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银杏内酯B对于实验性脑出血后神经保护作用研究
目的 探讨银杏内酯B对于脑出血后脑水肿、脑细胞凋亡及脑代谢的影响,从多角度进一步探讨银杏内酯B的神经保护机制.方法 将50只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为干预组(n=21)、对照组(n=21)、假手术组(n=8),采用Ⅶ型细菌胶原酶构建大鼠实验性脑出血模型,在脑出血造模后第3天行脑含水量检测;在第3天采用TUNEL法行细胞凋亡检测;在造模成功后,分别在第1天、第3天、第7天,对3组大鼠行氢质子磁共振波谱成像(1 H-MRS),并对图像进行处理及定量分析.结果 脑组织含水量对照组[(82.52±0.86)％]与干预组[(81.45±0.54)％]比较,具有显著性差异(P<0.05).脑细胞凋亡检测,干预组(52.47±2.66)与对照组(44.22±3.11)比较,具有显著性差异(P<0.05).1 H-MRS检测结果表明,银杏内酯B 3天亚组和7天亚组的N-乙酰天门冬氨酸(NAA)较对照组明显升高(34.56±2.76比26.78±3.26,62.66±2.79比56.34±1.32;P<0.05),乳酸(Lac)明显降低(56.78±3.22比66.47±3.56,50.33±4.05比55.78±4.07,均P<0.05),而胆碱复合物(Cho)、肌酸(Cr)差异无统计学意义(P>0.05).结论 银杏内酯B可以通过降低脑组织含水量、减少细胞凋亡、改善脑代谢等多途径发挥神经保护作用.
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香烟对气道上皮细胞表达4-羟基壬烯醛的影响以及银杏内酯B的干预作用
目的探讨香烟烟雾浓缩物(CSC)对人类支气管上皮细胞系(16-HBE)表达4-羟基壬烯醛(4-HNE)的影响以及银杏内酯B的干预作用;并观察4-HNE对中性粒细胞的趋化作用.方法采用免疫细胞化学和Western blot方法.(1)不同浓度(1、10 μg/ml CSC)CSC刺激16-HBE细胞4 h后4-HNE加成蛋白的表达水平,设正常对照组(无血清培养基代替CSC);(2)10 μg/ml CSC刺激不同时间(1、4、8、12、24、30 h)后,16-HBE中4-HNE加成蛋白的水平,设正常对照组(无血清培养基代替CSC);(3)用100 μmol/L银杏内酯B孵育16-HBE后,CSC刺激1、4、8、12 h,检测4-HNE加成蛋白表达的变化,设正常对照组(无银杏内酯B孵育);(4)以趋化实验检测0.1、1、10 μmol/L 4-HNE对兔中性粒细胞的趋化作用.结果 (1)1、10 μg/ml CSC刺激4 h后,16-HBE细胞表达4-HNE加成蛋白水平(免疫化学为2.12±0.38、2.69±0.42,Western blot为100.2±6.3、72.3±6.1)均较正常对照组显著增加(免疫化学为1.25±0.37,Western blot为122.4±4.2,P均＜0.01).(2)10 μg/ml CSC刺激1、4、8、12、24、30 h后,16-HBE细胞表达4-HNE加成蛋白(免疫化学为2.67±0.46、2.69±0.42、2.71±0.48、2.72±0.56、2.93±0.11、2.92±0.20,Western blot为73.2±8.3,72.3±6.4,72.6±9.2,71.5±8.1,54.4±3.6,56.7±4.4)较正常对照组(免疫化学为1.25±0.35,Western blot为122.4±4.1)显著增加(P均＜0.01),刺激24 h和30 h,细胞内4-HNE加成蛋白较其他时间点增加.(3)50、100 μmol/L银杏内酯B孵育后再以CSC刺激时,16-HBE细胞内4-HNE加成蛋白表达水平(Western blot为84.6±4.4、101.2±4.4)明显低于未以内酯B孵育组,但高于正常对照组(Western blot为72.5±6.4,P均＜0.01).(4)0.1、1、10 μmol/L 4-HNE对兔中性粒细胞趋化数目(92±12、104±16、131±12)较正常对照组(72±12)均显著增加,10 μmol/L 4-HNE趋化数目显著高于0.1和1 μmol/L 4-HNE,差异均有统计学意义(P均＜0.01).结论香烟所引起肺中性粒细胞趋化的结果可能与其促使4-HNE产生增加有关,银杏内酯B可以抑制CSC对4-HNE的诱生.
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银杏内酯B对缺氧环境下大鼠血管平滑肌细胞线粒体钙离子浓度的影响
目的:探讨银杏内酯B对缺氧环境下大鼠血管平滑肌细胞线粒体内钙离子浓度的调节机制.方法:体外培养大鼠血管平滑肌细胞,分为正常对照组(细胞正常培养)、缺氧处理组(细胞在氮气中培养12 h)和1、5、10 μmol/L银杏内酯B保护组(细胞加入不同浓度的银杏内酯B后在氮气中培养12 h).细胞经荧光探针Rhod-2/AM染色,激光共聚焦扫描显微镜下观察,并计算各组面积积分吸光度值,以此反映线粒体浓度的变化.结果:与正常对照组比较,缺氧造成大鼠血管平滑肌细胞线粒体钙离子浓度显著升高,各银杏内酯B保护组细胞线粒体钙离子浓度明显低于缺氧处理组,且随着银杏内酯B浓度的升高,线粒体钙离子浓度呈下降趋势.结论:银杏内酯B可以维持线粒体内钙离子浓度的稳定,降低缺氧对细胞造成的损伤.
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银杏内酯B对地塞米松诱导人外周血淋巴细胞凋亡的影响
目的:探讨银杏内酯B(GB)对人外周血淋巴细胞凋亡的影响.方法:用淋巴细胞分离液体外分离外周血淋巴细胞,利用荧光显微镜观察经4',6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)染色的淋巴细胞,随机分为3组:正常对照组,地塞米松处理组和银杏内酯B保护组.记录各组凋亡细胞核形态学改变并计算凋亡百分率.结果:地塞米松(Dex)体外可诱导淋巴细胞发生凋亡.与地塞米松组相比,银杏内酯B组淋巴细胞凋亡率明显降低,差异有显著性(P＜0.05).结论:银杏内酯B对人外周血淋巴细胞凋亡具有保护作用.
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银杏内酯B对急性胆管炎大鼠细菌移位的作用
目的观察银杏内酯B对重症胆管炎大鼠细菌移位的作用.方法取Wistar大鼠,分3组:假手术组、感染组、治疗组,各12只.术前用荧光素标记大肠杆菌给鼠灌胃后,在感染组、治疗组制成急性胆管炎模型.假手术组只游离胆管.术后30 min感染组腹腔内注射二甲亚砜,治疗组注射银杏内酯B.6 h后活杀取肠系膜淋巴结和肝制成为10%组织匀浆在荧光显微镜下细菌计数.同时光镜下观察小肠和肝病理形态变化.另选取12只大鼠,用4%镧行肠系膜上静脉灌注随后用戊二醛灌注内固定,取该段小肠处理后在电镜观察镧在肠粘膜屏障的通透性.结果治疗组各细菌移位数较感染组均显著减少(P＜0.01).肠粘膜和肝病理损害也明显轻(P＜0.05).电镜下,治疗组镧在肠粘膜通透性下降.结论银杏内酯B可以减少急性胆管炎时肠道细菌向肠系膜淋巴结和远位器官的移位,并对肠粘膜屏障和肝等组织器官有保护作用.
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银杏内酯B对急进高原致大鼠空间记忆障碍的保护作用
目的 探索银杏内酯B对大鼠急性低压低氧所致大脑空间记忆形成与保持能力的影响.方法 80只SD大鼠随机分为5组:平原组(对照组,n =16)、急进海拔6000 m组(6000 m组,n=16)、急进海拔6000 m不同剂量银杏内酯B给药组(6000 m+3、6、12 mg·kg-1组,每组n=16).实验分为两部分,实验Ⅰ:大鼠急进高原损伤在Morris水迷宫定位导航实验与空间探索实验之间,实验Ⅱ:大鼠急进高原损伤之后进行Morris水迷宫定位导航实验和空间探索实验.两部分实验使用不同的大鼠,统计分析各实验组大鼠逃避潜伏期、游泳总路程、60 s内穿越平台次数和目标象限滞留时间.结果 实验Ⅰ中,预先给予6、12 mg ·kg-1银杏内酯B组大鼠较6000 m组60 s内穿越平台次数显著增多(P＜0.05),目标象限滞留时间显著增长(P ＜0.05、P＜0.01),而给予3 mg·kg-1剂量组较6000 m组无显著性差异(P＞0.05).实验Ⅱ中,预先给予6、12mg·kg-1银杏内酯B组大鼠较6000 m组第7天平均逃避潜伏期显著缩短(P＜0.05、P＜0.01),平均游泳总路程显著缩短(P ＜0.05、P＜0.01),60 s内穿越平台次数显著增多(P＜0.05、P＜0.01),目标象限滞留时间显著增长(P＜0.05),而给予3 mg ·kg-1剂量组较6000 m组无显著性差异(P＞0.05).结论 银杏内酯B可有效改善急进高原大鼠空间记忆的形成与保持能力.
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银杏内酯B对谷氨酸诱发原代培养皮层神经元损伤的实验研究
目的 观察银杏内酯B(Ginkgobalide B,GB)对谷氨酸致原代培养皮层神经元损伤的保护作用.方法 采用体外培养皮层神经元的方法,利用终浓度为0.5mmol·L-1的谷氨酸造成皮层神经元损伤,通过测定细胞存活率、细胞活性、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性,研究GB对谷氨酸造成神经元损伤的保护作用机制.结果 GB10-5 mol·L-1可抑制谷氨酸所致LDH漏出率的升高.GB10-4、10-5mol·L-1可提高神经细胞活性;扭转谷氨酸致神经细胞存活率的下降;升高SOD酶的活性,抑制谷氨酸所致MDA含量的升高.结论 提示GB对谷氨酸所致原代皮层神经元的损伤具有保护作用.
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银杏内酯B在中脑缺血/再灌后大鼠脑组织分布
目的 研究脑缺血再灌损伤是否影响银杏内酯B在脑内处置.方法 大鼠大脑中动脉阻断缺血2h,再灌10min后,静脉注射12mg·kg-1银杏内酯B,于给药后不同时间处死动物,分取用LC/MS方法测定血浆、缺血侧和对照侧脑组织中银杏内酯B浓度.结果 缺血侧脑组织中银杏内酯B浓度显著高于对照侧,其AUC约为对照侧的1.88倍.与正常动物比较,脑缺血鼠的血药浓度显著低于正常大鼠,其AUC仅为正常鼠的1/3.结论 脑缺血损伤可改变银杏内酯B体内药代动力学行为,增加脑内浓度.
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银杏内酯B对牛主动脉平滑肌细胞增殖的影响
目的探讨银杏内酯B(GB)对牛主动脉平滑肌细胞(SMC)增殖的影响及可能机制.方法细胞的增殖由3H-胸腺嘧啶核苷掺入试验确定,应用流式细胞术测定细胞周期,用MTT法和乳酸脱氢酶活性检测观察细胞代谢的变化.结果无论是否用血管紧张素II诱导,GB与银杏内酯A和B的混合物均呈浓度依赖性地抑制SMC的增殖,其机制与阻止细胞进入有丝分裂期有关.结论GB可抑制动脉壁SMC的增殖,该作用不完全取决于血小板活化因子受体的拮抗活性.
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银杏内酯B对脂多糖刺激的小鼠腹腔巨噬细胞TNFα生成及大鼠胸腔多形核白细胞NF-кB活化的影响
目的研究银杏内酯B对脂多糖刺激的小鼠腹腔巨噬细胞TNFα生成及大鼠胸腔多形核白细胞NF-κB活化的影响.方法用L929细胞结晶紫染色法检测TNFα的含量,用电泳迁移率改变检测法检测NF-κB的结合活性.结果1和10 μmol·L-1银杏内酯R能够显著抑制LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞TNFα的生成,其IC50为0.26μmol·L-1:1 mg·L-1LPS和1 nmol·L-1PAF均可活化大鼠胸腔多形核白细胞NF-κB;银杏内酯B能够抑制LPS或PAF刺激的NF-κR活化.结论银杏内酯B能够抑制LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞TNFα生成及大鼠胸腔多形核白细胞NF-κB的活化.PAF参与LPS激活NF-κB的过程.
关键词： 核因子κB TNFα 电泳迁移率改变检测法 脂多糖 银杏内酯B -
银杏内酯B对血小板活化因子刺激的大鼠中性粒细胞功能的影响
目的研究银杏内酯B对血小板活化因子(PAF)刺激的大鼠中性粒细胞粘附、趋化及脱颗粒功能的影响.方法从大鼠外周血分离中性粒细胞,用MTT比色法、Boyden小室法及β-葡萄糖苷酸酶释放法分别检测PAF诱导的粒细胞粘附、趋化及脱颗粒反应.结果 10 μmol*L-1 银杏内酯B可显著抑制中性粒细胞的粘附反应;1～ 1 000 nmol*L-1 可剂量依赖性抑制10 nmol*L-1 PAF诱发的粒细胞趋化反应,其IC50为4.84 nmol*L-1; 0.01～10 μmol*L-1可抑制1 μmol*L-1 PAF诱发的粒细胞释放β-葡糖苷酸酶,其IC50为3.56 μmol*L-1.结论银杏内酯B能够抑制PAF刺激的大鼠中性粒细胞粘附、趋化及脱颗粒反应.
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环孢素A对银杏内酯B大鼠体内药动学的影响
研究环孢素A(cyclosporine A,CyA)对大鼠静脉注射中药成分银杏内酯B(ginkgolide B,GB)药动学的影响,并进行作用机制研究.实验建立了测定大鼠血浆、脑组织和尿液中GB浓度的LC-MS方法,研究了CyA对GB在大鼠体内血药浓度、脑分布和肾排泄的影响.结果表明静脉注射CyA(10及20 mg·kg-1)可以显著增加GB的AUC0-360min(P<0.01),降低其CL(P<0.001);静脉注射CYP3A抑制剂伊曲康唑(itraconazole,ICZ)则对GB的药动学行为无影响.脑分布结果显示,高、中、低剂量的CyA均可增加GB在脑中的浓度,此作用具有浓度和时间依赖性,在5 min时不同剂量的CyA均可显著增加GB在脑中的分布(P<0.001),但在20及60 min时仅高剂量CyA组可显著增加GB脑中的浓度(P<0.01及P<0.001).不同P-gp抑制剂均可减少GB的肾排泄,其中CyA(20 mg·kg-1)组、维拉帕米(verapamil,WR)组及地高辛(digoxin,DGX)组GB 8 h累积排泄百分率仅分别为对照组的34.8%(P<0.001)、59.4%(P<0.001)及79.7%(P<0.05);而ICZ组则无此作用.大鼠静脉给予P-gp抑制剂CyA可以显著提高GB的血药浓度,减少肾脏对GB排泄且能增加GB在脑中的分布.
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银杏内酯B对大鼠中性白细胞花生四烯酸代谢酶和细胞内钙水平的影响
目的 观察银杏内酯B对大鼠中性白细胞花生四烯酸代谢酶及细胞内钙水平的影响。方法 反相高效液相色谱及Fura-2/AM荧光指示剂法。结果 银杏内酯B在0.1-10 μmol*L-1范围内，使花生四烯酸释放量降低10.9%-22.2%；0.1-50 μmol*L-1时，LTB4和5-HETE生成量分别降低29.4%-88.6%和26.2%-89.3%；在0.1-100 μmol*L-1使PAF和fMLP刺激引起的细胞内游离钙浓度分别降低13.9%-51.4%和2.2%-36.6%。结论 银杏内酯B能抑制体外大鼠中性白细胞花生四烯酸代谢酶的活性及细胞内游离钙浓度的升高。
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前体及真菌诱导子对银杏悬浮培养细胞产生银杏内酯B的影响
目的:探索前体及真菌诱导子对银杏悬浮培养细胞产生银杏内酯B的影响.方法:通过向培养基中补加前体及真菌诱导子,考察它们对悬浮培养细胞生物量及银杏内酯B产量的影响.结果:于培养基中添加100 mg·L-1异戊二烯及低浓度(10 mg·L-1,50 mg·L-1)的牛儿醇能提高GKB的产量,分别比对照增加了69%,13.8%和11.4%.从10种真菌诱导子中筛选出效果较好的日本根霉诱导子,当添加浓度为5 mg GE·L-1,诱导培养3 d时,悬浮细胞的GKB产量比对照增加约1倍.结论:在银杏悬浮细胞培养过程中,添加前体物质及应用真菌诱导子是提高银杏内酯B的有效手段之一.
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银杏内酯B对慢性炎症血管生成的抑制作用
目的研究银杏内酯B对慢性炎症血管生成的作用及部分作用机制.方法比色法测定小鼠慢性肉芽肿气囊模型血管生成指数,组织形态学方法检测气囊病理变化;放射免疫方法测定白介素-1β(IL-1β)含量;L929生物测定法测定肿瘤坏死因子(TNF-α)含量;RT-PCR法检测IL-1β和TNF-αmRNA的表达.结果银杏内酯B可显著抑制模型小鼠的血管指数,与病理观察结果相符;银杏内酯B可显著抑制模型小鼠血清中IL-1和TNF-α的分泌;能显著抑制PMA诱导的U937细胞IL-1β和TNF-α的分泌及其mRNA的表达.结论银杏内酯B能抑制小鼠慢性炎症性血管生成模型的血管生成,能抑制促血管生成细胞因子IL-1β和TNF-α的转录及表达,这可能是其抑制慢性炎症血管生成的机制之一.
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银杏内酯B对oxLDL刺激大鼠胸主动脉平滑肌细胞和U937细胞功能变化的作用
目的观察银杏内酯B对oxLDL或PAF引起的大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMC)增殖及U937单核细胞趋化因子分泌的抑制作用.方法用3H-Tdr参入实验测定VSMC增殖.用ELISA和RT-PCR方法测定MCP-1和IL-8的蛋白和mRNA水平.Western blotting测定p65和IκB的蛋白量.放射受体配体结合实验观察oxLDL与PAF受体的结合.结果银杏内酯B呈剂量依赖性地抑制oxLDL诱导的VSMC增殖以及U937细胞MCP-1和IL-8分泌,并抑制oxLDL诱导的p65活化和IκB降解.并证实oxLDL可以抑制PAF与其在U937细胞上受体的结合.结论银杏内酯B在体外具有一定的抗oxLDL促进VSMC增殖及刺激单核细胞趋化因子分泌的作用.银杏内酯B抑制oxLDL的毒性作用可能部分通过抑制其与PAF受体的结合实现.
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银杏内酯B对血小板活化因子引起的巨噬细胞趋化及细胞骨架改变的影响
目的考察银杏内酯B(ginkgolide B,BN52021)对血小板活化因子(PAF)引起的小鼠腹腔巨噬细胞趋化反应和丝状肌动蛋白(F-actin)聚合作用的影响.方法Boyden小室法检测化合物对巨噬细胞趋化的影响;流式细胞术检测特异性标记的巨噬细胞中F-actin的变化.结果PAF可显著刺激小鼠腹腔巨噬细胞产生趋化效应,PAF受体拮抗剂BN52021(0.01 nml·L-1～0.1μmol·L-1)可明显抑制该作用.此外,在含钙缓冲液中,BN52021可显著抑制PAF引起的丝状肌动蛋白聚合.结论BN52021可能通过抑制丝状肌动蛋白的聚合作用,从而抑制PAF引起的巨噬细胞趋化,并且这种作用是钙依赖性的.表明BN52021的抗炎作用途径之一是抑制PAF诱导的趋化作用.
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银杏内酯B后处理改善缺血/再灌注损伤的老年大鼠心功能
目的:探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)后处理对缺血/再灌注(isehemia/reperfusion,I/R)损伤的老年大鼠心功能的影响.方法:将老年SD大鼠随机分为正常对照组、单纯缺血/再灌注组和GB后处理组.制备离体心脏I/R损伤模型,记录心脏血流动力学各指标,测定心肌梗死面积、冠脉流出液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量.分离心脏得单个心肌细胞,行细胞I/R损伤模型,分别用不同浓度GB在再灌注时进行后处理,并检测单个心肌细胞的收缩幅度,收集细胞,检查其Bcl-2和Bax蛋白表达.在GB佳浓度组中分别加和不加PI3 K/Akt信号通路抑制剂LY294002,检测细胞的收缩幅度和p-Akt蛋白表达含量.结果:GB后处理能明显降低左心室舒张末压(LVEDP),增强+dp/dtmax,并抑制-dp/dtmax的抬升,降低LDH含量.GB 1μmol·L-能明显增强心肌细胞的收缩幅度(P＜0.01),并能降低Bax与Bcl-2的比值,降低凋亡.而GB增强细胞收缩幅度的作用能够被LY294002抑制,并且GB能增加p-Akt蛋白的表达.结论:GB后处理可通过PI3K/Akt信号通路改善缺血/再灌注损伤的老年大鼠的心功能.
关键词： 银杏内酯B 缺血/再灌注 老年大鼠 心肌细胞 PI3K/Akt信号通路 -
血小板激活因子及其拮抗剂银杏内酯B对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响
目的探讨外源性血小板激活因子(PAF)激活的多核形中性粒细胞(PMN)是否具有低浓度氧自由基模拟缺血预适应(IP)对缺血再灌注(IR)所致心肌损伤的保护作用.方法结扎冠脉左前降支30 min,再灌注3 h制备大鼠心脏IR模型.以缺血前给予2次5 min缺血,10 min再灌注作为IP.实验分为6组,IR组、IR+PAF组和IR+银杏内酯B(GB、PAF拮抗剂)组,分别于缺血前25和10 min iv生理盐水、PAF(3 μgkg-1)和GB (5 mg*kg-1);IP+IR组、IP+IR+PAF组和IP+IR+GB组分别于IP 2次10 min再灌注开始时iv相应药物.观察分析心功能、梗死面积、PMN计数、心肌髓过氧化物酶活性、TUNEL阳性细胞计数等指标.结果给予PAF明显加重IR引起的心脏损伤、PMN浸润及凋亡的程度;GB对IR引起的心功能下降没有明显影响,但明显减少梗死面积、PMN浸润及凋亡细胞;PAF明显削弱IP的保护作用;GB对IP作用未见明显影响.结论 IR后PMN浸润可能是引起心肌细胞凋亡的一个重要原因;PAF激活PMN可能不具有模拟IP对IR所致心肌损伤的保护作用,反而取消IP的保护作用.
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高效液相色谱蒸发光散射测定银杏叶软胶囊中4种萜类内酯的含量
目的:用HPLC-ELSD测定银杏叶软胶囊中银杏内酯A、B、C及白果内酯的含量.方法:色谱柱填料为十八烷基键合硅胶,流动相为四氢呋喃-甲醇-水(11 : 19:70);漂移管温度为109℃,戴气流速为2.9L·min-1.结果:银杏内酯A、B、C及白果内酯分别在2.994μg～14.970μg、2.967μg～14.835μg、2.955μg～14.775μg5.952μg～29.760μg线性关系良好;银杏内酯A、B、C及白果内酯的平均回收率分别为97.2%、97.5%、97.6%、98.3%.结论:该方法简便、准确、分离效果好;本方法可用于银杏叶软胶囊的质量评价.
