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生姜提取物体外细胞毒性评价及其对环磷酰胺和
生姜又名白姜、均姜,为姜科植物姜的新鲜根茎.其性味辛、温,具有解表散寒、化痰止咳之功效[1].含姜烯、水芹烯、姜酮、龙脑、姜醇等物质,有抑菌、驱自由基的作用[2].目前有研究表明姜精油对果蝇的急性毒性较强,但对哺乳动物的毒性研究未见详细报道[3].
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补气活血类中药对血管内皮细胞增殖的影响
目的：观察补气活血类中药含药血清对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）增殖的影响，并初步筛选出对HUVEC增殖能力具有较明显促进、抑制作用的药物。方法：建立HUVEC的体外培养的细胞模型，采用血清药理学方法，将10种活血化瘀药分别与3种补气药按照1：2、1：1、2：1三种不同的配比两两配伍组合，组成90对补气活血药药对，制备90对补气活血药药对和10种活血化瘀药的含药血清。应用MTT比色法观察不同活血化瘀药和补气活血药药对的含药血清对HUVEC增殖能力的影响。结果：与空白血清组相比较，大部分的活血化瘀药、补气活血药对含药血清对HUVEC的增殖能力都有较为显著的影响（促进或者抑制），其中丹参组、川芎组、赤芍组，丹参黄芪（1：2）组、丹参黄芪（1：1）组、川芎黄芪（1：2）组可明显促进HUVEC增殖能力（P<0.05或P<0.01）；三棱组、莪术组、丹皮组、莪术黄芪（2：1）组、三棱人参（2：1）组、莪术黄芪（1：1）组可明显抑制HUVEC增殖（P<0.05或P<0.01）。结论：不同的活血化瘀药和补气活血药配伍组成对HUVEC的增殖能力具有不同的促进或抑制作用，这可能为这些药物在细胞层面上促进或抑制血管生成的作用机制。
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硫化氢对体外大鼠肝星状细胞内Ca2+浓度变化及细胞增殖的影响
目的 研究硫化氢(H2S)对大鼠肝星状细胞-T6(HSC-T6)Ca2+浓度、细胞增殖的影响及其机制. 方法 活化HSC-T6用含10%小牛1血清DMEM培养液制备为1×105个肝星状细胞(HSC)悬液.钙离子荧光探针Fluo-3/AM负载细胞后,在不同刺激条件下,利用激光扫描共焦显微镜动态扫描HSC-T6细胞内Ca2+荧光强度(FI)变化,FI表示细胞内Ca2+浓度.四唑盐比色法,观察不同浓度H2S供体--NasH对HSC-T6细胞增殖的影响. 结果 低浓度H2S(100μmol/L)明显降低HSC-T6细胞内Ca2+浓度(P<0.05),而细胞增殖增加(增殖率为116%);KATP通道阻断剂--格列本脲可阻断H2S的作用.高浓度H2S(Immol/L)刺激HSC-T6细胞内Ca2+浓度增加,但细胞增殖无明显变化(P>0.05). 结论 低浓度H2S通过激活HSC-T6细胞KATP通道降低绌胞内Ca2+浓度,可能通过调节细胞氧化应激促进细胞增殖;高浓度H2S刺激HSC-T6细胞内Ca2+浓度增加.提示H2S在肝硬化门脉高压症的发生机制中具有双重作用.
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铜蒸气激光照射下11种光敏剂杀伤强度的比较
目的检测目前国内常用的和中国科学院化学研究所合成的共11种光敏剂,比较它们对细胞杀伤效应的强弱,筛选出适于临床应用的新型光敏剂.方法将乳腺癌MDAMB 543细胞接种于96孔培养板,然后加入用RPMI 1640培养基配置的不同浓度的不同光敏剂,4 h后照光,24 h后用四唑盐比色法测定细胞存活率.以血卟啉衍生物(HpD)作为标准对照.结果在510.6 nm和578.2 nm的混合光照射下,竹红菌素A(HA)、竹红菌素B(HB)和5,15-二芳基-2,3-二羟基卟吩(DPCOH)比HpD有更强的杀伤效应.血啉甲醚(HMME)的杀伤效应是HpD的1/2左右.其他的一些化合物在此波长条件下杀伤效应较差,其中一些是因其溶解性不好而不能完全发挥其杀伤效能.结论竹红菌素类光敏剂和DPCOH是很有应用开发前景的新型光敏剂.
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结肠癌Lovo细胞RUNX3基因的表达与其增殖及凋亡的关系
目的:探讨5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人结肠癌Lovo细胞增殖凋亡及抑癌基因RUNX3表达的影响.方法:用特异性甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR0.4,4,40 μmol/L处理人结肠癌细胞株Lovo 3d,继续常规培养5d后,采用四唑盐法(MTT)比色法观察细胞经药物处理前后的生长活性.以半定量RT-PCR检测细胞处理前后抑癌基因RUNX3 mRNA的表达,以甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测细胞处理前后RUNX3的甲基化状态,应用流式细胞仪进行细胞凋亡率的检测.结果:与对照组相比,0.4,4,40 μmol/L的5.Aza-CdR处理细胞后.细胞RUNX3mRNA的相对表达量(0.46±0.06,0.71±0.06,0.84±0.07 vs 0,P＜0.01)和细胞凋亡率均增高(10.95%±2.09%,17.61%±1.51%,26.60%±1.89%vs 2.92%±0.93%,P＜0.01).呈剂量依赖性(F=168.4,F=145.7),结肠癌Lovo细胞生长速率下降,RUNX3 mRNA重新表达,其基因启动子区域部分甲基化.结论:5-Aza-CdR可逆转RUNX3启动子高甲基化状态,抑制细胞生长,诱导部分细胞凋亡.
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灵芝孢子粉对人肝癌细胞HepG2及裸鼠移植瘤生长的抑制作用
目的:研究灵芝孢子粉对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用.方法:运用MTT法研究灵芝孢子粉水溶性成份在体外对HepG2细胞的抑制作用,并利用裸小鼠的移植瘤模型研究灵芝孢子粉在体内对HepG2细胞的生长抑制作用.HE染色观察肝癌组织结构和细胞形态改变.结果:TMTT实验结果表明灵芝孢子粉对HepG2细胞的IC50值随作用时间增加而减小,72 h达到低,为2.14 g/L.体内抑瘤实验结果显示灵芝孢子粉为2000 mg/kg时,对裸小鼠移植瘤的抑制率为57.0%.镜下观察灵芝孢子粉治疗组肿瘤坏死组织较多,细胞异型性较小.结论:高浓度及高剂量的灵芝孢子粉具有抑制肿瘤细胞生长的作用.
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免疫抑制剂对人胰岛细胞活性的影响
目的了解免疫抑制剂对人胰岛细胞活性的影响,探讨其在胰岛移植中的作用.方法体外分离、纯化人胰岛细胞,与不同浓度、不同种类的免疫抑制剂共同培养后,通过MTT法检测细胞活性.结果低浓度的雷帕霉素对胰岛细胞活性没有影响,高浓度(≥1ng/ml)的雷帕霉素显著降低胰岛细胞活性.赛尼哌和FTY720无论是高浓度还是低浓度对胰岛细胞活性均无影响.结论雷帕霉素对胰岛细胞有毒性作用,其程度与雷帕霉素浓度有关,赛尼哌和FTY720对胰岛细胞无明显毒性作用.
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采用四唑盐比色法观察转化生长因子-β1与阿托伐他汀对人心肌成纤维细胞增殖的影响
目的：探讨采用四唑盐比色法（MTT）观察转化生长因子-β1和阿托伐他汀对人心肌成纤维细胞增殖生长的影响。方法采用组织块培养法培养人心肌成纤维细胞，将其按照培养方法分为观察组（又分为转化生长因子-β组、阿托伐他汀组、阿托伐他汀＋10 ng/ml转化生长因子-β1干预组）和对照组，采用MTT法观察不同浓度的转化生长因子-β1、阿托伐他汀对人心肌成纤维细胞增殖变化。结果阿托伐他汀浓度为0 umol/L 时 OD 值为（0.392±0.021）、浓度为1μmol/L 时能够达到小有效浓度，OD 值为（0.361±0.010），随培养基的药物浓度增高抑制作用加强；与对照组（OD值为0.315±0.009）相比浓度除0.1μmol/L外，其余浓度差异有统计学意义（P＜0.05）；转化生长因子-β1浓度为1 ng/ml时能够达到促进人心肌成纤维细胞生长有效浓度，且浓度越大OD值也随之增加（0.1 ng/ml浓度除外）且和对照组（OD值为0.369±0.025）相比差异有统计学意义（P＜0.05）；10 ng/ml转化生长因子-β组OD值为（0.870±0.051）高于10μmol/L阿托伐他汀组（0.330±0.110）和10μmol/L阿托伐他汀＋10 ng/ml转化生长因子-β1干预组（0.651±0.040），差异有统计学意义（P＜0.05）。结论转化生长因子-β1能够促进人心肌成纤维细胞增殖，而阿托伐他汀抑制人心肌成纤维细胞增殖，并且能拮抗转化生长因子-β1对人成纤维细胞的增殖。
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纳米羟基磷灰石人工心脏机械瓣膜细胞相容性的研究
目的 探讨利用脉冲激光沉积(PLD)方法在人工心脏机械瓣膜上沉积的纳米相羟基磷灰石(HA)薄膜的组织相容性,为人工心脏瓣膜的构建提供理想的支架薄膜材料.方法 将传代的人血管内皮细胞制成细胞悬液接种在HA材料上,置含5%(V/V)CO2、37℃的恒温培养箱内静态培养3周.分别在培养3、7、14和21 d后取出部分材料,用2.5%戊二醛固定,乙醇梯度脱水,临界点干燥、喷金,于扫描电子显微镜(SEM)下观察细胞在材料上的附着情况.用四氮唑盐比色(MTF)法测定血管内皮细胞与材料复合培养的增殖能力.结果 扫描电镜观察复合培养,见HA材料的表面有细胞附着且数目逐渐增多,到第21天时可见细胞融合成片,并将材料表面覆盖,部分区域有细胞外基质形成.MTT法评价材料对血管内皮细胞的细胞毒性,见细胞增殖未受到明显影响,生长良好.结论 HA对血管内皮细胞的增殖和分化功能无明显影响,对细胞无明显毒性,具有良好的生物相容性,可以作为心脏瓣膜材料安全应用.
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牙科氧化锆氧化铝陶瓷复合材料的生物相容性
背景:口腔的生理环境十分复杂,口腔修复体材料长期接触弱酸性体液,处在物理、化学、生物、机械等因素的复杂影响之中.因此,对口腔材料进行生物相容性的评价是进入临床实验前的重点研究内容,也是保证临床安全的重要技术指标.目的:初步评价氧化锆氧化铝陶瓷复合材料的生物相容性.方法:实验分6组:氧化锆氧化铝(1∶1)1 00％浸提液组、氧化锆氧化铝(1∶1)50％浸提液组、氧化锆氧化铝(4∶1)100％浸提液组、氧化锆氧化铝(4∶1)50％浸提液组,以及体积分数0.64％苯酚的阳性对照组和100％新鲜培养液的阴性对照组.根据GB-T16886 15-2003医疗器械生物学评价标准和要求进行急性溶血实验、体外细胞毒实验,分别测试以上6组浸提液对兔血细胞、L-929小鼠成纤维细胞的影响.结果与结论:各浓度实验组吸光度值与阴性对照组间均差异无显著性意义(P＞0.05),所有实验组的细胞毒性评级均为0-1级;氧化锆氧化铝(1∶1)100％浸提液组、氧化锆氧化铝(4∶1)100％浸提液组溶血率分别为1.27％,2.4％,小于公认的5％的安全标准.结果表明,氧化锆氧化铝(1∶1),(4∶1)陶瓷复合材料急性溶血实验阴性,体外细胞毒实验阴性,均具有良好的细胞相容性和血液相容性.
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纳米羟基磷灰石薄膜与人脐静脉血管内皮细胞的增殖
背景：合肥大学材料系和中国科学院安徽光学密精机械研究所联合研究应用脉冲激光沉积合成技术制备出一种新型的纳米羟基磷灰石人工心脏机械瓣膜。目的：观察纳米羟基磷灰石人工心脏机械瓣膜与人脐静脉血管内皮细胞的相容性。方法：将体外分离培养的传2-4代人脐静脉血管内皮细胞悬液接种于纳米羟基磷灰石人工心脏机械瓣膜上，培养3，7，21 d后，扫描电子显微镜下观察细胞在纳米羟基磷灰石人工心脏机械瓣膜上的生长情况。分别采用纳米羟基磷灰石人工心脏机械瓣膜常温浸提液、纳米羟基磷灰石人工心脏机械瓣膜高温浸提液、高密度聚乙烯浸提液及苯酚溶液培养人脐静脉血管内皮细胞，72 h后采用MTT法检测细胞增殖情况。结果与结论：扫描电镜观察培养3 d时，人脐静脉血管内皮细胞呈梭形或多边形，伸出突起黏附于纳米羟基磷灰石人工心脏机械瓣膜上；7 d时，可见瓣膜表面细胞伸展充分，连接融合；21 d时，细胞成片融合，牢固覆盖于瓣膜表面，部分区域形成细胞外基质。MTT检测结果显示，纳米羟基磷灰石人工心脏机械瓣膜对人脐静脉血管内皮细胞无细胞毒性，具有良好的细胞相容性。
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ADAM28反义核酸对人牙囊细胞增殖和碱性磷酸酶的影响
目的:研究ADAM28反义核酸(AS-ODN)对人牙囊细胞(HDFCs)增殖和碱性磷酸酶(AKPase)活性的影响.方法:采用细胞培养、基因转染、四唑盐(MTT)比色法和酶动力学方法,检测ADAM28反义核酸对牙囊细胞增殖、分化和影响碱性磷酸酶活性的可能机制.实验数据采用单因素方差分析的q检验(SNK)进行统计学分析.结果:ADAM28反义核酸成功转染人牙囊细胞,MTT和AKPase活性检测显示:ADAM28 AS-ODN组细胞增殖和AKPase活性均显著低于S-ODN组和空白对照组,其中MTT检测的组间P值分别为0.0002、0.0001,P均＜0.01;AKPase检测的组间P值分别为0.0007、0.0003,P均＜0.01,即ADAM28反义核酸可显著抑制HDFCs的增殖和AKPase的活性.结论:ADAM28可能通过参与Notch信号途径来促进牙囊细胞的增殖和分化.
关键词： 金属蛋白酶解离素28 反义核酸 牙囊细胞 碱性磷酸酶 四唑盐比色法 -
MTT法检测94例胃癌体外药敏
四唑盐比色法(MTT法)是一种测定细胞代谢和增殖活性的技术.其原理是利用活细胞内的线粒体脱氢酶将黄色可溶性的四唑盐[3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5二苯基四氮唑溴盐,简称MTT]还原为蓝紫色不溶性的甲臢(For-mazan),通过测定细胞内脱氢酶活性的改变可客观地反映细胞的变化.
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维生素K2诱导白血病细胞凋亡的体外研究
目的:研究维生素K2(VK2)对白血病细胞生长及凋亡的诱导作用.方法:通过四唑盐比色法、镜下观察凋亡细胞形态及流式细胞仪检测细胞早期凋亡率研究维生素K2对急性早幼粒细胞白血病细胞株(NB4)及白血病患者骨髓单个核细胞(BMNC)的影响.结果:NB4细胞经VK2作用后增殖受到抑制.VK2作用NB4细胞72h后,部分细胞呈现凋亡细胞的特征.5、10、50μmol/L VK2作用NB4细胞72h后细胞早期凋亡率分别为8.06%、20.02%、29.60%,与对照组比较及两两比较差异均有极显著性(P<0.01).10μmol/L VK2作用白血病细胞及正常对照BMNC 48h后,正常人及淋系白血病患者BMNC细胞早期凋亡率较空白对照组无明显增高(P>0.05),慢性髓系白血病患者BMNC早期凋亡率较空白对照组增高(P<0.05),急性髓系白血病患者BMNC早期凋亡率较空白对照组明显增高(P<0.01).结论:VK2对白血病有生长抑制作用,可选择性诱导髓系白血病细胞凋亡,且呈剂量依赖性.
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UVB诱导人皮肤成纤维细胞的SMP30基因表达变化
目的 研究经过不同剂量紫外线中波(UVB)照射不同时间后正常人皮肤成纤维细胞(HSF)中衰老标记蛋白30 (SMP30)基因的表达改变,探讨UVB诱导HSF衰老可能的机制. 方法 以未采用UVB照射的HSF为对照组,经过不同剂量UVB(100、200、300 mJ/cm2)处理不同时间(1、2、3 d后)的HSF为实验组,四唑盐比色法(MTT)观察HSF的生长活性,流式细胞仪检测HSF的凋亡率,实时荧光定量PCR技术(FQ-PCR)检测实验组和对照组中SMP30基因的表达. 结果 不同照射时间组和不同剂量组之间,随着UVB照射时间延长和剂量的增加,HSF细胞增殖抑制率逐渐增高,细胞的凋亡率也逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05); UVB处理后实验组中SMP30基因的相对表达水平(0.66± 0.19)明显低于对照组(1.15± 0.11),差异有统计学意义(P<0.01);SMP30基因的表达水平随着UVB作用的时间和剂量的不同而变化,呈明显的时间依赖性和浓度剂量依赖性,不同照射时间组和不同剂量组之间基因表达的差异有统计学意义(P<0.05). 结论 经过不同剂量UVB处理不同时间后可以抑制HSF细胞生长,促进细胞凋亡,大剂量长时间UVB照射可诱导HSF发生衰老改变.
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新型压电陶瓷材料钛酸铋钠的体外生物相容性研究
目的：通过体外实验对钛酸铋钠( BNT)基无铅压电陶瓷进行生物相容性评价。方法：将BNT组、铌酸锂钠钾组、聚甲基丙烯酸甲酯组及空白对照组与人成骨样细胞进行复合培养，应用扫描电镜、四唑盐比色法观察材料对成骨样细胞形态及增殖的影响。结果：成骨样细胞在实验材料上可很好地黏附、增殖和生长。 BNT组在实验第1~9天光密度值均高于铌酸锂钠钾组、聚甲基丙烯酸甲酯组和空白对照组(P<0.01)。结论：新型钛酸铋钠基无铅压电陶瓷初步显示了良好的体外生物相容性，有望成为一种新的生物材料。
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顺铂与 DMPIBPA 合用体外抗肿瘤作用研究
目的：合成 Z －2－（3，5－二甲氧苯基）－3－（4－异丁氧苯基）丙烯腈（DMPIBPA）并初步研究与顺铂（DDP）联合应用时的抗癌活性。方法以3，5二甲氧基苯甲酸为原料合成 DMPIBPA，后用 DDP、DMPIBPA 及 DDP＋DMPIBPA 分别处理人结肠癌细胞（HCT116）及人正常肝细胞（L －02）细胞，其细胞增殖的抑制程度用四唑盐（MTT）比色法测定。结果在 HCT116细胞中，100μmol·L －1 DMPIBPA （抑制率为35．3％±5．0％）与250μmol·L －1 DDP（抑制率为28．9％±1．3％）联合应用时其抑制率为65．4％±2．0％，明显强于单用，而在 L －02细胞中仅为36．2％±0.5％。结论联合应用 DDP 及 DMPIBPA 时对 HCT116细胞有选择性协同增殖抑制活性，而对L －02无作用。
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组织工程血管材料体外细胞毒性评价实验研究
目的:为构建组织工程化血管选择支架材料,对材料进行体外细胞毒性评价.方法:以L929为实验细胞,采用四唑盐比色法、琼脂覆盖法对自行合成的4种构建组织工程血管的支架材料进行体外细胞毒性评价实验.结果:以辛酸亚锡为催化剂合成的聚氨酯、聚羟基烷酸酯、聚丁二酸丁二酯,经四唑盐比色法及琼脂覆盖法实验为合格的医用材料,四唑盐比色法中吸光度值与阴性对照材料比较差异无统计学意义(P>0.05).以二月桂酸二丁基锡为催化剂合成的聚氨酯经四唑盐比色法及琼脂覆盖法实验为不合格的医用材料,四唑盐比色法中吸光度值与阴性对照材料比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:四唑盐比色法、琼脂覆盖法在评判生物材料毒性方面,是快速、简便、有效的方法.以辛酸亚锡为催化剂合成的聚氨酯、聚羟基烷酸酯、聚丁二酸丁二酯可用于进一步的实验研究.
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表皮生长因子对卵圆细胞p21ras蛋白表达的影响
卵圆细胞(OVC)为肝脏的干细胞,与肝癌发生关系密切[1,2].我们应用Western blot法通过对大鼠肝脏卵圆细胞在表皮生长因子(EGF)干预下p21ras表达的影响进行比较分析,同时运用四唑盐比色法(MTT)法观察细胞活力,以揭示EGF对卵圆细胞活性及p21ras蛋白表达变化的影响.
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促炎性细胞因子诱导NF-κB激活促进神经细胞凋亡机制
目的:探讨细胞凋亡机制中核转录因子κB(NF-κB)的激活及信号转导机制.方法:用IL-1β,TNFα处理大鼠皮层培养的神经细胞,采用四唑盐比色法(MTT),乳酸脱氢酶释放率及免疫荧光方法反映细胞生存力和损伤指标,western blot分析检测NF-κB,JNK,ERK,Hsp27蛋白的表达水平.
