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屋尘螨抗原致敏大鼠支气管上皮细胞白介素6、白介素8和转化生长因子β1的表达
目的 探讨屋尘螨抗原(Derp1)对大鼠原代支气管上皮细胞白介素6(IL-6)、IL-8和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响.方法 将实验随机分成正常对照组和实验组,实验组中细胞分别暴露于3个不同的Derp1浓度(1、5、10 mg/L)及3个不同的培养时间点(4、8和24 h).然后用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测细胞及细胞上清液中IL-6、IL-8和TGF-β1的表达及含量.结果 与对照组相比,实验组各指标有明显变化.Derp1刺激4h,IL-6和IL-8表达开始升高,直至8～24 h呈高水平.而在Derp1浓度≥5 mg/L条件下,IL-6和IL-8表达明显,与正常对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).而TGF-β1 则随着时间和浓度的增加.其表达水半呈逐渐上升趋势,各时间点的表达差异均有统计学意义(P＜0.05).各炎症指标(IL-6,IL-8,TGFβ1)ELISA结果与PCR趋势基本一致.结论 Derp1刺激气道上皮细胞,引起支气管上皮细胞免疫反应,释放一系列炎症因子如IL-6、IL-8和TGF-β1.从而参与哮喘气道炎症反应及哮喘的气道重塑.
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高迁移率族蛋白B1对人原代支气管上皮细胞血管内皮生长因子表达和释放的影响
目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对人原代支气管上皮细胞(PBEC)血管内皮生长因子(VEGF)表达和释放的影响及可能调控机制.方法 (1)按浓度依赖性分组;给予HMGB1 0、100、500、2 000 μg/L刺激细胞;(2)时间依赖性分组:设置空白对照,HMGB1 2 000 μg/L刺激PBEC时间为6、12、24h.四唑盐法检测上述方法干预PBEC后细胞活力;实时荧光定量PCR检测PBEC VEGF mRNA表达水平变化,双抗体夹心酶联免疫吸附实验法检测细胞培养上清液中VEGF的浓度.拮抗高级糖基化终产物受体(RAGE)观察其对HMGB1诱导表达和释放VEGF的影响.结果 HMGB1在不影响细胞活力的情况下,(1)HMGB1与PBEC VEGF的表达和分泌水平存在剂量-效应关系,HMGB1(500、2 000μg/L)浓度组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).(2)随HMGB1 2 000 μg/L刺激时间延长,VEGF的表达和分泌逐渐升高,呈时间依赖性,且12、24h组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).(3) HMGB1 2 000 μg/L刺激PBEC24h显著增加VEGF表达和释放,拮抗RAGE后显著抑制了HMGB1诱导的VEGF表达和释放.结论 HMGB1通过受体RAGE途径的增加PBEC VEGF的表达和释放,从而参与慢性气道炎症的发生和发展,其相关分子机制仍需要进一步探讨.
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屋尘螨抗原对大鼠支气管上皮细胞白细胞介素6和白细胞介素8表达的影响
目的 探讨屋尘螨( Derpl)抗原对大鼠原代支气管上皮细胞白细胞介素6( IL-6)和IL-8表达的影响.方法 将大鼠原代支气管上皮细胞随机分为正常对照组和实验组.实验组再分为3个不同浓度组(1、5及10 μg/mL),待细胞生长至融合90％的单层平面时,分别加入不同浓度的Derpl抗原液.在4、8和24 h分别观察各组细胞的形态.采用酶联免疫法(ELISA)检测其细胞上清液IL-6和IL-8的浓度含量.结果 正常对照组细胞表现为单层细胞平铺状态,实验组细胞形态及细胞间隙无明显变化,屋尘螨刺激4h,IL-6和IL-8释放水平开始升高；刺激8h,IL-6和IL-8继续升高,以5 μg/mL组和10 μg/mL组更为显著(P＜0.01)；刺激24h,IL-6和IL-8进一步升高但与8h组相比无统计学意义(P＞0.05).结论 Derpl抗原刺激气道上皮细胞释放一系列炎症因子如IL-6和IL-8从而参与哮喘气道炎症反应.
