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5-氮杂-2'-脱氧胞苷对肝癌DNA甲基转移酶1及上皮钙黏附素表达的影响
目的:研究5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对肝癌细胞中DNA甲基转移酶1(DNMT1)及上皮钙黏附素(E-cadherin)表达的影响.方法:免疫组织化学检测上皮钙黏附素在肝癌(26例)及癌旁组织(20例)中的表达.用终浓度10μmol/L的5-Aza-CdR处理培养的肝癌细胞株GQY-7703作为实验组,未处理细胞为对照组;DNMT1基因和上皮钙黏附素基因(CDH1)的转录产物及表达蛋白分别使用半定量RT-PCR和免疫印迹法检测;CDH1的甲基化状态使用甲基化特异性PCR(MSP)检测.结果:相比较癌旁组织,肝癌组织中上皮钙黏附素表达显著下调.5-Aza-CdR降低了GQY-7703细胞中DNMT1在转录水平和翻译水平的表达CDH1 CpG岛的甲基化水平降低;上皮钙黏附素mRNA和蛋白表达量明显增高,对电泳条带的半定量分析显示实验组和对照组之间的差异具有统计学意义.结论:5-Aza-CdR通过抑制DNMT1的表达,改变了CDH1基因的异常甲基化状态,进而恢复上皮钙黏附素的表达.
关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 肝癌细胞 DNA甲基转移酶1 上皮钙黏附素 -
5-Aza-CdR对人食管癌细胞株中T-cadherin 基因表达和细胞增殖的影响
背景:T-cadherin在肿瘤的发生中可能扮演肿瘤抑制基因的角色,在食管癌等多种肿瘤中的表达明显下降.目的:探讨去甲基化制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人食管癌细胞株EC109中T-cadherin基因表达和细胞增殖的影响.方法:常规培养人食管癌细胞株EC109,并分为5μmol/L 5-Aza-CdR组和对照组.以甲基化特异性PCR(MSP)法检测T-cadherin基因启动子区甲基化状态,RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测T-cadherin mRNA和蛋白表达,MTT法检测EC109细胞增殖.结果:对照组EC109细胞中T-cadherin基因启动子区呈异常甲基化状态,5-AzaCdR干预可逆转甲基化状态.与对照组相比,5-Aza-CdR组T-cadherin基因mRNA和蛋白表达均显著增高(P<0.01),细胞增殖明显受到抑制.结论:去甲基化制剂5-Aza-CdR通过逆转食管癌细胞中T-cadherin基因启动子区甲基化状态来增强其表达,并抑制肿瘤细胞增殖.
关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 钙黏着糖蛋白类 食管肿瘤 甲基化 -
去甲基化剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷对胃癌细胞生物学行为的影响
目的:探讨去甲基化剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对胃癌细胞生物学行为的影响.方法:使用浓度5×10-9mol/L和10-5mol/L的5-Aza-CdR处理胃癌细胞株AGS、SGC7901、MKN28及MKN45.通过MTT、平板克隆实验观察处理前、后细胞的生长活性,RT-PCR检测处理前、后抑癌基因RASSF1A mRNA表达的改变,并应用流式细胞仪进行细胞周期和凋亡率的分析.结果:4株胃癌细胞经不同浓度之5-Aza-CdR处理后,与对照组相比,生长速度出现不同程度减慢;实验组AGS细胞较对照组细胞克隆形成率显著降低(32.4%、28.5%比57.0%,P<0.01);5-Aza-CdR 处理后,3株无RASSF1A mRNA表达的细胞(AGS、MKN28和SGC7901)均检出基因重新表达;处理前后4株胃癌细胞无明显G1期、G2/M期改变,AGS细胞凋亡率由0.6%增至18.6%和20.2%,MKN28细胞亦出现凋亡率由1.85%增至3.85%和6.61%.结论:去甲基化剂5-Aza-CdR对胃癌细胞生长周期无显著影响,可能系通过诱导抑癌基因再表达或凋亡等途径,间接抑制胃癌细胞的生长.
关键词： 胃癌细胞 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 去甲基化 -
MAGE-A9和MAGE-A11基因在乳腺癌组织中的表达及其临床意义
目的:探讨黑素瘤抗原MAGE-A9和MAGE-A11在乳腺正常组织、乳腺良性病变、乳腺癌组织中的表达以及甲基化酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对MAGE-A9和MAGE-A11基因表达的影响.方法:应用RT-PCR和免疫组化方法检测60例乳腺正常组织、60例乳腺良性病变及60例乳腺癌组织(标本均取自河北医科大学第四医院乳腺中心2007年11月至2008年5月乳腺手术治疗患者)中MAGE-A9和MAGE-A11 mRNA及其蛋白的表达,分析其与乳腺癌患者临床病理学特征的关系.RT-PCR检测乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231经5-Aza-CdR和TSA单独或联合作用后MAGE-A9和MAGE-A11 mRNA表达量的变化.结果:乳腺癌组织中MAGE-A9mRNA和蛋白阳性表达率分别为45％(27/60)和43.3％(26/60),MAGE-A11 mRNA和蛋白阳性表达率分别为66.7％ (40/60)和63.3％ (38/60),而乳腺正常组织及良性病变组织中均未发现MAGE-A9、MAGE-A11 mRNA及其蛋白的表达.MAGE-A9、MAGE-A11 mRNA和蛋白的表达与乳腺癌患者的年龄、病理类型、临床分期、肿瘤大小、淋巴转移、瘤栓及孕激素受体的表达均无明显关系(P＞0.05),但与人表皮生长因子受体2(HER-2)和雌激素受体(ER)的表达有关(P＜0.05).未经药物处理的MCF-7、MDA-MB-231细胞未见MAGE-A9和MAGE-A11 mRNA表达;单用5-Aza-CdR处理后可见MAGE-A9和MA GE-A11基因重新表达,联合应用5-Aza-CdR和TSA处理可使MAGE-A9、MA GE-A 11基因的表达量进一步增加(P＜0.05);而TSA单独处理对基因表达没有影响(P＞0.05).结论:乳腺癌组织中MA GE-A9和MA GE-A11的表达与ER和HER-2的表达有关,5-Aza-CdR单用或联合应用TSA可诱导和增强MAGE-A9和MAGE-A1 mRNA的重新表达,说明DNA的去甲基化和组蛋白乙酰化可能是调控人类肿瘤细胞MAGE表达的重要机制.
关键词： 乳腺癌 MAGE-A9 MAGE-A11 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 曲古抑菌素A -
5-氮杂-2’-脱氧胞苷诱导乳腺癌细胞自噬与DNA损伤相关联
目的:探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷对乳腺癌细胞自噬的影响及其可能的机制.方法:用依托泊苷、顺铂和5-氮杂-2’-脱氧胞苷处理乳腺癌细胞后,采用彗星实验测定细胞DNA损伤,蛋白质印迹法检测p53和p21蛋白表达；细胞自噬测定用3种方法:(1)蛋白质印迹法检测微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ (microtubule-associated protein1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)蛋白的表达；(2)用单丹磺酰戊二胺对乳腺癌细胞染色后,在荧光显微镜下计数自噬泡阳性细胞,并计算自噬泡阳性细胞百分比；(3)将pEGFP-LC3质粒转染至乳腺癌细胞后,在荧光显微镜下计数含绿色荧光蛋白的阳性细胞,并计算绿色荧光蛋白阳性细胞的百分比.结果:依托泊苷和顺铂均可诱导乳腺癌细胞DNA损伤和自噬,与对照组比较,药物处理组细胞的彗星长度增长(P＜0.01),p53、p21和LC3-Ⅱ蛋白表达上调.5-氮杂-2’-脱氧胞苷也可诱导乳腺癌细胞DNA损伤和自噬,与对照组比较,处理组细胞的彗星长度增长(P＜0.01),p53、p21和LC3- Ⅱ蛋白表达上调,自噬泡阳性细胞百分比和绿色荧光蛋白阳性细胞百分比上升,差异均有统计学意义(P＜0.05和P＜0.01).结论:5-氮杂-2’-脱氧胞苷可诱导乳腺癌细胞自噬,其机制可能与其所诱导的DNA损伤有关.
关键词： 乳腺肿瘤 自噬 DNA损伤 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 -
甲基转移酶抑制剂5-Aza-dC对FANCF基因表达的调控在卵巢癌治疗中的作用
目的:探讨甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-dC)对卵巢癌细胞系OVCAR3中FANCF(Fanconi anemia complementation group F)基因表达的影响,及其对化疗药物紫杉醇敏感性的影响,以了解5-Aza-dC的抗肿瘤效应,寻找卵巢癌治疗的新靶点.方法:采用5-Aza-dC处理FANCF基因甲基化的卵巢癌细胞OVCAR3和FANCF基因非甲基化的卵巢癌细胞A2780.应用甲基化特异性PCR(methylation specific-PCR,MSP)、RT-PCR和蛋白质印迹法分析这2种细胞经5-Aza-dC处理前后FANCF基因的甲基化状态以及FANCF mRNA和蛋白的表达情况.MTT法检测卵巢癌细胞的增殖情况.FCM检测紫杉醇对卵巢癌细胞凋亡的影响.建立OVCAR3和A2780细胞裸鼠移植瘤模型,观察5-Aza-dC对裸鼠移植瘤生长的影响,并采用免疫组织化学法检测移植瘤中FANCF蛋白的表达情况.结果:体外实验显示,5-Aza-dC处理后,OVCAR3细胞中FANCF基因发生去甲基化,FANCF mRNA和蛋白的表达水平增加,细胞生长缓慢.5-Aza-dC处理组OVCAR3细胞裸鼠移植瘤体积较未处理组明显缩小,质量也明显降低,FANCF蛋白表达增加；而A2780细胞裸鼠移植瘤组中未观察到上述变化.结论:甲基转移酶抑制剂5-Aza-dC可能通过抑制卵巢癌细胞增殖而成为潜在的卵巢癌治疗药物,但同时也会增加紫杉醇的耐药风险.
关键词： 卵巢肿瘤 DNA甲基化 FANCF基因 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 -
5—Aza—CdR对结肠癌细胞增殖及抑癌基因PGDH表达的影响
目的:探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对SW480细胞生物学行为及15-羟基前列腺素脱氢酶(15-hydroxyprostaglandin dehydrogenase,PGDH)蛋白表达的影响.方法:5-Aza-CdR处理SW480细胞,通过MTT法、平板克隆实验观察细胞生长活性的变化,甲基化特异性PCR检测PGDH启动子区的甲基化状态,Western印迹法检测PGDH蛋白表达改变,并进行细胞周期分析.结果:SW480细胞经5-Aza-CdR处理后,与未处理对照组相比,生长速度出现不同程度减慢;实验组细胞(不同浓度5和10 μmol/L)较对照组细胞的克隆形成率明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);PGDH启动子区甲基化程度降低,无PGDH蛋白表达的SW480细胞检测到蛋白重新表达.5-Aza-CdR处理SW480细胞后,能够延缓细胞周期G1/S期进程,阻滞细胞干G期.结论:在结肠癌细胞系中,PGDH基因启动子CpG岛的异常甲基化修饰可能导致其表达缺失,5-Aza-CdR能够恢复PGDH基因的表达,为结肠癌的去甲基化治疗提供理论依据.
关键词： 结肠肿瘤 DNA甲基化 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 基因表达 -
乳腺癌中NDRG-1基因甲基化及其体外逆转研究
目的:探讨N-myc下游调节基因(N-myc downstream regulated gene-1,NDRG-1)基因在乳腺癌组织中的甲基化状态,研究甲基化酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine, 5-Aza-CdR)对乳腺癌细胞株T47D的生长增殖及NDRG-1 mRNA表达的影响.方法:采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)法检测乳腺癌组织、相应癌旁组织和乳腺良性病变组织中NDRG-1基因启动子甲基化状态;5-Aza-CdR处理T47D细胞后,MTT法观察细胞生长活性的变化,RT-PCR法检测处理前后抑癌基因NDRG-1的mRNA表达变化.结果:NDRG-1基因在乳腺癌组织中甲基化率为46.8%,癌旁组织中甲基化率为21.3%,而乳腺良性病变组织均未检测到甲基化.T47D细胞经5-Aza-CdR处理后,与对照组相比,细胞生长受到明显抑制.RT-PCR检测发现,与对照组相比,不同浓度处理组细胞的NDRG-1 mRNA表达增多. 结论:NDRG-1基因甲基化状态与乳腺癌发生有密切关系.5-Aza-CdR逆转T47D细胞NDRG-1基因甲基化,恢复该基因的表达,从而抑制肿瘤细胞生长.
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5-氮杂-2'-脱氧胞苷联合多西紫杉醇对前列腺癌细胞系PC3恶性表型抑制作用的实验研究
目的:观察甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2dc-脱氧胞苷(5-aza-2dc)联合多西紫杉醇(DT)对人前列腺癌(PCa)细胞系PC3细胞增殖、迁移、侵袭能力、细胞周期变化和细胞凋亡的影响,探讨上述两种药物联合应用对前列腺癌细胞的体外抗肿瘤效应.方法:实验分为对照组、5-aza-2dc组、DT组及5-aza-2dc和DT联合用药组,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、划痕损伤实验、细胞迁移实验分别观察5-aza-2dc和(或)DT对PC3细胞株增殖、迁移、侵袭能力的抑制效应,利用Annexin V-FITC/PI染色和流式细胞术检测其诱导肿瘤细胞凋亡的作用及其与细胞周期的关系.结果:5-aza-2dc组、DT组及联合用药组均能明显提高对PC3细胞的抑制率,降低细胞迁移距离,减少侵人下室的细胞(P<0.05),联合用药组作用更明显;对照组、5-aza-2dc组、DT组及联合用药组细胞凋亡率分别为(10.65±0.39)%、(16.60±0.67)%、(17.95±1.08)%、(22.98±1.18)%,各用药组均能明显提高细胞凋亡率,联合用药组作用更明显(P<0.05);联合用药组能明显减少GO/G1期细胞,增加G2/M期细胞(P<0.05).结论:5-aza-2dc和DT单独及联合应用均能在体外细胞水平显著抑制PC3细胞的增殖、迁移和侵袭作用,诱导细胞凋亡,使细胞停滞于G2/M期,两药联合的作用比各单药作用大,5-aza-2dc和DT联合作用于PC3细胞具有协同作用,值得进一步研究.
关键词： 前列腺癌 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 多西紫杉醇 细胞凋亡 -
5-氮杂-2'-脱氧胞苷与顺铂对MDA-MB-231细胞的联合作用
目的 探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR,DAC)与顺铂(cisplatin,PDD)联合应用对人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231体外增殖及凋亡的影响.方法实验分组:5 μM DAC处理组(DAC组),15 μM PDD处理组(PDD组),2.5 μM DAC与8 μM PDD同步处理组(DAC+PDD组),2.5 μM DAC与8 μM PDD序贯处理组(DAC→PDD组)及空白对照组.分别以MTT法和流式细胞术(FCM)测定各处理组MDA-MB-231细胞的增殖、凋亡情况,以q值评价两药的联合效应.结果 DAC组的24 h、48 h、72 h增殖抑制率分别为(8.12±0.79)%、(21.72±1.60)%及(30.39±1.31)%;PDD组为(35.14±2.00)%、(49.22±1.01)%及(65.52±1.53)%;DAC+PDD组为(54.25±3.82)%、(68.89±1.52)%及(87.26±2.37)%;DAC→PDD组为(6.84±0.68)%、(67.64±0.91)%及(88.76±3.54)%.联合组较单药组增殖抑制率均显著升高(P<0.01).DAC+PDD组、DAC→PDD组24 h、48 h、72 h的q值分别为1.12、1.14、1.15和0、1.12、1.17,两药联合有增效作用.对照组、DAC组、PDD组、DAC+PDD组、DAC→PDD组24 h、48 h、72 h凋亡率分别为(1.57±0.38)%、(1.83±0.27)%、(2.26±0.42)%;(10.41±0.70)%、(15.37±0.74)%、(21.39±1.22)%;(16.63±0.65)%、(21.89±1.20)%、(30.39±2.20)%;(21.42±1.11)%、(33.86±1.16)%、(42.92±1.16)%;(8.26±0.68)%、(28.98±1.01)%、(41.98±1.12)%.联合组较单药组及对照组凋亡率显著升高(P<0.01).结论 DAC与PDD均能抑制MDA-MB-231细胞株的增殖,促进其凋亡,且两者联合有增效作用.
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DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷的抗胃肠道肿瘤机制研究
目的 观察DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对胃癌细胞生长的影响.方法 将野生型P53人胃癌细胞株AGS细胞,加入不同浓度的5-Aza-CdR,体外培养至不同时间.MTT法检测细胞增殖活性;平板细胞克隆形成实验检测细胞长期增殖活性(0 ～2.5 μM);流式细胞仪检测细胞周期变化(25 μM,0、12、48、96 h);Annexin V/PI双染实验检测细胞凋亡情况(2.5 μM,0、12、48、96 h);比色法检测Caspase-3活力、Western blot检测Caspase-3前体蛋白及PARP(poly ADP-ribose polymerase,PARP)蛋白的含量(2.5 μM,0、12、48、96 h).结果 随着5-Aza-CdR浓度增加,对肿瘤细胞的抑制作用亦增强,在50 μM作用72 h时,细胞存活率达低值(31.9％);随着药物处理时间的延长,胃癌AGS细胞凋亡增多,96 h的2.5μM 5-Aza-CdR作用下,细胞的生长抑制达到了高峰(44.4％),且其抑制作用表现为浓度和时间依赖性.5-Aza-CdR对肿瘤细胞长期生长有影响,克隆形成抑制率呈线性增加.流式细胞仪分析结果显示,随5-Aza-CdR作用时间延长,G2期细胞比例从0h的(5.7±0.2)％增加到96h的(28.5±0.2)％.随着药物作用时间的累加,其凋亡率逐渐增加,各时间组的细胞凋亡率与空白对照组之间的差异均具有统计学意义(P＜0.05).与空白对照组比较,Caspase-3活力在药物处理48、96 h后显著提高(P＜0.05),但12 h AGS细胞的Caspase-3活力无变化;48 h Caspase-3前体比12h和未用5-Aza-CdR时明显减少,96 h减少为明显;PARP在AGS细胞内经5-Aza-CdR作用48 h后亦被活化,96h后几乎检测不到PARP的存在.结论 5-氮杂-2'-脱氧胞苷,能增强肿瘤细胞对化疗药的敏感性,可作为一种有效的抗胃肠道肿瘤药,.
关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 凋亡 Caspase-3 P53 DNA甲基转移酶 -
5-氮杂-2'-脱氧胞苷对胰腺癌细胞株Capan-2增殖及其PCDH8基因表达的影响
目的：探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷（5-Aza-2'-deoxycytidine，5-Aza-CdR）对胰腺癌细胞株增殖的影响以及对其原钙黏附素（protocadherin 8，PCDH8）基因表达的影响。方法用不同浓度的5-Aza-CdR处理胰腺癌Capan-2细胞。阴性对照组不加药，根据5-Aza-CdR处理的剂量分为：0.08μmol/L组、0.40μmol/L组、2.00μmol/L组、10μmol/L组、50μmol/L组，检测细胞的生长情况；采用RT-PCR和Western Blot检测各组胰腺癌细胞PCDH8基因和蛋白的表达。结果5-Aza-CdR对胰腺癌细胞具有明显的抑制作用，且随着浓度的增加，抑制率逐渐增强（P＜0.01）；但是随着时间的增加，抑制率逐渐下降（P＜0.01）。5-Aza-CdR和吉西他滨联用对胰腺癌细胞的抑制作用和诱导凋亡作用强（P＜0.05，P＜0.01）。5-Aza-CdR能显著增加胰腺癌细胞PCDH8基因和PCDH8蛋白的表达水平，且随着浓度的升高，增加作用越明显（P＜0.01）。结论5-Aza-CdR能够抑制胰腺癌细胞的增殖，增加PCDH8基因的表达，与吉西他滨联合后抑制作用更强。
关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 胰腺癌 PCDH8基因 -
5-氮杂-2'-脱氧胞苷对人肺腺癌A549细胞株的生长抑制作用
目的:探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-dC)对人肺腺癌A549细胞株的抑制作用及其机制.方法:采用四甲基偶氮噻唑氮蓝(MTT)法测定5-Aza-dC对A549细胞生长的影响;考马斯亮蓝G-250染色法测定5-Aza-dC作用后A549细胞蛋白质含量;Hoechst 33258荧光染色检测A549细胞凋亡和形态改变.结果:40 ～ 100 μg/mL 5-Aza-dC对A549细胞的增殖有明显抑制作用,与对照组比较差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01),并具有明显的时效和量效关系,同时蛋白质相对含量下降.60 ～ 100 μg/mL 5-Aza-dC作用后A549细胞出现明显形态改变且凋亡增加.结论:5-Aza-dC对人肺腺癌A549细胞的生长具有抑制作用,并引起蛋白质相对含量明显下降和细胞凋亡,其机制可能与阻滞细胞周期,蛋白质功能改变及诱导细胞凋亡有关.
关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 A549细胞 细胞凋亡 蛋白质 -
5-Aza-CdR对人肾癌OS-RC-2细胞生长及γ-连环蛋白表达的影响
目的:研究甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肾癌OS-RC-2细胞增殖、凋亡及γ-连环蛋白(γ-catenin)表达的影响.方法:使用不同浓度(10-7,10-6,10-5,10-4 mol/L)的特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR处理OS-RC-2肾癌细胞株.MTT检测5-Aza-CdR对肾癌细胞株OS-RC-2的生长抑制作用.流式细胞仪检测5-Aza-CdR对OS-RC-2肾癌细胞株凋亡的影响.细胞免疫化学检测5-Aza-CdR处理OS-RC-2肾癌细胞株后γ-catenin表达的变化.结果:5-Aza-CdR明显抑制肾癌细胞的增殖,促进其凋亡,且与药物浓度及作用时间有关.药物处理后γ-连环蛋白表达增加.结论:γ-catenin蛋白表达受甲基化的抑制,提示5-Aza-CdR可使γ-catenin基因去甲基化而抑制肾癌OS-RC-2细胞株增殖,并促进其凋亡.
关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 肾癌 γ-连环蛋白 细胞凋亡 甲基化 -
5-氮杂-2'-脱氧胞苷抑制肾癌细胞增殖及逆转γ-catenin基因甲基化作用
目的:研究甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肾癌OS-RC-2细胞生长的抑制作用及对γ-catenin基因甲基化状态的影响,初步探讨肾癌发病机制及临床治疗的可行性.方法:不同浓度5-Aza-CdR处理肾癌细胞OS-RC-2后,采用倒置显微镜观察5-Aza-CdR处理OS-RC-2肾癌细胞株前后细胞形态学变化;四唑蓝(MTT)比色观察细胞经药物处理前后的生长活性:流式细胞仪检测5-Aza-CdR对OS-RC-2肾癌细胞株凋亡的影响;Western blot检测5-Aza-CdR处理OS-RC-2肾癌细胞株后γ-catenin蛋白表达的变化;甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测细胞处理前后γ-catenin基因的甲基化状态.结果:形态学观察显示,用药后癌细胞体积缩小,核固缩,染色质凝聚成块;5-Aza-CdR明显抑制肾癌细胞OS-RC-2的生长;细胞凋亡率增高;药物处理后γ-catenin蛋白表达恢复;未经5-Aza-CdR处理的OS-RC-2细胞中γ-catenin基因肩动子区域高甲基化,经10-5 mol/L 5-Aza-CdR处理72 h后γ-catenin基因启动子区域高甲基化得到逆转.结论:5-Aza-CdR能有效逆转肾癌OS-RC-2细胞γ-catenin基因的异常甲基化,恢复γ-catenin蛋白表达,诱导肾癌细胞凋亡.
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5-Aza-CdR对肺癌A549细胞DNA甲基转移酶活性的影响
目的:研究5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycitydine,5-Aza-CdR)处理肺癌细胞株A549后,DNA甲基化转移酶(DNA methyltransferase,Dnmts)转录水平及其活性的变化,以及细胞生长状态的改变.方法:5-Aza-CdR处理A549细胞株,半定量RT-PCR检测癌细胞Dnmts的mRNA转录水平;酶活性连续循环比色法检测Dnmts的催化活性:流式细胞仪(FCM)及MTT法检测细胞的生长状态.结果:Dnmts的转录水平5-Aza-CdR处理前后水平分别为:Dnmt1(1.23±0.253,1.15±0.166)、Dnmt3b(0.760±0.164,0.649±0.181),两组无显著性差异(P>0.05).两组Dnmts催化活性分别为:Dnmtl(0.195±0.030,0.153±0.041)、Dnmt3b(0.172±0.029,0.116±0.050),药物组催化活性下降(P<0.05).FCM结果提示细胞周期阻滞于G1/G0期,两组凋亡率分别为0.62±0.56,7.60±1.92,凋亡率明显增加(P<0.01).MTT结果示药物组细胞生长受抑制.结论:5-Aza-CdR抑制A549细胞株增殖,促进凋亡,对Dnmts的抑制作用是通过降低催化活性实现,不影响其转录水平.
关键词： 肺癌 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 甲基化 DNA甲基化转移酶 -
5-氮杂-2'-脱氧胞苷对OS-RC-2肾癌细胞生物学行为的影响
目的 研究5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对OS-RC-2肾癌细胞株增殖、凋亡的影响.方法 用不同浓度10-7、10-6、10-5、10-4mol/L的特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR处理OS-RC-2肾癌细胞株,未经药物处理细胞作对照(对照组).透射电镜观察5-Aza-CdR处理OS-RC-2肾癌细胞株前后细胞形态学变化.MTT检测OS-RC-2肾癌细胞株抑制率.流式细胞仪检测OS-RC-2肾癌细胞株凋亡.以甲基化特异性PCR(MSP)检测细胞处理前后γ-catenin基因的甲基化状态.结果 用药后细胞器肿胀、线粒体空化、溶酶休增多,核质不均匀.5-Aza-CAR明显抑制OS-RC-2肾癌细胞的增殖,而且与药物浓度及作用时间在一定范围内成正相关(P<0.05).10-7,10-6,10-7mol/L5-Aza-CdR处理细胞后,细胞凋亡率增高[(3.74±0.34)%,(7.85±0.59)%;(12.93±1.32)%vs.对照组(0.86±0.08)%],成剂量依赖性(P<0.01);作用3 d后,在10-6mol/L时细胞周期中处于G0/G1期的显著增多(P<0.05),细胞周期阻滞于G0/G1期.未经5-Aza-CdR处理的OS-RC-2细胞中γ-catenin基因启动子区域高甲基化,经5-Aza-CdR105mol处理72 h后,γ-catenin基因启动子区域高甲基化得到逆转.结论 5-Aza-CdR能消除γ-catenin基因启动子甲基化状态,使其重新表达而抑制OS-RC-2肾癌细胞株的生长,使细胞周期阻滞于G0/G1期,并促进其凋亡.
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5-氮杂-2'-脱氧胞苷对 HepG2中 SLIT2甲基化和细胞恶性表型影响的实验研究
目的 评估5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2dc)对人肝癌细胞系 HepG2 中抑癌基因 SLIT2 甲基化状态和细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,探讨SLIT2基因在肝癌中的作用及5-aza-2dc的体外抑制肝癌的效应.方法 实验分为对照组和加药组,分别应用MSP、MTT、划痕实验、侵袭实验、Annexin V-FITC/PI 双染实验检测细胞中 SLIT2 基因的甲基化状态和细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡的变化.结果 5-aza-2dc 处理后,HepG2 细胞株中 SLIT2 基因甲基化程度得到一定程度逆转,并呈现出剂量依赖性;划痕实验48 h后,对照组肝癌细胞明显向划痕的中央迁移,而药物处理组肝癌细胞迁移受到抑制;侵袭实验24 h后,加药组细胞的侵袭能力较对照组降低(P<0.05); Annexin V-FITC/PI双染实验显示加药组细胞凋亡率显著增加(P<0.01).结论 5-aza-2dc对HepG2 细胞有抑制细胞增殖、促进凋亡及抑制细胞迁移和侵袭能力等作用,其中对抑制细胞迁移和侵袭的作用可能是通过逆转 SILT2 基因甲基化、恢复其表达来实现的.
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DNA去甲基化药物对肝癌SMMC-7721细胞株IGF2印迹状态及表达的影响
目的:研究 5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对肝癌SMMC-7721细胞株IGF2印迹状态及表达的影响.方法:用终浓度为10 μmol/L 的5-氮杂-2′-脱氧胞苷处理培养的SMMC-7721细胞,不含5-Aza-CdR培养液培养的细胞作为对照组;IGF2基因的印迹状态使用PCR-RFLP方法检测;IGF2基因的表达使用半定量RT-PCR确定.结果:SMMC-7721细胞中IGF2基因处于母源印迹状态,为杂合子;5-氮杂-2′-脱氧胞苷处理后IGF2基因的mRNA表达量降低,电泳条带的半定量分析显示处理和对照之间的差异具有统计学意义(P<0.01),RFLP结果未见印迹丢失.结论:胞嘧啶去甲基化药物能够改变SMMC-7721细胞中IGF2的甲基化状态,降低IGF2 mRNA的表达量,但并不引起IGF2基因完全失表达.
关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 肝癌 胰岛素样生长因子2 基因组印迹 -
探究5-Aza-CdR对肺癌A549细胞DNA甲基转移酶活性的影响
目的 探究5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对肺癌A549细胞DNA甲基转移酶活性的影响,观察DNA甲基转移酶转录水平和活性及细胞生长状态的改变情况,以此为临床肺癌疾病的基因治疗提供相关依据.方法 选取A549细胞株经5-Aza-CdR处理后,采用半定量RT-PCR、活性酶连续循环比色法、流式细胞仪(FCM)和MTT法分别对Dnmts的mRNA转录水平、Dnmts的催化活性、 细胞生长状态进行检测,分析A549细胞Dnmts转录水平及活性、A549细胞系增殖及周期变化和凋亡与5-Aza-CdR的关系.结果 对照组和药物组Dnmt1和Dnmt3b的mRNA表达水平的对比,差异无统计学意义(P>0.05);两组细胞Dnmt1和Dnmt3b活性的对比具有统计学差异(P<0.05);两组吸光度值的对比,差异具有统计学意义(P<0.05);两组G0/G1期和S期细胞数的对比,差异具有统计学意义(P<0.05),凋亡率的对比,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 5-Aza-CdR对A549细胞株的增殖具有抑制作用,可促进细胞凋亡,其通过降低催化活性发挥对Dnmts的抑制作用,对其转录水平无影响.
关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 DNA甲基转移酶 肺癌
