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CXCL12-KDEL融合基因绿色荧光蛋白表达载体的构建与鉴定
目的:构建CXCL12-KDEL融合基因绿色荧光蛋白表达载体并鉴定其在人舌癌细胞株Tb3.1(以下简称Tb3.1)中的表达.方法:设计特定引物,以人基因组DNA为模板,PCR扩增目的基因CXCL12-KDEL,经纯化的目的基因连接19T载体,插入pIRES2-EGFP表达载体中,使用Bgl Ⅱ/SalⅠ进行双酶切,酶切初步鉴定后,测序鉴定.测序正确的重组质粒经脂质体(LipofectamineTM 2000)介导体外转染Tb3.1,转染48h及72h在倒置荧光显微镜下观察.利用Western-blot检测重组质粒CXCL12-KDEL表达情况.结果:经酶切及测序鉴定证实目的基因(CXCL12-KDEL)已成功扩增并插入重组质粒;重组质粒转染Tb3.1细胞,倒置荧光显微镜下可见绿色荧光,Western-blot检测转染可见E-tag蛋白表达.结论:成功构建了CXCL12-KDEL融合基因绿色荧光蛋白表达载体,为进一步完成CXCL12-CXCR4生物学轴的阻断实验奠定了基础.
关键词： CXCL12-KDEL 绿色荧光蛋白 基因表达 人舌癌细胞系 -
维甲酸诱导Tca8113细胞凋亡及其机理探讨
目的研究维甲酸在体外对Tca8113(人舌癌细胞系)细胞系凋亡的诱导作用.方法在细胞培养液体系中加入不同浓度的维甲酸(Retinoic Acid, RA)进行诱导,以流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期时相变化,同时应用光镜、电子显微镜技术检测细胞形态学改变.结果 RA对Tca8113细胞凋亡率为23%,细胞周期时相变化以 G1期细胞为显著.光镜下观察经RA诱导后的Tca8113细胞变圆、细胞间隙变大,游离细胞增多.电子显微镜观察细胞核凝固变小、凋亡小体增加,细胞内线粒体肿胀、变性.结论 RA能够诱导Tca8113细胞发生凋亡,G1期细胞受阻,不能进入S期.
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血管内皮生长因子在口腔鳞状细胞癌中的表达
血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在肿瘤的发生中起着重要作用.本研究采用免疫组化方法检测了VEGF在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carci-noma,OSCC)组织中的表达,并且采用RT-PCR方法检测人舌癌细胞系Tca8113中VEGF mRNA的表达,探讨VEGF在口腔鳞癌生长中的作用.
