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蕨麻对大鼠缺血心肌的保护作用及其血清差异蛋白表达的影响
[目的]研究蕨麻乙醇提取物对大鼠结扎冠状动脉所致急性心肌缺血损伤的保护作用及其差异蛋白质表达谱的影响.[方法]选取雄性SD大鼠随机分为手术对照组,模型组,盐酸地尔硫卓组(diltiazem,30mg/kg),蕨麻乙醇提取物7.2、3.6、1.8 g/kg干预组.连续灌胃10d后,结扎在体大鼠冠状动脉致急性心肌缺血损伤模型.缺血时间持续30min.记录各处理组动物心电图,左心室收缩压LVSP,左心室舒张末期压LVEDP及左室内压大变化速率(±dp/dt max);取血清检测乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)含量;用强阴离子交换芯片(SAX-2)及弱阳离子交换芯片(WCX-2)结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术分析大鼠急性心肌缺血损伤后不同处理组血清中蛋白质表达谱的改变.[结果]冠状动脉结扎致心肌缺血后,心电图ST段出现抬高,蕨麻醇提物7.2和3.6 g/kg组显著抑制了急性心肌缺血损伤导致的大鼠心电图ST段升高(P＜0.05).蕨麻醇提物各剂量组的各项心功能指标[左心室收缩压LVSP,左心室舒张末期压LVEDP及±dp/dt均优于模型组(P＜0.05)].心肌缺血后,血清中LDH和CK含量显著升高,蕨麻醇提物各剂量组血清中LDH和CK均显著降低(P＜0.05).蛋白质芯片结果显示:WCX-2芯片共获得338个血清蛋白质峰;SAX-2芯片共获得348个血清蛋白质峰.缺血30min,模型组质,荷(M/Z)比为4972Da的蛋白质相对含量明显高于对照组(P＜0.01),蕨麻干预后,该蛋白质峰随药物浓度升高而降低,至高剂量组时降至对照组水平,呈现出明显的剂量依赖关系,提示4972Da蛋白质可能是蕨麻抗心肌缺血损伤的药物作用靶点之一,有待进一步研究证实.[结论]蕨麻乙醇提取物能够显著保护急性心肌缺血所致心肌损伤,改善心脏功能.不同剂量蕨麻干预后,心肌损伤后异常表达的蛋白质(4972 Da)剂量依赖性下降.
关键词： 蕨麻 心肌缺血 蛋白芯片 表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱 -
SELDI技术对开放性脊柱裂胎鼠羊水蛋白质组学的初步分析
目的 利用表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术对脊柱裂胎鼠模型的羊水进行初步的蛋白质组学分析.方法 将25只雌性Wistar大鼠随机分为脊柱裂组(n=15)和对照组(n=10).于妊娠第10日(E10)8时,脊柱裂组孕鼠经胃管注入全反式维甲酸与矿物油的混合物(140 mg/kg);对照组孕鼠给予等量的橄榄油.于妊娠第17日(E17)取胎鼠,立体显微镜下抽取羊水(0.2 mL/只)并确定开放性脊柱裂胎鼠.选取60只脊柱裂胎鼠和55只对照组胎鼠的羊水离心取上清.采用PBSⅡC型蛋白质芯片阅读机读取数据.采用Ciphergen protein chip 3.1.1软件对数据进行统计分析.SELDI数据结果采用分类与回归树分析建立诊断模型,用于区分脊柱裂组胎鼠与对照组胎鼠.结果 脊柱裂胎鼠羊水中共检测到55个差异蛋白峰,有统计学意义的差异蛋白峰有9个.包括5种蛋白峰高表达,优化相对分子质量(m/z)分别为11 658,27 387,7 898,11 603,13 831Da;4种蛋白峰低表达,m/z分别为5 124,14 702,5 403,13 626 Da.选取m/z 13 831 Da和m/z 17 798 Da用于建立决策分类树诊断模型,诊断灵敏度93.33％,特异度96.36％,阳性预测值96.55％,阴性预测值96.36％.结论 SELDI技术可初步筛选出脊柱裂胎鼠羊水中的差异蛋白峰,这些蛋白可能是脊柱裂胎鼠羊水中的特异性羊水标志物.
关键词： 神经管缺陷 脊柱裂 表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱 羊水 蛋白标志物 -
神经管缺陷胎儿和神经管缺陷胎鼠羊水蛋白质标记物的比较研究
目的 利用表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术研究神经管缺陷胎儿羊水和神经管缺陷胎鼠羊水的蛋白质谱变化规律.方法 根据实验对象不同分为①经超声确诊为胎儿神经管缺陷的孕妇11例为畸形组.包括脊柱裂5例,无脑儿5例.脑积水1例,病例组孕母均于引产前经腹抽取羊水5 ml,另选产前行羊膜腔穿刺取羊水做染色体核型检测,结果正常且孕周数相匹配的正常孕妇9例为对照组;②45只雌性Wistar大鼠(体重220～260 g),随机分为畸形组(n=30)和对照组(n=15).在标准条件下饲养,午夜雌:雄=4:16笼.次日清晨8时阴道涂片,镜检精子,确定其妊娠日期,有精子者计为孕0日(E_0).在孕10日(E_10)晨8时,畸形组雌鼠称体重.按120mg/kg称取维甲酸与矿物油混合均匀(维甲酸浓度为40mg/ml),经胃管一次注入孕鼠胃内.对照组仅将与畸形组同量且不含维甲酸的矿物油经胃管一次注入.在孕17 d剖腹,每只胎鼠抽取羊水约0.1～0.3 ml,选取11只脊柱裂畸形胎鼠的羊水,15只正常对照胎鼠的羊水.选用CM10蛋白质芯片,在PBSⅡ C型蛋白质芯片阅读机读取数据.采用Ciphergen protein chip 3.1.1软件对数据进行统计分析.结果在设定的优化相对分子量1～30 × 10~3范围内,神经管缺陷胎儿的孕母羊水中共检测到35个差异蛋白峰,其中7个有统计学意义,有6种蛋白质/多肽高表达,相对分子质量分别为14 700,7 995,15 891,16 027,13 776,11 040;1种蛋白质/多肽低表达,相对分子质量为23 417.神经管缺陷胎鼠羊水中共检测到55个羊水差异蛋白峰,有统计学意义的差异蛋白峰有9个.脊柱裂畸形组有5种蛋白质/多肽高表达,相对分子质量分别为11 658,27 387,7 898,11 603,13 829;4种蛋白质/多肽低表达,相对分子质量分别为5 124,14 702,5 403,13 626.将神经管缺陷胎鼠和神经管缺陷胎儿羊水蛋白质谱进行比较分析,发现二者羊水中共同蛋白质/多肽:4 138(4 145),7947(7941),8 588(8 588),9 385(9 390),14 702(14 700).其中14 700(P=0.006)差异具有统计学意义,很可能是神经管缺陷胎儿和神经管缺陷胎鼠羊水共同蛋白质/多肽标志物.结论 神经管缺陷胎儿和胎鼠羊水中可能存在相同的特异性蛋白质/多肽标志物,相对分子质量14 700的蛋白质/多肽对神经管缺陷诊断具有更重要的意义.
关键词： 神经管缺陷 表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱 羊水 蛋白质标志物 -
表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱技术在神经管缺陷胎儿母亲血清、尿液和羊水蛋白质标志物筛查中的研究
目的 探讨利用表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术结合分类与回归树分析(classification and regression tree analysis,CART)在筛选神经管缺陷胎儿母亲血清和尿液蛋白质标志物的应用.方法 孕母血清样本31例,尿液样本35例和羊水样本20例用于检测.采用PBSIIC型蛋白质芯片阅读机读取数据.SELDI数据结果采用分类与回归树分析(CART)建立血清和尿液诊断模型,用于区分神经管缺陷组与正常对照组.结果 与正常组比较,神经管畸形组血清中有8种蛋白质高表达,4种蛋白质低表达;尿液中有4种蛋白质高表达,1种蛋白质低表达;羊水中有6种蛋白质高表达,1种蛋白质低表达.4种蛋白质峰用于建立决策分类树诊断模型,血清诊断灵敏度88.20%,特异度100%;尿液诊断灵敏度80.00%,特异度93.33%.结论 血清和尿液蛋白质谱的高灵敏度和特异度提示表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱结合分类与回归树分析能够筛选神经管缺陷胎儿和正常对照.
