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改良式大鼠全脑缺血再灌注模型的制作及海马回核因子-κB的表达研究
目的 探讨改良式大鼠全脑缺血再灌注模型的制作方法,提高造模成功率,检测海马回核因子-κB(NF-κB)的表达.方法 将90只SD大鼠分为椎动脉电凝组(A组),椎动脉破坏组(B组),椎动脉留置针头组(C组),假手术组(D组),其中假手术组简称SO组,全脑缺血再灌注组简称I/R组.观察再灌注后3、12、24、48 h海马CA1区苏木精-伊红(HE)染色的病理改变;免疫组织化学法检测NF-κB的表达.结果 A组造模成功率为55%,B组成功率为70%,C组成功率为90%,3组造模成功率间差异有统计学意义(χ2=6.07,P＜0.05),C组的造模成功率高于A、B组,差异有统计学意义(P＜0.05).HE染色显示再灌注后海马区神经元大量坏死;SO组NF-κBp65表达在胞质中,I/R组3 h胞核中就有表达,12 h达高峰,到24 h和48 h都表达在胞核中,与SO组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 改良后的四血管阻塞建模法简单、经济、成功率高,值得推广.通过成功模型证实全脑缺血再灌注损伤与NF-κB密切相关.
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全脑缺血再灌流后海马神经元凋亡的初步研究
目的:观察大鼠全脑缺血再灌流后脑组织细胞的死亡是否以凋亡的形式出现,分析凋亡在海马神经元死亡中的意义.方法:选用雄性SD大鼠,随机分为二组:假手术对照组和缺血再灌流组.全脑缺血采用Pulsinelli-Brierley四血管阻塞(4VO)模型.TUNEL(Terminal deoxyribonucleotidyl-transferase mediated dUTP-fluoresein nick end labeling method)标记主要根据试剂盒的说明进行.免疫组化采用CDN-ABC漂浮法.结果:1. TUNEL标记结果:本实验观察了全脑缺血再灌流后脑组织切片,缺血再灌流后第二天阳性细胞的数量明显增多,于第3 d、第5 d为明显,且阳性细胞主要出现在海马CA1区,在CA2区及齿状回等海马部位也可见到,但细胞数量少,且显色不明显.阳性细胞内可见圆形或不规则形的凋亡小体.2.免疫组化结果:Bcl-2蛋白在海马部位的表达主要出现在缺血再灌流后6 h至24 h,72 h后它的表达基本消失.结论:脑缺血再灌流后海马迟发性死亡与细胞凋亡有关,CA1区神经细胞的死亡至少有部分是通过凋亡的形式发生的.
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改良四血管阻塞法建立大鼠全脑缺血模型
目的对四血管阻塞法(4-VO)建立大鼠全脑缺血模型进行改良,以提高模型的可靠性.方法以微型磨钻,扩大第一颈椎上之翼孔,充分暴露其中穿行的椎动脉,显微镜直视下电凝阻断;夹闭双侧颈总动脉以出现静息脑电波为判定大鼠已达全脑缺血的标准对4-VO法建立大鼠全脑缺血模型进行改良.全脑缺血15 min后行再灌注,7 d后以海马CA1区神经元出现大部分死亡作为判定模型成功的标准,对两种建模方法进行评定.结果 4-VO法制作大鼠全脑缺血再灌注模型,大鼠存活7 d的存活率为90%(27/30),改良4-VO法制作大鼠全脑缺血再灌注模型,大鼠存活率为86.7%(26/30),二者无明显差异(P>0.05);4-VO法制作大鼠全脑缺血再灌注模型其成功率仅为70%(21/30),改良4-VO法制作大鼠全脑缺血再灌注模型,成功率为86.7%(26/30),明显高于4-VO法.结论改良4-VO法可明显提高模型制作的可靠性和成功率
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一种改良大鼠四血管阻塞法脑缺血模型
目的 建立一种稳定可靠的可降低侧支循环影响的大鼠全脑缺血模型操作方法.方法 实验用SD大鼠50只随机分为3组:假手术组;缺血15 min组;缺血25 min组,在麻醉状态下仰卧固定,打开胸廓上口,分离并夹闭双侧锁骨下动脉起始段;后两组动物待接近清醒时分别夹闭其双侧颈总动脉15 min和25 min后松开动脉夹实行再灌注.各组动物分别于手术后24 h、48 h、72 h和7 d进行神经功能测试,并于后一次测试后立即灌注固定组织,取脑组织进行组织学观察,统计海马、皮层等区域神经细胞的状态进行比较,以海马CA1区大部分神经元细胞出现死亡为模型成功标准.结果 与假手术组相比,15 min组和25 min组之存活动物均显示出明显的神经功能降低,其组织学观察结果亦非常稳定,剔除因抽搐死亡的动物后模型成功率可达到100%(试验中未观察到存活动物模型失败的情况).其中,25 min组的动物死亡率高于15 min组,并可观察到较15 min组更加广泛的神经元坏死.结论 本改良四血管阻塞法大鼠全脑缺血模型可明显提高模型制作的可靠性和成功率.
