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三丁基锡对BRL-3A细胞活力以及凋亡的影响
三丁基锡(tributyltin,TBT),已经广泛应用于农业杀虫、材料防腐和海洋船体涂料等.由于TBT可以从涂料释放到水中造成污染,不仅毒害水生生物,破坏生态环境,而且不可忽视的是它们都在食用水生生物机体内富集,这些生物被食用可造成对人体的危害,因此引起了研究者们的关注.国外已有很多文献报道了TBT诱导凋亡的事实[1-2],但是国内在此领域的研究较少,本实验采用正常大鼠肝细胞(BRL-3A细胞),研究TBT对其细胞活力的影响和凋亡的诱导作用.
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人胰岛素抑制大鼠肝细胞系BRL－3 A凋亡且促增殖
目的：探讨人胰岛素对体外培养的大鼠肝细胞BRL－3 A增殖和凋亡的影响。方法人胰岛素作用于BRL－3A后，用MTT法检测细胞活力，流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期，qRT－PCR检测相关基因的表达。结果人胰岛素呈剂量依赖性地促进BRL－3A增殖（P＜0．05或P＜0．01）；500 nmol／L人胰岛素处理3 d后，处于G0／G1期的细胞比例显著下降（P＜0．05）；促凋亡基因BAX表达下调（P＜0．05），而促细胞增殖基因CCNA2表达上调（P＜0．05）。结论人胰岛素可通过下调BAX表达和上调CCNA2表达，从而抑制大鼠肝细胞BRL－3A凋亡，促进细胞增殖。
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MiR-382促进大鼠正常肝细胞BRL-3A增殖
目的 探讨miR-382对大鼠正常肝细胞BRL-3A增殖和凋亡的影响.方法 BRL-3A细胞瞬时转染miR-382的模拟物和抑制物48 h,MTT法测定细胞活性;流式细胞术检测细胞周期;Real-time PCR检测细胞增殖和凋亡相关基因的表达情况.结果 在大鼠BRL-3A细胞中,转染模拟物可以显著增加miR-382的表达,转染抑制物可以显著降低miR-382的表达(P＜0.01).MTT检测表明,miR-382过表达后,BRL-3A细胞活性明显提高;流式细胞术检测表明,miR-382过表达组S期的细胞数明显增加,而miR-382干涉组S期的细胞数明显减少;用Real-timePCR检测细胞增殖/凋亡相关基因mRNA表达水平表明,miR-382过表达后,BRL-3A细胞增殖相关基因增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2和Ccnd1的mRNA表达水平上调,细胞凋亡相关基因Caspase-3和Bax的mRNA表达水平下调,而miR-382干涉组与上述结果相反.结论 miR-382通过促进细胞增殖相关基因表达,抑制细胞凋亡相关基因表达而促进大鼠正常肝细胞BRL-3A增殖.
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地塞米松对大鼠肝细胞BRL-3A增殖和凋亡的影响
目的 探讨地塞米松对体外培养大鼠肝细胞BRL-3A增殖和凋亡的影响.方法 用不同浓度的地塞米松处理BRL-3A细胞,于12、24、48、72、120 h后用MTT检测地塞米松对BRL-3A细胞活性的影响,同时分别用Annexin V-FITC双染法、PI单染色法、实时定量-聚合酶链反应(Real-time PCR)等方法检测地塞米松对BRL-3A细胞周期和凋亡的影响.结果 MTT检测表明,地塞米松能够抑制BRL-3A细胞的活性;Annexin V-FITC双染法分析显示,地塞米松具有显著促进BRL-3A细胞凋亡的效果;PI单染色法检测细胞周期分布情况表明,地塞米松处理后的细胞与对照组相比增殖能力减弱;用Real-time PCR检测促细胞凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和促增殖基因Ccnd1和Jun的mRNA表达情况,结果显示,用地塞米松处理后的细胞中Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9均表达上调,而Ccnd1和Jun均表达下调,说明地塞米松能促进BRL-3A细胞的凋亡.结论 地塞米松可以促进BRL-3A细胞的凋亡,并抑制其增殖.
关键词： 地塞米松 BRL-3A细胞 流式细胞术 实时定量-聚合酶链反应 大鼠 -
TGF-β1对大鼠肝细胞系BRL-3A凋亡和细胞周期的影响
目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠肝细胞系BRL-3A凋亡和细胞周期的影响.方法:MTT法检测TGF-β1对细胞增殖的影响:将BRL-3A细胞分为6组,分别给予不同浓度的TGF-β1(0、2、4、6、8、10μg/L),检测各组细胞24、36、48 h时的增殖活性；进一步将BRL-3A细胞分为TGF-β1处理组和对照组,分别给予和不予TGF-β1(8μg/L),进行如下检测:流式细胞仪检测两组细胞24、36、48 h时的凋亡情况和细胞周期分布；实时定量RT-PCR检测两组细胞24、36、48 h时Cyclin E、Cdk-2、EGF、HGF、Bcl-2、c-Myc、MMP9、NF-κB基因的表达变化.结果:MTT结果显示,各浓度TGF-β1组在24、36、48 h时的细胞增殖活性差异无统计学意义；流式细胞仪分析结果显示,TGF-β1处理组24、36、48 h时的细胞凋亡率和细胞周期分布与对照组间的差异均无统计学意义；实时定量RT-PCR发现,TGF-β1处理组相对于对照组,Cyclin E mRNA、Cdk2 mRNA、EGF mRNA在24 h时分别下调至0.194±0.103、0.181±0.064、0.634±0.116倍,36 h时分别下调至0.379±0.173、0.457±0.123、0.619±0.112倍,48 h时分别上调至1.956±0.215、2.17±0.471、7.66±0.437倍；HGF mRNA在24、36、48 h时均明显下调,分别至0.152±0.068、0.146±0.053、0.158±0.061倍；Bcl-2mRNA在24、36 h时无统计学差异,48 h时上调至1.567±0.115倍；c-Myc mRNA、MMP9mRNA、NF-κBmRNA在3个时刻均上调,24h时分别至1.742±0.389、3.484±0.411、1.625±0.369倍,36 h时分别至2.292±0.361、1.563±0.323、1.486±0.494倍,48 h时分别至2.499±0.475、2.233±0.493、3.612±0.364倍.以上基因表达差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:大鼠肝细胞系BRL-3A对TGF-β1促凋亡和细胞周期阻滞作用的敏感性低下,可能与非Smads途径的激活,NF-κB、Bcl-2、c-Myc、MMP9表达的上调有关.
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白藜芦醇对大鼠肝癌细胞CBRH7919凋亡的诱导作用研究
目的 研究白藜芦醇对大鼠肝癌细胞CBRH7919凋亡的诱导作用.方法 将大鼠肝癌细胞CBRH7919分为2组:A组用80 μmol·L-1的白藜芦醇处理,B组加入等量的二甲基亚砜(DMSO);选取大鼠正常肝细胞BRL-3A作为对照组,也将细胞分为2组:C组用80 μmol·L-1的白藜芦醇处理,D组加入等量的DMSO;比较各组细胞的细胞活性、细胞周期变化、caspase-3、bcl-2和bax的表达水平和线粒体膜电位.结果 A组细胞的细胞活力较B组细胞的活力明显减弱(P＜0.05).A、B、C、D组细胞G0/G1分别为(35.67±3.38)％,(48.12±5.01)％,(41.98±4.05)％,(41.87±4.11)％.A组细胞处于G0/G1期细胞比例明显少于B组(P＜0.05),且2组细胞的caspase-3、bcl-2和bax的表达水平和线粒体膜电位有明显差异(P＜0.05).C组和D组细胞的细胞活性、细胞周期变化、caspase-3、bcl-2和bax的表达水平和线粒体膜电位无明显差异(P＞0.05).结论 白藜芦醇可有效诱导大鼠肝癌细胞CBRH7919的凋亡,其可能是通过调控Bcl-2/Bax的表达和引起线粒体膜的去极化发挥抗肿瘤作用.
关键词： 白藜芦醇 CBRH7919细胞 BRL-3A细胞 细胞凋亡 -
紫杉醇、多西紫杉醇对大鼠肝细胞株BRL-3A细胞缝隙连接功能的影响
目的 观察紫杉醇、多西紫杉醇对大鼠肝细胞株BRL-3A细胞缝隙连接(GJ)功能的影响.方法 采用磺酰罗丹明B比色法筛选紫杉醇和多西紫杉醇不影响BRL-3A细胞生长的作用浓度.采用细胞接种荧光示踪法与划痕标记染料示踪技术检测紫杉醇与多西紫杉醇作用BRL-3A后细胞GJ功能.结果 筛选出的紫杉醇、多西紫杉醇药物浓度均为0.01、0.1、0.5、1.0 μmol/L.与溶剂对照组相比,0.01、0.1、0.5、1.0 μmol/L紫杉醇处理的BRL-3A细胞Calcein荧光传递率降低(P均＜0.05),多西紫杉醇处理的BRL-3A细胞Calcein荧光传递率无明显变化.与溶剂对照组相比,紫杉醇作用细胞后LY向邻近细胞传递距离缩短,多西紫杉醇作用细胞后LY向邻近细胞传递距离无明显变化.结论 紫杉醇可显著抑制大鼠肝细胞株BRL-3A细胞GJ功能,而多西紫杉醇则不影响GJ功能.
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缝隙连接增强肿瘤坏死因子-α的肝细胞毒性
[目的]观察缝隙连接(GJ)功能改变对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)肝细胞毒性的影响.[方法]使用3种不同的方法:(1)GJ抑制剂预处理;(2)高低密度接种细胞;(3)小分子RNA转染抑制缝隙连接蛋白32(Cx32)表达等3种不同的方法抑制GJ的功能,观察不同浓度TNF-α作用不同时间后对肝细胞毒性的影响.[结果] TNF-α的肝细胞毒性呈浓度和时间依赖性;抑制剂预处理后,TNF-α的肝细胞毒性明显降低(P＜ 0.01);低密度接种细胞(细胞间无GJ形成)时,TNF-α的肝细胞毒性较高密度接种细胞(细胞间有GJ形成)明显降低(P＜0.01);抑制Cx32的表达后,TNF-α的肝细胞毒性弱显降低(P＜0.01).[结论]抑制由Cx32组成的GJ的功能后,TNF-α的肝细胞毒性明显降低,Cx32的表达对于TNF-α的肝细胞毒性作用具有重要的作用.
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对乙酰氨基酚对大鼠原代肝细胞及BRL-3A细胞的毒性作用比较
目的 建立大鼠原代肝细胞提取鉴定体系,比较对乙酰氨基酚(APAP)对大鼠原代肝细胞和永生化细胞BRL-3A的毒性作用.方法 采用胶原酶原位两步灌流法提取大鼠原代肝细胞,通过过碘酸雪夫染色(PAS)和肝细胞双核结构进行鉴定;CCK 8法测定APAP对大鼠原代肝细胞及BRL-3A细胞毒性作用的IC50;光学显微镜透射电镜观察APAP对2种细胞的损伤情况;全自动生化分析仪测定细胞上清AST、ALT、LDH、ALP、ALB、BUN、TP、GLU 8项生化指标的变化.结果 PAS糖原染色鉴定获取的大鼠原代肝细胞,双核结构,细胞存活率浮动在80％～95％;佳接种密度为60 000/cm2,在第3～5天为对数生长期;APAP作用于大鼠原代肝细胞24 h的IC50为18.03 mmol/L,95％置信区间为(17.28～18.81)mmol/L,作用于BRL-3A的IC50为20.05 mmol/L,95％置信区间为(18.99～21.17) mmol/L:透射电镜结果显示,在30 mmol/L APAP作用下,2种细胞细胞器肿胀,核膜破裂,细胞膜边界模糊不清;与对照组比较,大鼠原代肝细胞分泌的天冬氨酸氨基转移酶(AST)、尿素氮(BUN)、葡萄糖(GLU)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)随着APAP浓度增加产生显著变化,而BRL-3A细胞几乎所有的酶学指标变化均差异不显著.结论 与永生化细胞BRL-3A比较,大鼠原代肝细胞更能体现药物的肝脏毒性作用,但其体外培养存活时间较短;BRL-3A细胞缺少肝脏重要酶类,增加细胞内肝脏酶类是提升其作为肝脏毒性筛选模型的更好手段之一.
