 根据has-miR-181b序列设计互补的单链寡核苷酸引物序列进行退火延伸后连入经双酶切的pGCSIL-GFP载体质粒,与辅助元件载体质粒pHelper1.0及pHelper 2.0共同导人感受态细胞T293进行慢病毒包装,收集、浓缩并测定病毒滴度.用所得病毒转染U87胶质瘤细胞；实时定量PCR检测转染后miR-181b表达,流式细胞术检测细胞凋亡以及Transwell实验评价细胞侵袭能力的改变.结果 目的序列成功连接入载体,测序分析证实目的序列载体构建成功,并测得病毒滴度为6×109TU/ml;病毒转染U87胶质瘤细胞能够显著上调has-miR-181b表达,该病毒载体能够有效诱导胶质瘤细胞凋亡,显著抑制U87细胞的侵袭性.结论 成功建立高效稳定表达has-miR-181b的慢病毒转染系统,体外实验中能够有效诱导U87胶质瘤细胞凋亡,并且可以抑制胶质瘤的侵袭能力.
关键词： MicroRNA-181b 慢病毒表达载体 -
microRNA181b在老年肝细胞癌中的表达水平及其对癌细胞迁移的影响
目的 探讨microRNA-181b在老年肝细胞癌(HCC)组织以及患者血浆中的表达水平以及对肝癌细胞迁移的影响.方法 选取该院40例HCC患者为研究组,40例同期来该院体检的人群为对照组,采用实时荧光定量RT-PCR法检测老年肝细胞癌组织及对应癌旁组织中以及患者和正常人群血浆中microRNA-181b表达水平;对人肝癌细胞SMMC-7721干扰microRNA-18 1b后,采用transwell法观察其侵袭水平;并采用RT-PCR以及Westem blot检测了SMMC-7721细胞中CXCR4的mRNA及蛋白水平.结果 microRNA-181b在肝细胞癌组织中的表达水平显著高于对应癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.05);microRNA-181b在肝癌患者血浆中的表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).Spearman相关分析显示,microRNA-181b在肝细胞癌组织及血浆中表达与肝癌的分化程度均呈显著正相关(r=0.572,P＜0.05;r=0.616,P＜0.05);而肝癌癌旁组织中microRNA-181b表达与肝癌分化程度无显著相关(r=0.216,P＞0.05).干扰microRNA-181b的SMMC-7721细胞迁移能力显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);且干扰microRNA-181b的SMMC-7721细胞CXCR4的mRNA及蛋白水平降低.结论 microRNA-181b在老年肝细胞癌组织中高表达,并且与肝癌细胞的分化程度关系密切,microRNA-181b可能通过影响CXCR4来促进肝癌细胞的迁移.
关键词： MicroRNA-181b 原发性肝细胞癌 迁移 CXCR4 -
MicroRNA-181b及Toll样受体4在新生大鼠 神经元缺氧缺血损伤中的作用机制研究
目的 观察MicroRNA-181b(miRNA-181b)及Toll样受体4(TLR4)对新生大鼠缺氧缺血脑损伤(HIBD)的影响并探讨其潜在机制.方法 选取3只1～2日龄新生大鼠脑皮质神经元细胞原代培养7 d,分为对照组和HIBD组.CKK-8法测定原代培养的脑皮质神经元细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,瞬时转染调节细胞内miRNA-181b及TLR4表达.双荧光素酶实验检测miRNA-181b对TLR4基因的靶向调控,SYBR Green实时荧光定量PCR观察miRNA-181b及TLR4 mRNA表达变化.Western blot观察TLR4蛋白在不同组别神经元细胞中的表达.结果 与对照组比较,miRNA-181b在新生大鼠缺氧缺血损伤神经元细胞中表达降低(P<0.05),miRNA-181b mimic转染后过表达miRNA-181b能抑制缺血缺氧对新生大鼠神经元细胞的损伤(P<0.05).双荧光素酶实验证实miRNA-181b可与TLR4 mRNA 3'-UTR直接结合,发挥对TLR4转录后翻译的抑制作用.进一步机制研究发现,si-TLR4转染后抑制TLR4表达能增加细胞活性,而miRNA-181b抑制剂anti-miRNA-181b转染后降低细胞活性,anti-miRNA-181b与si-TLR4共转染能部分逆转神经元细胞缺血缺氧下的损伤(P<0.05).结论 新生大鼠HIBD神经元细胞中miRNA-181b能够负性调控TLR4表达发挥一定的神经保护作用.
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急慢性注射地卓西平马来酸盐对小鼠额叶microRNA-181b表达的影响
目的 研究急慢性注射地卓西平马来酸盐(MK-801)对小鼠额叶中与精神分裂症相关的微小RNA(microRNA,miRNA)-181b表达的影响,探讨其参与精神分裂症病理学的可能机制.方法 急性注射实验中40只小鼠随机分成四组,分别腹腔注射不同剂量(0.125 mg/k g,0.25 mg/kg,0.50 mg/kg)的MK-801和生理盐水(简称急性对照组),15 min后用实时荧光定量PCR (real-time PCR)技术检测额叶miRNA- 181b的相对表达量;慢性注射实验中22只小鼠随机分成两组,分别腹腔注射0.25 mg·kg-1·d-1的MK-801和生理盐水(简称慢性对照组),连续14 d,然后检测miRNA-181b的相对表达量.结果 急性注射0.125 mg/kg、0.25 mg/kg、0.50mg/kgMK-801的各组小鼠额叶miRNA-181b的相对表达水平分别为0.65±0.05、0.61±0.05和0.91±0.08.前两个剂量组miRNA-181b的表达明显低于对照组(1.00±0.13),P＜0.05,而0.5 mg/kg的MK-801则对miRNA-181b表达无影响(P＞0.05).慢性MK-801注射组miRNA-181b的相对表达量为1.86±0.19,显著高于慢性对照组(1.00±± 0.10),P＜0.05.结论 急性和慢性MK-801对额叶中miRNA-181b表达的影响不同,结合miR-181b的分子功能,提示miRNA-181b在急性和慢性模型鼠的构建中起到不同的作用.
关键词： 地卓西平马来酸盐 额叶 MicroRNA-181b 实时荧光定量PCR -
MicroRNA-181b相对表达量与冠状动脉狭窄程度的相关性研究
目的 探讨冠心病患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中的MicroRNA-181b相对表达量与冠状动脉病变程度的关系,研究MicroRNA-181b对冠脉病变的预测意义.方法 选取因急慢性胸痛在心内科住院且已行冠状动脉造影的患者117例,其中非冠心病组42例,冠心病组75例,根据症状、心电图、肌酸激酶同工酶、肌钙蛋白、冠状动脉造影结果将冠心病组分为稳定型心绞痛30例,不稳定型心绞痛22例和急性心肌梗死23例.采集各组患者一般临床资料,抽血检测相关生化指标,计算冠脉Gensini积分,采用荧光实时定量PCR方法检测MicroRNA-181b的相对表达量,研究MicroRNA-181b相对表达量与Gensini积分有无关系,探讨其在冠心病中的意义.结果 冠心病组Gensini积分与MicroRNA-181 b表达水平呈负相关.冠心病组MicroRNA-181b相对表达量均低于非冠心病组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 冠心病患者MicroRNA-181b表达水平降低,表达水平越低其冠脉病变程度(Gensini积分)越重,呈负相关,MicroRNA-181b高表达对冠状动脉粥样硬化的进展有抑制作用.
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微小RNA-155和微小RNA-181b在慢性淋巴细胞白血病中的研究进展
慢性淋巴细胞白血病(CLL)以功能缺陷的B细胞聚集为特征,发病隐匿,按照疾病进程不同可将其分为惰性CLL和侵袭性CLL,二者预后存在较大异质性.微小RNA(MiRNA)与B细胞的发育息息相关,可通过靶向作用于相应的转录因子发挥调控B细胞发育的作用.近年来研究显示,MiRNA-155和MiRNA-181b在CLL的发生、发展中发挥重要的作用,尤其是与CLL患者预后不良显著相关.笔者拟就MiRNA-155和MiRNA-181b的生物学特点及其在CLL诊疗中的研究进展进行综述.
关键词： 白血病 淋巴细胞 慢性 B细胞 微RNAs microRNA-155 MicroRNA-181b 预后 -
骨肉瘤患者血浆中microRNA-181b水平的检测
目的检测骨肉瘤患者血浆中microRNA-181b (miR-181b)的水平变化,初步探讨其临床意义.方法选择25例骨肉瘤患者和30例健康对照,采用茎-环定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测血浆中miR-181b的水平,并分析miR-181b与骨肉瘤临床病理指标之间的关系.结果骨肉瘤患者血浆中miR-181b水平(0.62±0.25)与正常对照组(0.41±0.18)相比明显升高,差异具有统计学意义(P＜0.01);骨肉瘤患者血浆中miR-181b的水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、病理类型及Enneking分期均无明显相关性(P＞0.05).结论骨肉瘤患者血浆中miR-181b水平增高,miR-181b可能参与了骨肉瘤的发病过程.
关键词： MicroRNA-181b 骨肉瘤 临床意义 -
microRNA-181b调控精神分裂症易感基因EGR3的分子机制
目的 用分子生物学的方法来检测microRNA-181b对EGR3基因的靶向调控作用,为后续microRNA-181b在精神分裂症(schizophrenia)中的分子功能研究指明方向.方法 运用生物信息学软件预测到精神分裂症易感基因EGR3是microRNA-181b的潜在靶基因,随后采用PCR方法扩增EGR3基因3`UTR包含与microRNA-181b种子序列相结合的片段,再将该片段连接入pmirGLO质粒载体,用双酶切和测序的方法进行鉴定,与UCSC网站上EGR3序列相同的阳性重组质粒载体记为pmirGLO-EGR3.后将该重组体与microRNA-181b阴性对照(NC)和模拟物(mimics)分为五组转染HEK293T细胞系,进行双荧光素酶报告基因活性测定.结果 双酶切和测序结果表明EGR3 3`UTR成功构建入pmirGLO载体中.荧光显微镜下观察发现细胞转染实验成功,在大约90％的细胞中可检测到荧光信号.双荧光素酶报告基因活性检测结果表明,microRNA-181b mimics与NC相比,显著性降低了报告基因的活性.结论 在细胞水平证明了精神分裂症易感基因EGR3是microRNA-181b的靶基因,对后续microRNA-181b的功能研究,以及其在精神分裂症中的分子作用机制研究提供了新的线索.
关键词： 精神分裂症 MicroRNA-181b Egr3 3`UTR 调控
