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ABO反定型免疫胶体金试剂的研制
目的 研制ABO反定型免疫胶体金试剂,以解决反定型细胞需低温保存、保存期短的问题.方法 提取O、A和B型红细胞膜抗原并应用胶体金标记,研发ABO反定型免疫胶体金试剂.研究该试剂的佳反应条件.用ABO反定型免疫胶体金试剂检测已知血型的临床全血标本200例,并与传统人ABO血型标准反定型细胞比较,评估其反应的特异性、灵敏度和准确性.结果 结果显示10μl金标记红细胞膜抗原和45μl左右的检测血清/血浆有佳的凝结强度,佳震荡反应转速为80 ～90 r/min,反应佳时间为8～12 min.与传统人ABO血型标准反定型细胞相比,ABO反定型免疫胶体金试剂的准确性、特异性均为100％,灵敏度不低于反定型红细胞.结论 ABO反定型免疫胶体金试剂可以用于常规血型鉴定.
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ABO血型反定型试剂质控方法和质量标准的建立
目的 建立ABO血型反定型试剂的质控方法和质量标准.方法 用抗P、抗M、抗N、抗C、抗c、抗E、抗e试剂检测O型血浆样本,选择分别与抗P、抗M、抗C、抗e试剂反应呈(卅)强阳性样本,和与抗P、抗N、抗c、抗E试剂反应呈(卅)强阳性样本各2份,配制ABO血型反定型用O型细胞.分别对两个厂家提供的和自制的ABO血型反定型用O型细胞进行抗原性检测,同时进行外观、特异性、ABH抗原性、亲和力、溶血率、稳定性检测,并检测35份含IgM类不规则抗体的阳性血浆样本,对比检出率.结果 自制的ABO血型反定型用O型细胞与抗P、抗M、抗N、抗C、抗c、抗E、抗e试剂反应均呈++以上,而其他两个厂家提供的ABO血型反定型试剂均有部分抗体漏检；外观、特异性、ABH抗原性、亲和力、溶血率、稳定性检测均无明显差异,符合相关要求；自制的ABO血型反定型用O型细胞可检出所有IgM类不规则抗体,无漏检,而其他两个厂家提供的ABO血型反定型试剂均有部分血浆样本漏检.结论 本研究建立的质控方法和质量标准适用于IgM类不规则抗体的检出.
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ABO免疫磁珠反定型试剂自动化检测方法的建立
目的 建立ABO免疫磁珠反定型试剂自动化检测方法.方法 使用自动化血型定型检测系统,摸索ABO免疫磁珠反定型试剂使用浓度、与待检血浆或血清的适比例,确定操作程序,通过调整自动判读仪的参比值进行血型的自动判读.结果 反定型试剂的佳使用浓度为2%,与待检血浆或血清的佳比例为1:2;操作程序为磁场作用时间30s、磁场作用次数为2次、震荡模式为弱震后强震.将自动判读仪参比值选定在0.3～0.4,对640人份样本进行检测,准确率为98.43%.结论 ABO免疫磁珠反定型试剂可以用于血型自动化检测.
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ABO反定型试剂红细胞配制方法的探讨
目的 摸索ABO反定型试剂红细胞的配制方法.方法 配制20%的洗涤红细胞悬液后放置4±2℃冰箱保存,每周混匀后取样进行红细胞抗原性及特异性测定和反定型试验(微板法)检测凝集能力实验,观察细胞凝集状态,并记录结果.结果 自配反定型试剂保存期为35d.在配制后第35天,自配红细胞与相应的抗血清的特异性凝集反应仍有＞2+s的凝集强度,具有良好抗原稳定性;与不对应的抗血清均无凝集反应,具有良好的特异性;用自配红细胞做反定型试验,特异性凝集能被酶标仪测出,符合实验要求.结论 运用自配反定型试剂,操作简便,原料易得,成本低廉,制成的红细胞具有良好的免疫特异性、抗原稳定性和凝集效能,符合实验要求.
