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普萘洛尔对小鼠血管瘤细胞体外增殖及凋亡的影响
目的:通过β受体阻滞剂普萘洛尔作用于小鼠EOMA血管瘤细胞体外增殖及凋亡的实验研究,初步探讨普萘洛尔治疗血管瘤的机制.方法:体外培养EOMA细胞,使用不同浓度普萘洛尔分别作用于EOMA细胞24、36、48 h,应用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率、吖啶橙染色检测细胞凋亡情况,观察普萘洛尔对EOMA细胞体外增殖和凋亡的影响.结果:作用24 h后,随剂量增加,EOMA细胞存活率逐渐下降,与对照组相比,至药物浓度为75 μmol/L时有显著差异(P<0.05),继续增加至800 μmol/L时,细胞存活率接近0,同时吖啶橙染色示凋亡细胞逐渐增多,与对照组相比,至药物浓度75 μmol/L时,细胞凋亡率有显著差异(P <0.05).36 h组和48 h组变化趋势与24h组相似.结论:普萘洛尔在体外可有效抑制小鼠EOMA血管瘤细胞的增殖并促进其凋亡,这一作用呈现明显的剂量-时间效应依赖性.
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NF-κ Bp65基因siRNA腺病毒载体的构建及其对EOMA细胞的影响
目的 构建含NF-κ Bp65基因siRNA腺病毒载体,并研究其对小鼠血管瘤细胞EOMA中NF-κ Bp65基因表达的影响.方法 首先构建含有NF-κ Bp65 shRNA的人H1启动子真核表达载体pSuperH1/shp65,利用Not I与sal I双酶切将人H1载体扁动子和NF-κ Bp65 shRNA序列亚克隆至经相同酶切的腺病毒穿梭质粒pShuttle中,形成转移质粒pShuttle-H1/shp65,然后转化含有pAdeasy的大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,提取含目的 基因的腺病毒重组体质粒,经Pac I酶切线性化后用脂质体转染293细胞,包装成重组腺病毒Ad-shp65,扩增、纯化,并对病毒滴度进行检测.利用得到的重组腺病毒感染小鼠血管瘤细胞EOMA.采用RT-PCR和荧光定PCR检测感染前后NF-κ Bp65表达水平的变化,观察Ad-shp65对EOMA中NF-κBp65表达的影响.结果 成功构建NF-κ Bp65 siRNA腺病毒载体,该载体可明显抑制EOMA细胞中NF-κBp65的表达.结论 构建的Ad-shp65腺病毒能有效抑制NF-κ Bp65基因在小鼠血管瘤细胞中的表达,为研究异种移植延迟性排斥反应提供了新的方法.
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shRNA干扰技术沉默VEGF表达治疗血管内皮瘤的实验研究
目的 构建血管内皮生长因子(VEGF)短发夹RNA真核表达质粒(shVEGF),观察其对血管内皮瘤细胞系(EOMA)细胞体外增殖及动物实验的影响.方法 构建真核表达质粒pGenesil-3-shVEGF并转染EOMA细胞,采用CCK-8法检测shVEGF对EOMA细胞增殖能力的影响.建立EOMA细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分为对照组和shVEGF组,肿瘤出现后,隔日测量瘤体体积,并观察体积变化.结果 转染48 h后EOMA细胞增殖受到抑制.体内实验显示经shVEGF治疗后,裸鼠皮下移植瘤体生长缓慢,体积明显缩小.结论 RNA干扰技术实现VEGF基因沉默,能明显抑制EOMA细胞增殖及体内肿瘤生长,提示shVEGF在血管内皮瘤、血管瘤等血管瘤样病变的生物治疗中可能有较好的应用前景.
