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SU11274逆转肝细胞生长因子诱导的非小细胞肺癌细胞对厄洛替尼耐药作用及其机制研究
背景 肝细胞生长因子(HGF)能够在体外诱导敏感非小细胞肺癌(NSCLC)细胞形成对表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)耐药,敏感NSCLC对厄洛替尼的耐药机制可能与HGF刺激c-Met磷酸化有关.目的 旨在研究c-Met抑制剂SU11274在逆转HGF诱导的裸鼠体内敏感NSCLC对厄洛替尼耐药作用及其机制.方法 于2014年3月-2015年1月选择NSCLC细胞株H292及人胚肺成纤维细胞(MRC-5),通过酶联免疫吸附(ELISA)法检测MRC-5培养上清液中HGF水平,MTT法检测细胞增殖情况,应用Western blotting法检测细胞中c-Met及其下游通道蛋白的变化.建立H292细胞的裸鼠移植瘤模型,设对照组(C组)、HGF处理组(H组)、HGF+SU11274处理组(HS组)、HGF+1%二甲基亚砜(DMSO)处理组(HD组)、厄洛替尼处理组(E组)、HGF+厄洛替尼处理组(HE组)、HGF+厄洛替尼+SU11274处理组(HES组),观察肿瘤生长情况,测量肿瘤体积,称取肿瘤质量.免疫组织化学法检测裸鼠移植瘤组织中c-Met及其下游通道蛋白的变化.结果 ELISA法检测结果显示,MRC-5培养上清液中HGF水平为(1 262±90)pg/ml.MTT法检测结果显示,H292与MRC-5培养上清液混合培养后,H292在厄洛替尼IC50时的增殖率为97.07%.H292 MRC-5阳性细胞p-Met、p-STAT3、p-AKT、p-ERK1/2表达水平高于MRC-5阴性细胞(P<0.05).处理方法与时间对肿瘤体积存在交互作用(P<0.001);处理方法对肿瘤体积主效应显著(P<0.001);时间对肿瘤体积主效应显著(P<0.001).其中HES组第7、11、14、18、21、25天肿瘤体积小于HE组(P<0.05).各组肿瘤质量比较,差异有统计学意义(F=39.120,P<0.001);其中HES组肿瘤质量小于HE组(P<0.05).各组c-Met、p-Met、p-STAT3、p-AKT、p-ERK1/2表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中HES组c-Met、p-Met、p-STAT3表达水平低于HE组(P<0.05).结论 MRC-5分泌的HGF能够在裸鼠体内诱导敏感NSCLC细胞株H292对厄洛替尼产生耐药,c-Met抑制剂SU11274可逆转HGF诱导敏感NSCLC细胞株H292对厄洛替尼耐药,其机制可能与抑制了HGF活化的c-Met及其下游通道蛋白相关.
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SU11274对人结肠癌LOVO细胞裸鼠移植瘤的抑制作用
目的 观察小分子酪氨酸激酶抑制剂SU11274对人结肠癌LOVO细胞裸鼠移植瘤的抑制作用.方法 建立人结肠癌LOVO细胞裸鼠移植瘤模型,18只裸鼠随机分成对照组、大剂量组和小剂量组,每组6只.采用腹腔注射,对照组给予灭菌生理盐水,大剂量组和小剂量组分别给予0.09 mg/kg、0.022 5 mg/kg剂量的SU11274(SU11274溶解于1％ DMSO中),观察各组裸鼠肿瘤的生长情况,称体质量并计算抑瘤率.免疫组化法检测c-Met的表达,并进行HE染色.结果 SU11274大剂量组肿瘤体积较对照组明显减小,差异有统计学意义(P＜0.05),SU11274小剂量组肿瘤体积较对照组差异无统计学意义(P＞0.05);SU11274大剂量组对人结肠癌LOVO细胞裸鼠移植瘤生长具有明显的抑制作用,抑瘤率为56.25％,SU11274小剂量组裸鼠肿瘤生长的抑制作用不明显,抑瘤率为25.00％;SU11274大剂量组c-Met阳性表达率为(45.83±8.61)％,明显低于对照组(66.67±16.63)％ (P ＜0.05),SU11274小剂量组中c-Met阳性表达率为(63.33±8.16)％,与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SU11274可显著抑制人结肠癌裸鼠移植瘤的生长.
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SU11274逆转HGF诱导非小细胞肺癌对厄洛替尼耐药的作用及其机制
目的 探讨c-Met抑制剂SU11274逆转肝细胞生长因子(HGF)诱导非小细胞肺癌(NSCLC)对厄洛替尼耐药的作用机制.方法 选择人NSCLC细胞PC-9(EGFR突变型,敏感株)及人胚肺成纤维细胞MRC-5,常规规养48 h,采用ELISA法检测两种细胞培养上清液HGF水平,采用MTT法检测加入50％MRC-5细胞培养上清液后IC50浓度厄洛替尼下PC-9细胞的增殖率,采用Western blotting法检测PC-9细胞c-Met及其下游通路蛋白(Akt、Stat3、Erk1/2及p-Akt、p-Stat3、p-Erk1/2)表达.选择雌性BALB/c裸鼠49只,随机分为对照组、HGF组、HGF+DMSO组、HGF+SU11274组、厄洛替尼组、HGF+厄洛替尼+SU11274组、HGF+厄洛替尼组,每组7只.对照组和厄洛替尼组于右肋皮下接种密度为5×106个/mL PC-9细胞悬液100μL,其他组均于右肋皮下接种100μL密度相同的PC-9细胞与MRC-5细胞培养上清液的混合液.当肿瘤直径生长至约4 mm时,对照组、HGF组以1％Tween-80灌胃,厄洛替尼组、HGF+厄洛替尼组、HGF+厄洛替尼+SU11274组以厄洛替尼25 mg/(kg·d)灌胃,每周灌胃5天,连续4周.HGF+SU11274组、HGF+厄洛替尼+SU11274组灌胃后腹腔注射SU112740.18 mg/(kg·d),每周5次,连续4周.分别于灌胃4、7、11、14、18、21、25天计算肿瘤体积,末次灌胃结束,断颈处死,完整剥离移植瘤组织,称取肿瘤质量,计算抑瘤率.取部分移植瘤组织,采用免疫组化法检测c-Met及其下游通路蛋白(Akt、Stat3、Erk1/2及p-Akt、p-Stat3、p-Erk1/2)表达.结果 PC-9细胞培养上清液HGF水平<0.1 pg/mL,MRC-5细胞培养上清液HGF水平为(1262.07±89.78)pg/mL.在加入50％MRC-5细胞培养上清液后IC 50浓度厄洛替尼下PC-9细胞增殖率为78.24％.与未加入MRC-5细胞培养上清液的PC-9细胞比较,加入MRC-5细胞培养上清液的PC-9细胞p-c-Met、p-Akt、p-Stat3、p-Erk1/2蛋白相对表达量明显升高(P均<0.05),而c-Met、Akt、Stat3、Erk1/2蛋白相对表达量变化不明显(P均>0.05).厄洛替尼组、HGF+厄洛替尼组及HGF+厄洛替尼+SU11274组均能明显抑制移植瘤生长,其他各组抑制肿瘤生长效果不明显.与HGF+厄洛替尼组比较,厄洛替尼组与HGF+厄洛替尼+SU11274组抑瘤率明显升高(P均<0.05),而厄洛替尼组与HGF+厄洛替尼+SU11274组比较P>0.05.与HGF组、HGF+DMSO组和HGF+厄洛替尼组比较,厄洛替尼组、HGF+SU11274组和HGF+厄洛替尼+SU11274组移植瘤组织p-Met、p-Stat3、p-Akt、p-Erk1/2蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05).结论 HGF可诱导NSCLC对厄洛替尼的耐药,c-Met及其下游信号通路持续激活是NSCLC对厄洛替尼耐药的重要机制;c-Met抑制剂SU11274和厄洛替尼联合应用可逆转HGF诱导的NSCLC对厄洛替尼的耐药,其机制可能与抑制c-Met及其下游信号通路激活有关.
