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抗血小板溶栓素的生物相容性及免疫毒性实验研究
抗血小板溶栓素(Anti-Platelet Thrombolysin,简称抗栓素)是从皖南尖吻蝮蛇(Agkistrodon acutus)毒液中提纯的具有抗凝、去纤、溶栓和抗血栓形成等疗效的一类新药[1].已有研究报道不同种类、不同产地、不同的分离纯化工艺纯化的蛇毒制剂,其疗效和毒性具有较大的差异[2],且已有资料报导蝮蛇抗栓素可致过敏反应[3].为了解采用新的分离纯化工艺纯化制备的抗血小板溶栓素对机体有无局部刺激、降压、致热以及溶血等毒副作用,以及反复使用后对机体是否会产生明显的速发型或迟发型致敏毒副作用及其小致敏剂量,本研究采用多种不同种属的动物(小鼠、大鼠、豚鼠、家兔和猫)对抗血小板溶栓素进行了局部刺激试验、生物相容性以及免疫毒性实验研究,以便为本药的临床安全应用提供参考依据.
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溶栓素样品精纯方法的研究
目的建立一种合适的纯化方法,以利于进一步研究溶栓素的结构分析和酶化学性质.方法利用电泳技术提纯,用S2251作为底物验证纯化前后样品的活性变化,用高效液相色谱(HPLC)技术检验纯化效果.结果纯化前后样品活性无变化,纯度得到进一步提高.结论这是一种切实可行的纯化方法,解决了普通实验室样品需要高度纯化的难题.
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溶栓素的性质及.生物活性研究
目的:研究溶栓素的理化性质、作用机理及其体内溶栓作用.方法:采用不连续系统SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定溶栓素的分子量,纤维蛋白平板法测定溶栓素的体外活性和研究溶栓素的作用机理,不同温度和pH值下测定体外溶栓作用以确定溶栓素的适温度和pH值,大鼠颈动脉血栓形成法测定溶栓素的体内溶栓效果.结果:溶栓素的相对分子量为30 680,适温度是45℃,适pH值为7.8,溶栓素的作用机理与人血纤溶酶相似,有直接纤溶作用,溶栓素的体内溶栓作用在同等剂量的条件下优于尿激酶.结论:溶栓素较适合作溶栓药物.
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亲和层析法纯化溶栓素
目的:探讨亲和层析纯化溶栓素的方法.方法:采用高碘酸钠法制备溶栓素抗体的亲和层析介质纯化溶栓素.结果:提纯的溶栓素经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定为一条带,活性回收率为49.5%.结论:亲和层析的高碘酸钠法是纯化溶栓素的一种分离速度快、特异性强、经济、安全可靠的方法,并适合于大规模纯化.
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溶栓素的纯化研究
目的：研究溶栓素的纯化工艺。方法：采用超滤法截留分离，强阴离子交换层析去除核酸，弱阴/阳离子交换层析和疏水层析组合法精细分离溶栓素。结果：聚丙烯酰胺凝胶电泳考马斯亮蓝染色法结合显示终纯化产物为一条染色带，纯化倍数为144.83，回收率为38.66%。结论：溶栓素的纯化工艺基本体现了工业生产工艺的特点，具有一定的实用性。
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溶栓素的分离纯化及特性测定
目的研究一种高效分离纯化溶栓素的方法并测定其pI和相对分子质量(Mr).方法采用阴、阳离子交换色谱等技术分离纯化溶栓素并通过对缓冲体系的pH值、离子强度的调节及对初始供试品pH值的调节来优化纯化过程,以等电聚焦聚丙烯酰胺凝胶电泳(IEF-PAGE)和SDS-PHGE方法分别测定纯品的pI和Mr.结果溶栓素达到简捷、高效分离纯化的目的,电泳鉴定为一条蛋白质带,并测定溶栓素的pI为4.50、Mr为35 100.结论溶栓素的纯化工艺达到高纯度纯化程度,为进一步研究溶栓素奠定了基础.
关键词： 溶栓素 等电点 等电聚焦聚丙烯酰胺凝胶电泳 SDS-PAGE 色谱
