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人牙齿切片器官培养模型的建立
目的 建立人牙齿切片体外器官培养模型.方法 收集年轻人健康前磨牙或第三磨牙,用慢速切锯制备2mm厚的牙齿横切片,将切片用含1%琼脂糖的半固体培养基包被后采用Trowel器官培养方法在体外培养2～14天,对培养切片的细胞及组织形态进行组织学观察.结果 实验成功的将牙齿切片在体外培养了两周,成牙本质细胞在培养一周之内能够很好的维持原来的形态.一周之后成牙本质细胞逐渐萎缩,细胞密度减小.结论 实验成功的建立了人牙齿切片体外器官培养的模型,为后期进行组织损伤和修复、第三期牙本质的形成等方面的研究奠定了基础.
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人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性基因的克隆、原核表达和纯化
目的:获得原核表达的人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性蛋白.方法:采用RT-PCR技术从人成牙本质样细胞系中获得cDNA,亚克隆至PUC18载体中,经测序确认后,将该基因插入原核表达载体pProEXHTb中,通过电穿孔技术转化E.coli表达菌DH5α,以IPTG诱导蛋白表达,并经Ni-NTA 亲和柱层析纯化,SDS-PAGE鉴定.结果:获得的人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性cDNA序列与GenBank登录的cDNA序列一致.结论:成功克隆人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性基因,建立了原核表达、纯化体系,制备了纯化的人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性蛋白.
关键词： 人成牙本质细胞 L型钙离子通道α1亚基D亚型 原核表达 蛋白纯化 -
人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性基因的克隆
目的:克隆人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型的特异性基因.方法:采用RT-PCR 方法, 从人成牙本质样细胞系中克隆人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基的特异性基因片段,将其亚克隆入pUC18载体进行序列测定.结果:从人成牙本质样细胞系中获得900 bp 的特异性片段.序列分析表明,与GenBank登陆的人L型钙离子通道α1亚基D亚型的特异性基因序列完全一致.结论:成功地从人成牙本质样细胞系中克隆到人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型的特异性基因序列.
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人成牙本质细胞L型钙离子通道特异性基因片段的克隆研究
目的:克隆人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性基因片段.方法:选取新鲜拔除的健康恒牙,利用牙科专用慢速切锯制备牙齿切片,采用酶消化法分离出完整的人成牙本质细胞,利用RT-PCR技术直接从人成牙本质细胞中克隆L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性基因片段,将其亚克隆入pGM-T载体进行序列测定.结果:从人成牙本质细胞中获得452bp的特异性片段.序列分析表明,其与GenBank中已登录的人L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性基因序列一致.结论:成功地从人成牙本质细胞中克隆到人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型的特异性基因序列片段.
关键词： 人成牙本质细胞 L型钙离子通道α1亚基D亚型 酶消化法 基因克隆 -
人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性基因原核表达质粒的构建和鉴定
目的:构建人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性基因原核表达质粒.方法:采用RT-PCR技术从人成牙本质样细胞系中获得cDNA,将该基因插入原核表达载体pProEXHTb中,通过电穿孔技术转化E.coli表达菌DH5α,随机挑选阳性克隆并提取质粒酶切鉴定,同时对阳性克隆进行测序鉴定.结果:获得的人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性cDNA序列,与GenBank登录的cDNA序列一致.结论:成功地构建了人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性基因原核表达质粒.
关键词： 人成牙本质细胞 L型钙离子通道α1亚基D亚型 基因克隆 原核表达 -
人成牙本质细胞的分离和鉴定
目的:分离并鉴定完整的成熟人成牙本质细胞.方法:收集人健康恒牙,采用胶原酶和蛋白酶联合消化法分离出成牙本质细胞,并对分离出的细胞进行细胞形态学和免疫组织化学鉴定. 结果:实验分离出的细胞为柱状或立方状,有较长的细胞突起,具有典型的成牙本质细胞形态,免疫组化染色显示细胞表达Ⅰ型胶原、DMP1和DSP蛋白.结论:本研究分离得到了完整的成熟人成牙本质细胞,为后期研究成牙本质细胞的分化、功能及特点奠定基础.
