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探究激活态雪旺细胞与生物可降解聚己内酯支架的生物相容性
目的:探究激活态雪旺细胞(ASC)、非激活态雪旺细胞(SC)与生物可降解聚己内酯(PCL)支架的生物相容性.方法:实验组由结扎7 d Wistar大鼠坐骨神经提取激活态雪旺细胞,对照组由来结扎大鼠坐骨神经提取非激活态雪旺细胞.将细胞分别种植在PCL支架上,通过CCK-8检测细胞增殖活性,通过结晶紫观察细胞分布,激光共聚焦显微镜观察细胞形态和功能表达.结果:ASC与SC相比S-100阳性率无明显差异;PCL支架上ASC增殖率明显高于SC;ASC能够贴附PCL纤维生长,可沿纤维长轴分布,进入支架内部,并且表达髓鞘碱性蛋白(MBP).结论:激活态雪旺细胞比非激活态雪旺细胞能够更好地在PCL支架上生长,PCL支架具有良好的生物相容性.
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MeDIP-Seq检测大鼠不同状态雪旺细胞基因甲基化水平
目的：探寻大鼠正常态雪旺细胞（NSCs）和激活态雪旺细胞（ASCs）差异甲基化基因。方法成年Wistar大鼠结扎坐骨神经，饲养7 d后分别从坐骨神经和臂丛神经提取ASCs和NSCs。S-100抗体免疫荧光染色鉴定细胞，CCK-8法测定细胞生长情况。甲基化免疫共沉淀测序（MeDIP-Seq）技术筛选出ASCs和NSCs的差异性甲基化区域；分析与轴突再生相关的差异甲基化基因在染色体的分布情况，并进行基因本体（GO）和信号通路（PATHWAY）分析。结果成功获得了高纯度的ASCs和NSCs，两者S-100均表达阳性。在相同培养条件下，ASCs生长速度更快。MeDIP-Seq共发现177176个差异性甲基化区域，其中位于启动子（≤1 kb）内1097个、启动子（1~2 kb）内1136个，CpG岛内567个。共获得214个与轴突再生相关的差异甲基化基因，与NSCs相比，ASCs高甲基化基因191个，低甲基化基因23个。这些基因位于各个染色体上，以12号染色体上多（22个），M染色体少（2个）。GO分析结果显示差异甲基化基因涉及了轴突生长、轴突形成、轴突延伸和轴突导向等过程；并且与MAPK、细胞黏附分子和Ras等信号通路有关。结论 ASCs和NSCs的甲基化水平存在明显的差异，可能与轴突再生有关。
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激活态雪旺细胞联合脐血间充质干细胞移植修复脊髓损伤的研究
目的 观察激活态雪旺细胞(ASCs)与人脐血间充质干细胞(HUCBMSCs)局部联合移植后脊髓损伤局部神经标志物的变化,探讨ASCs与HUCBMSCs联合移植在促进大鼠脊髓损伤后轴突再生和功能恢复方面所起的作用.方法 采用前期实验方法获得ASCs及HUCBMSCs,并制作成年雌性Wistar大鼠胸10脊髓损伤模型.将80只大鼠随机分成4组:空白对照组[注射杜尔伯科改良伊格尔培养基(DMEM)];ASCs移植组;HUCBMSCs移植组;ASCs与HUCBMSCs联合移植组.分别将DMEM、ASCs、HUCBMSCs以及ASCs+ HUCBMSCs移植入对应组的脊髓损伤部位.术后采用Basso,Beattie和Bresnahan (BBB)评分对大鼠的后肢功能恢复情况进行评价.于脊髓损伤后1、2、3、4周取脊髓损伤中心组织进行Western blot半定量检测及实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测.12周后,从每组随机选取8只大鼠进行10％生物素葡聚糖胺(BDA)顺行示踪标记.标记2周后处死大鼠,将损伤段脊髓取出作5μm快速冰冻切片后,进行BDA显影、苏木素-伊红(HE)染色,神经丝蛋白-200(NF-200)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、髓鞘碱性蛋白(MBP)免疫组织化学染色.综合以上数据并进行统计学分析.结果 Western blot及FQ-PCR结果显示NF-200及MBP表达量在各组均有升高,但以联合移植组高(损伤后4周NF-200:4.581±0.588,MBP:3.922±0.259);损伤后8周,共移植组大鼠的BBB评分[(16.800 0 ±0.223 0)分]显著高于其余3组(P =0.000).BDA顺行示踪标记显示共移植组较ASCs移植组和HUCBMSCs移植组有较多的再生神经纤维通过损伤区,而空白对照组几乎未见再生神经纤维穿越.HE染色显示细胞共移植组损伤空洞明显小于其余3组(P =0.000).结论 ASCs联合HUCBMSCs移植治疗脊髓损伤可促进更多的HUCBMSCs向神经元方向分化,促进轴突再生,改善脊髓损伤后功能的恢复.
