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缺氧环境下shRNA下调MTDH基因对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨缺氧环境下MTDH表达下调对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响.方法 ①利用二氯化钴模拟缺氧环境,采用RT-PCR及Western blot法检测HIF-1α及MTDH基因在缺氧环境下表达水平的改变;②缺氧环境下将加入MTDH-shRNA转染质粒的MCF-7细胞(缺氧MTDH-shRNA组)、control-shRNA转染质粒的MCF-7细胞(缺氧Control-shRNA组)及仅予单纯二氯化钴缺氧处理的MCF-7细胞(单纯缺氧组)分别转染,24 h后观察转染率,再应用RT-PCR及Western blot法检测MTDH基因在mRNA和蛋白水平上的变化;③MTT实验检测下调MTDH基因表达对单纯缺氧组、缺氧Control-shRNA组和缺氧MTDH-shRNA组MCF-7细胞增殖的影响,并采用Hoechst33258染色及流式细胞术检测3组细胞的凋亡情况;④采用RT-PCR及Western blot法观察下调MTDH基因对单纯缺氧组、缺氧Control-shRNA组和缺氧MTDH-shRNA组HIF-1α表达的影响.结果 ①缺氧环境下MCF-7细胞HIF-1α基因表达无变化,HIF-1α蛋白表达在一定范围内随缺氧时间延长而升高(P＜0.05),MTDH基因及蛋白表达随缺氧时间延长均逐渐升高(P＜0.05);②MCF-7细胞转染率约60％,与单纯缺氧组和缺氧Control-shRNA组相比,缺氧MTDH-shRNA组MTDH基因及蛋白表达均减低(P＜0.05);③下调MTDH基因表达后,与单纯缺氧组及缺氧Control-shRNA组比较,缺氧MTDH-shRNA组MCF-7细胞增殖抑制率减弱(P＜0.05),凋亡细胞数量增加(P＜0.05);④下调MTDH基因表达后,与单纯缺氧组及缺氧Control-shRNA组比较,缺氧MTDH-shRNA组HIF-1α蛋白表达减低(P＜0.05).结论 缺氧环境下,下调MTDH基因可调控MCF-7细胞HIF-1α蛋白表达,同时降低MCF-7细胞增殖能力,并促进其凋亡.
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下调MTDH基因表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨下调MTDH基因表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响.方法 乳腺癌MCF-7细胞株常规消化并接种,按照LipofectamineTM 2000说明书进行转染,转染组转染MTDH-homo-1432,对照组转染等剂量的control-FAM.转染24 h后检测转染效率.琼脂糖凝胶电泳检测MTDH抑制效果.Western blotting法检测转染前后MTDH蛋白表达.通过MTT和流式细胞术检测MTDH基因表达下调后对MCF-7细胞增殖、细胞周期和凋亡坏死的影响.结果 MTDH-siRNA的转染率达90％,转染后MTDH-siRNA-1432对MTDH表达的干扰作用为显著,抑制效率达89％.Western blotting检测结果显示,转染后MTDH蛋白表达降低.转染组乳腺癌细胞增殖受到抑制.转染组、对照组G1期细胞比例分别为67.81％±1.07％、46.81％±0.26％ (P ＜0.05),G2 +S期细胞比例分别为29.08％±1.14％、55.55％ ±0.27％ (P ＜0.05).转染组细胞凋亡比例10.60％±0.46％,坏死比例12.90％±3.63％;对照组细胞凋亡比例4.80％±0.20％,坏死比例6.10％ ±0.44％,转染组细胞凋亡和坏死比例高于对照组(P均＜0.05).结论 下调MTDH基因表达可抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,并促进细胞凋亡和坏死.
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转移黏附基因在乳腺癌组织中的表达及其与肺转移的相关性研究
目的 研究转移黏附基因(MTDH)在乳腺癌组织中的表达及与肺转移的相关性,为进一步研究乳腺癌侵袭转移奠定基础.方法 将40只裸小鼠随机分为空白对照组及乳腺癌模型组a、b、c,分别于接种第10、15、22日处死模型组a、b、c和空白对照组(与模型组c同时处死),取原位瘤及肺组织,肺表面结节计数,免疫组化检测瘤组织中MTDH表达水平.结果 模型组a、b、c乳腺癌组织中MTDH阳性表达率分别为30.3％、62.7％、88.2％,表达逐渐增高;对3组裸鼠肺转移数目进行统计发现,有肺转移者,MTDH表达量更高(x2=7.473,P＜ 0.01),且肺转移数目越多,其表达量越高(Spearman=0.859,P＜ 0.01).结论 MTDH在乳腺癌组织中的表达显著高于正常乳腺组织,且与肿瘤的进展、肺转移的数目呈正相关,提示MTDH与乳腺癌的发生、发展密切相关,与乳腺癌肺转移密切相关.
