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乙酰胆碱受体抗体IgG对大鼠隔斜角带核胆碱能神经元损害的研究
目的研究乙酰胆碱受体抗体(AChRAb)IgG 对大鼠隔斜角带核区胆碱能神经元的损害作用. 方法大鼠一侧隔斜角带核区注入重症肌无力(MG)患者 AChRAb IgG或等量健康人IgG,14 d后应用免疫组化方法测定隔斜角带核A、B、C 3区胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性神经元数目.结果大鼠内侧隔斜角带核区ChAT阳性细胞数实验组注射侧明显少于非注射侧(P<0.01),实验组注射侧明显少于对照组注射侧(P<0.001),实验组非注射侧明显少于对照组非注射侧(P<0.05);实验组注射侧与非注射侧ChAT阳性细胞比率明显少于对照组注射侧与非注射侧的比率(P<0.01).结论内侧隔斜角带核区定向注射 AChRAb IgG可损害该处胆碱能神经元,使其明显减少,且其毒性效力存在一定的距离效应.表明 AChRAb可被动转移损伤大鼠隔斜角带核区胆碱能神经元.
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骨髓间充质干细胞移植对血管性痴呆大鼠海马胆碱能系统的影响
目的 观察同种异体骨髓间充质干细胞(BMSCs)对血管性痴呆(VaD)模型大鼠海马胆碱能系统的影响.方法 体外分离、扩增大鼠BMSCs,并用BrdU标记.采用双侧颈总动脉结扎法(2-VO)制备VaD模型.将大鼠随机分为3组:A组(BMSCs移植组):于双侧颈总动脉结扎后4周经尾静脉注射BMSCs;B组(对照组):注射同等剂量PBS;C组(假手术组):暴露双侧颈总动脉但不结扎,不进行尾静脉注射.BMSCs注射后4周,采用免疫荧光染色观察大鼠海马BrdU标记细胞;测定海马结构内乙酰胆碱酯酶(ACHE)及胆碱乙酰转移酶(ChAT)的活性.结果 BMSCs移植后4周A组大鼠海马结构可见荧光标记的BMSCs;A、B组AChE和ChAT活性均较C组降低(P＜0.05),且A组较B组显著增强(P＜0.05).结论 静脉移植BMSCs可增强VaD大鼠海马胆碱能系统活性.
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D-半乳糖致老年性痴呆模型的评价和海马脑区甘丙肽表达研究
目的 运用生化、组织、行为学方法 评价D-半乳糖引发老年性痴呆(AD)小鼠模型,并测定其海马脑区甘丙肽的表达.方法 选用C57小鼠,每天按体重150 mg/kg经腹腔注射D-半乳糖,连续90 d,制备AD痴呆动物模型.运用免疫荧光法检测甘丙肽表达,以生化方法 检测乙酰胆碱酯酶(TChE)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)、谷胱甘肽还原酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、单胺氧化酶(MAO)等生化指标,通过透射电镜观察脑切片病理变化以及Y-型迷宫实验检测行为变化.结果 与对照组相比,AD模型组小鼠脑内ChAT酶活性明显降低,脑细胞线粒体破裂,细胞核萎缩,学习记忆能力显著下降,海马脑区甘丙肽表达水平上升.结论 D-半乳糖引发的小鼠AD模型在一定程度上模拟了AD的发病特点,可作为AD研究的一种模拟动物模型,模型组动物海马脑区甘丙肽呈高表达.
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TH和ChAT阳性神经元在大鼠面神经核团中的分布及其意义
目的 研究大鼠面神经核(facial nucleus)中酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)、胆碱乙酰转移酶(choline acetyl transferase,CHAT)免疫反应阳性神经元胞体及神经纤维的分布特点并探讨其意义.方法 采用免疫组织化学及免疫荧光双标技术检测TH和ChAT免疫阳性神经元在大鼠面神经核中的分布.结果 TH阳性神经元胞体主要分布在腹侧中间亚核(ventral intermediate subnucleus)、腹内侧亚核(ventromedial subnucleus)、外侧亚核(1ateral subnucleus).ChAT阳性神经元胞体大量分布在面神经核团中,主要分布在腹内侧亚核、背内侧亚核(dorsomedial suhnucleus)、背外侧亚核(dorsohteral subnueleus)等面神经亚核.在面神经核腹内侧亚核及中间亚核尚可见大量TH阳性神经终末,包绕TH、ChAT双标神经元胞体.结论 TH与ChAT在面神经核内存在神经调质共存现象.
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藏药旺拉提取物对东莨菪碱致动物学习记忆障碍的改善作用及其机制研究
观察藏药旺拉提取物(CE)对东莨菪碱致动物学习记忆障碍的改善作用并研究其作用机制.采用腹腔注射东莨菪碱造模,以跳台法测定小鼠的学习记忆能力,以电生理方法测定大鼠海马长时程增强(LTP)的诱导,分别以生化及放射性同位素分析法测定脑匀浆中乙酰且日碱酯酶(ACHE)及胆碱乙酰转移酶(ChAT)的活性.结果表明,模犁动物跳下平台的潜伏期明显缩短,LTP诱导受抑制.灌胃给予CE(5、10及20 mg·kg-1)可改善模型小鼠在跳台中的表现,腹腔注射CE(5 mg·kg-1)可逆转东莨菪碱对人鼠LTP诱导的抑制.此外,CE可显著增强ChAT活性,而对AChE活性无显著影响.CE可改善东莨菪碱致小鼠学习记忆障碍,其作用可能与改善海马LTP诱导及增强ChAT活性有关.
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远志皂苷对β-淀粉样肽和鹅膏蕈氨酸引起胆碱能系统功能降低的影响
目的观察远志皂苷对拟痴呆模型大鼠胆碱能系统功能的作用.方法在大鼠脑内右侧基底核内联合注射β-淀粉样肽1～40片段(β-AP1～40)和鹅膏蕈氨酸建立大鼠拟痴呆模型,用避暗法测定模型动物的学习记忆能力,用放射配体结合分析法测定胆碱乙酰转移酶活性和M受体密度,用改良Ellman法测定脑组织乙酰胆碱酯酶活性.结果给模型大鼠连续ig远志皂苷60 d后,远志皂苷能明显提高拟痴呆大鼠的学习记忆能力,显著升高脑内M受体密度和增强胆碱乙酰转移酶活性,能有效地抑制脑胆碱酯酶活性.结论远志皂苷对老年性痴呆的胆碱能系统功能减退有一定的改善和治疗作用.
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异丙酚预处理对拟AD模型大鼠海马CA1区ChAT表达的影响
目的 观察异丙酚预处理对拟阿尔茨海默病(AD)大鼠海马CA1区胆碱乙酰转移酶(choline acetyl-transferase,ChAT)表达的影响,分析异丙酚的脑保护作用.方法 30只健康雄性SD大鼠随机分为对照组、拟AD模型组(简称模型组)和异丙酚预处理组(简称异丙酚组).模型组、异丙酚预处理组在大鼠海马CA1区微量注射冈田酸(Okadaic acid,OA),建立拟AD大鼠模型.异丙酚预处理组大鼠于拟AD模型制作前30 min,腹腔注射异丙酚100 mg/kg.然后用免疫组化方法观察大鼠海马CA1区ChAT的表达.结果 30只大鼠顺利完成全部实验的有27只,模型组和异丙酚预处理组有2只大鼠死亡、1只出现偏瘫无法进行余下实验,这可能与动物的个体差异不能耐受实验有关.随机取27只大鼠作为结果分析样本(每组9只).①模型组与对照组大鼠相比:海马CA1区ChAT免疫组化阳性表达明显减少(P＜0.05);②异丙酚预处理组与模型组大鼠相比:海马CA1区ChAT免疫组化阳性表达明显增多(P＜0.05).结论 拟AD模型建立前30 min异丙酚预处理能增强ChAT的表达,有明显的脑保护作用.
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红花黄色素对血管性痴呆大鼠学习记忆的影响
目的 观察红花黄色素对血管性痴呆大鼠学习记忆的影响及相关作用机制.方法 采用双侧颈总动脉结扎致血管性痴呆大鼠模型.水迷宫试验探讨红花黄色素对痴呆大鼠学习记忆的影响,并用试剂盒测定大鼠皮层及海马组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和皮层中乙酰转移酶(ChAT)、总胆碱酯酶(T-ChE)的含量.结果 Morris水迷宫实验结果显示,红花黄色素30 mg·kg-1组、加兰他敏组可明显缩短痴呆大鼠寻找平台潜伏期;空间探索实验中红花黄色素30 mg·kg-1组痴呆大鼠穿越平台次数明显多于模型组;指标测定中,红花黄色素30 mg·kg-1组可显著升高痴呆大鼠皮层组织中谷胱甘肽过氧化物酶含量和海马组织中谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶含量;相较于模型组红花黄色素可以显著降低皮层组织中总胆碱酯酶含量,升高乙酰转移酶,但模型组和假手术组比较未见差异.结论 红花黄色素30 mg·kg-1组对血管性痴呆大鼠学习记忆障碍有显著改善作用,其机制可能与其降低脑组织中氧化应激水平及增加胆碱能神经功能有关.
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姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠海马神经元ChAT表达的影响
目的 观察淀粉样前体蛋白/早老素1( APP/PS1)双转基因小鼠海马CA1区神经元胆碱乙酰转移酶(ChAT)表达,评价姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆的影响.方法 将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、罗格列酮组及姜黄素大、中、小剂量组,并以同月龄遗传背景相同的C57BL/6J小鼠作为正常对照组.各治疗组每天灌胃给药1次,连续灌胃3个月.应用跳台实验、免疫组织化学和蛋白质印迹( Western-blot)检测学习记忆能力和海马神经元ChAT的变化.结果 与正常组小鼠相比,模型组小鼠潜伏时间显著缩短(P＜0.01),与模型组小鼠相比,姜黄素各剂量组小鼠潜伏时间增加(P＜0.05或P＜0.01).免疫组化检测,模型组小鼠海马CA1区ChAT阳性细胞较正常对照组明显减少(P＜0.01),而姜黄素干预组可以使其不同程度地恢复.Western blot检测,模型组小鼠海马ChAT的蛋白表达条带比正常组小鼠明显变细、颜色变浅(P＜0.01)；姜黄素干预组小鼠海马ChAT的蛋白表达条带均明显增粗、颜色加深(P＜0.05或P＜0.01).结论 姜黄素能通过增加ChAT的蛋白表达,促进阿尔茨海默(AD)模型动物神经传导障碍,进而改善APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力.
关键词： 姜黄素 淀粉样前体蛋白/早老素1双转基因 胆碱乙酰转移酶 小鼠 -
复方丹参对老年痴呆模型大鼠海马和大脑皮层ChAT、AchE活性的影响
目的 研究复方丹参对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力,海马和大脑皮层胆碱乙酰转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的影响.方法 大鼠海马注射B.淀粉样蛋白(Aβ1-40)造成AD模型,采用硫磺素染色来观察模型组大鼠海马老年斑沉积和神经原纤维缠结情况,采用Morris水迷宫检测学习记忆水平,用比色法测定ChAT、AchE活性变化.结果 海马注射Aβ1-40后,大鼠海马出现大量老年斑沉积和神经原纤维缠结,大鼠找到平台的时间和游泳路程明显延长,海马和皮层中ChAT的活性明显降低,AchE活性有增加趋势,但与假手术组相比,没有显著差异(P>0.05);治疗给予复方丹参能显著改善AD大鼠的学习记忆障碍,明显提高AD大鼠海马和皮层中ChAT的活性,但对AchE活性影响不明显.结论 复方丹参能提高AD模型大鼠脑组织ChAT活性,改善AD模型大鼠空间学习记忆损害,提示药物的作用可能与胆碱递质合成增加有关.
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异亚丙基莽草酸对慢性低灌注大鼠海马CA1区胆碱乙酰转移酶表达水平的影响
目的 探讨慢性低灌注大鼠海马CAl区胆碱乙酰转移酶(CHAT)的蛋白表达以及基因转录水平的改变,并观察异亚丙基莽草酸(ISA)对其影响.方法 实验动物分为假手术组、模型组、喜得镇组、ISA 100 ms/kg组、ISA 50 ms/kg组以及ISA 25 mg/kg组.将大鼠双侧颈总动脉结扎加切断后8周,经心灌注固定,制成大脑石蜡切片后进行免疫组织化学染色,测定海马CAl区ChAT定位以及相对定量表达.抽提大鼠海马CAl区组织总RNA,通过荧光定量实时PCR技术,对ChATmRNA表达水平进行测定.结果 慢性低灌注65 d后,大鼠海马CAl区ChAT免疫反应阳性产物主要分布于锥体细胞的胞浆及轴突.模型组大鼠的ChAT蛋白表达水平以及ChAT mRNA表达水平非常显著低于假手术组(P<0.05).与模型组相比,各给药组的ChAT蛋白表达水平不同程度升高(P<0.05);ISA 100 mg/kg组的ChAT mRNA表达水平增加非常显著(P<0.05),而ISA其余各剂量以及喜得镇对ChAT mRNA表达水平无显著影响(P>0.05).结论 ISA可增加慢性低灌注大鼠海马CAl区ChAT的蛋白以及基因表达水平.
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自发性2型糖尿病小鼠脑组织胆碱能神经递质系统的研究
目的探讨糖尿病脑病的发病机制.方法应用一种自发性2型糖尿病动物模型,研究其发病早期行为学和脑组织形态学的变化,以及胆碱能神经递质及其受体与糖尿病脑病的关系.结果糖尿病小鼠发病早期出现认知功能障碍和脑组织形态学改变;糖尿病小鼠发病6周时,脑皮质和海马组织的胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)活性与正常对照组比较无明显改变(P＞0.05).发病12周时皮质组织的ChAT活性较正常对照组降低了39%(P＜0.05),海马组织下降了36%(P＜0.05);糖尿病动物模型KK-Ay小鼠发病6周和12周时皮质和海马组织的胆碱毒蕈碱受体(M受体)结合于3H-QNB的活性与正常对照比较差异均无统计学意义(P＞0.05);结论胆碱能神经递质传递异常在糖尿病脑病发病机制中发挥重要作用.
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双侧黑质注射脂多糖引起大鼠迷走神经背核胆碱能标志物降低和便秘
目的 黑质内注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)制备帕金森模型大鼠(LPS大鼠),观察LPS大鼠排便情况及迷走运动背核(dorsal motor nucleus of the vagus,DMV)中酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)免疫反应阳性神经元胞体及神经纤维的分布特点.方法 通过双侧黑质内注射LPS 获得LPS大鼠;免疫荧光组织化学用于检测TH和ChAT免疫阳性神经元在DMV的分布.结果 LPS大鼠摄食和饮水情况与对照组相比较,差异无统计学意义,但粪便湿质量减轻,粪便内含水量显著减少,即出现便秘情况.LPS大鼠黑质内神经元大量丢失,并伴有胶质细胞增生、TH免疫阳性(IR)明显降低;而DMV内的TH-IR显著增强、ChAT-IR明显减弱.结论 与黑质内注射六羟多巴相似,黑质内注射LPS可以引起大鼠出现便秘,该结果 可能与LPS大鼠DMV中TH增多和ChAT降低导致胃肠动力紊乱有关.
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中药复方962对老龄大鼠皮质胆碱乙酰转移酶和乙酰胆碱酯酶活性的影响
为研究中药复方962胶囊对老龄大鼠皮质胆碱乙酰转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的影响,将22月龄和24月龄Wistar大鼠分为青年对照组、老年模型组、阳性对照脑复康组(0.56 g/kg)、962中剂量组(0.9 g/kg)和962大剂量组(1.8 g/kg)5组,分别灌胃给药1～2个月后处死大鼠.用Fonnun法和羟胺比色法分别测定5组大鼠皮质的ChAT和AchE的活性.结果:中药复方962大剂量(1.8 g/kg)对老龄大鼠皮质ChAT活性有提高作用(P＜0.05),但对AchE无显著影响.提示:中药复方962可能通过影响老龄大鼠中枢胆碱能神经系统而改善其衰老的变化.
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黄芩茎叶黄酮对大鼠缺血性记忆障碍的改善作用及对胆碱乙酰转移酶和一氧化氮合酶蛋白表达的影响
探讨黄芩茎叶黄酮(flavonoids from stem and leaf of scutellaria baicalensis georgi,SSF)对大鼠永久性慢性脑缺血引起记忆障碍的改善作用及对胆碱乙酰转移酶和一氧化氮合酶蛋白表达的影响.方法雌性sprague-dawley (SD)大鼠双侧颈总动脉永久结扎2个月制备慢性脑缺血记忆障碍模型,通过Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,免疫组化测定海马细胞中胆碱乙酰转移酶(chloine acetyltransferase,ChAT)、神经元型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase,nNOS）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白表达来探讨黄芩茎叶黄酮对大鼠缺血性记忆障碍的改善作用及对胆碱乙酰转移酶和一氧化氮合酶蛋白表达的影响.结果与假手术组相比,脑缺血模型组大鼠的学习记忆能力显著降低,找到平台的游泳路程显著延长；海马细胞中ChAT和eNOS蛋白表达显著降低；nNOS和iNOS蛋白表达显著增加.然而,17.5、35.0和70.0 mg/kg SSF灌胃给脑缺血大鼠38 d均能不同程度地改善学习记忆能力障碍,明显缩短大鼠找到平台的游泳路程；增加海马细胞中ChAT和eNOS蛋白的表达；抑制海马细胞中nNOS和iNOS蛋白的表达.结论SSF对大鼠脑缺血性记忆障碍具有明显的改善作用,其作用机制可能与调节脑内ChAT和一氧化氮合酶的异常变化有关.
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β淀粉样肽结合乙醇脱氢酶及胆碱乙酰转移酶在糖尿病小鼠海马内表达的时程变化
目的 本研究通过观察β淀粉样肽结合乙醇脱氢酶(amyloid-β peptide-binding alcohol dehydrogenase,ABAD)及胆碱乙酰转移酶(choline acetyl transferase,ChAT)在糖尿病(diabetes mellitus,DM)小鼠海马CA1区表达的时程变化,探讨DM脑病发病的相关机制.方法 48只雄性昆明小鼠采用数字表法随机分为对照组(control,C,n=24)和DM组(n=24).小鼠禁食12 h后,按200 mg/kg腹腔注射新鲜配制的链脲佐菌素(streptozocin,STZ),3 d后尾部测非禁食血糖,大于15 mmol/L者为DM模型复制成功.分别在造模后1周、4周及8周应用免疫组织化学染色方法观察C组与DM组小鼠海马CA1区ABAD及ChAT阳性细胞的变化.结果 1)ABAD免疫组织化学染色结果显示,C组小鼠海马CA1区ABAD阳性细胞数量少,染色浅;而造模后1周、4周、8周,DM组小鼠海马CA1区ABAD阳性细胞数量较C组增多,染色深.细胞计数结果显示,1周、4周及8周,DM组小鼠海马CA1区ABAD阳性细胞数量(18.50±2.72,21.10±2.47,18.90±2.08)比C组(14.30±2.63,15.30±3.13,14.10±3.07)明显增加,差异有统计学意义(P<0.01).2)ChAT免疫组织化学染色结果显示,C组小鼠海马CA1区ChAT阳性细胞数量多,染色深;而造模后1周、4周及8周,DM组小鼠海马CA1区ChAT阳性细胞数较C组减少,染色变浅.细胞计数结果显示,1周、4周及8周DM组小鼠海马CA1区ChAT阳性细胞数量(21.20±2.15,19.60±3.50,21.30±3.20)比C组(25.50±3.63,26.40±3.37,26.30±4.88)明显减少,差异有统计学意义(P<0.01).结论 DM早期(1周)小鼠海马内即出现ABAD 表达增加,并持续至实验终点(8周),同时DM小鼠海马内ChAT表达明显减少.ABAD可能参与DM小鼠胆碱能神经元的变性过程,在DM脑病的发病机制中具有重要作用.
关键词： 糖尿病 海马 β淀粉样肽结合乙醇脱氢酶 胆碱乙酰转移酶 -
中枢胆碱能系统的改变对老年痴呆大鼠行为的影响
目的 观察Meynert核损害对大脑内胆碱乙酰转移酶(ChAT) 和突触素(P38)的影响.方法 lbotenic acid定位损伤大鼠脑建立AD模型,利用水迷宫和跳台观察其行为学改变,利用原位杂交,免疫组化及图像分析测定大鼠内胆碱乙酰转移酶(ChAT)和突触素的表达.结果 胆碱能损害组大鼠的学习记忆能力低于正常对照组和假手术组,其脑内ChAT和突触素的表达也明显下降,结论保护中枢胆碱能系统和增加突触素水平有助于改善认知记忆力.
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脑源性神经生长因子对老龄鼠智能影响的探讨
目的 研究脑源性神经营养因子(bDNF)改善痴呆老龄鼠学习记忆的作用机制;胆碱乙酰转移酶活性(ChAT-IR)、胆碱酯酶(AchE)活性的影响.方法 利用海马内注射bDNF及免疫组织化学技术,观察给药前后各组迷宫试验,胆碱乙酰转移酶(ChAT)、胆碱酯酶(AchE)活性的变化.结果 治疗组学习记忆能力有明显改变(P＜0.05).与对照组比较ChAT-IR表达明显增加(P＜0.01),AchE活性明显增强(P＜0.01).结论 bDNF使胆碱乙酰转移酶活性(ChAT)、胆碱酯酶(AchE)活性增强;对老龄鼠的智能有改善作用.
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外源性NGF对痴呆老龄鼠P物质与ChAT-IR表达的影响
目的 探讨外源性神经生长因子(NGF)对痴呆老龄鼠中枢神经系统P物质(SP)及胆碱乙酰转移酶活性(ChAT-IR)表达的影响.方法 采用迷宫测试痴呆老龄鼠空间学习及记忆,用免疫组织化学技术观察SP、ChAT-IR在相关脑区表达.结果 用药后痴呆老龄鼠游完水迷宫时间明显缩短(P＜0.01),相关脑区SP及ChAT表达明显提高(P＜0.01).结论 外源性NGF使相关脑区SP及ChAT-IR表达增加,改善了痴呆老龄鼠空间学习及记忆能力,能够保护、支持、修复神经元.
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牛磺酸对镉致大鼠脑损伤组织中单胺类递质的影响
目的 研究牛磺酸对镉致大鼠脑损伤组织中单胺类递质的影响.方法 将40只大鼠按体重随机分为4组:正常对照组、模型组、高剂量组、低剂量组,每组10只.除正常对照组外,其余各组每周2次腹腔注射氯化镉(CdC12)2.0 mg/kg,正常对照组每周2次腹腔注射生理盐水(相同体积).同时,高剂量组、低剂量组每日分别灌胃牛磺酸1000和750 mg/kg,正常对照组和模型组每日灌胃蒸馏水.实验持续4周后处死动物,测定脑组织中乙酰胆碱酯酶(AchE)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)活力及对脑组织病理形态学进行观察.结果 牛磺酸高剂量组脑组织中AchE活力与模型组比较明显降低(P＜0.05),ChAT活力明显增高(P＜0.05)；脑组织病理形态观察显示,模型对照组出现明显细胞核固缩,神经细胞数目减少,细胞排列层次减少；高剂量组海马神经细胞核固缩明显减少.结论 牛磺酸可调节大鼠单胺类神经递质的释放水平,可显著改善镉致大鼠脑组织损伤.
