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氨基末端激酶信号通路在Apoptin基因诱导Hela细胞凋亡中的作用
目的:探讨肿瘤特异性凋亡基因(Apoptin gene)在诱导Hela细胞凋亡时,c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在细胞发生凋亡中的作用.方法:用含有肿瘤特异性凋亡(Apoptin)基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的Hela;采用流式细胞仪、免疫印迹法(Western blot)、苔盼蓝染色法及RT-PCR等方法研究其在不同时间条件下Hela细胞诱导凋亡的作用.结果:Apopin基因瞬间转染的Hela细胞可出现明显的细胞凋亡;而且凋亡细胞的数量与Apoptin的转染时间有关;凋亡细胞内磷酸化型JNK蛋白随凋亡细胞数量的增加而增多,而非磷酸化型JNK蛋白表达无明显变化.结论:Apoptin基因具有诱导Hela细胞凋亡的作用JNK信号通路的激活可能在Apoptin诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥作用.
关键词： 肿瘤特异性凋亡基因 细胞凋亡 c-Jun氨基末端激酶 -
Apoptin基因诱导A 375细胞凋亡信号转导机制
目的 研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptin)在诱导人黑色素瘤细胞A 375凋亡中的信号转导机制.方法 用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑色素瘤细胞A375;采用RT-PCR、DNA凝胶电泳、流式细胞仪分析检测A375的细胞的凋亡;以比色法检测半胱天冬蛋白酶8(caspase-8)和caspase-3的相对活性.结果 Apoptin基因瞬间传染的A375细胞可出现典型的细胞凋亡所具有DNA梯状带;流式细胞术发现实验组细胞凋亡率明显高于其他各组(P＜0.01);Caspase-3的活性升高,但caspase-8活性没有明显变化.结论 Apoptin基因可通过激活caspase-3诱导人黑色素瘤细胞A 375凋亡.
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肿瘤特异性凋亡基因诱导人黑色素瘤细胞凋亡机制的研究
目的研究肿瘤特异性凋亡基因(Apoptin gene)在诱导人黑色素瘤细胞A375发生凋亡时,c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在细胞发生凋亡中的作用.方法用含有肿瘤特异性凋亡(Apoptin) 基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑色素瘤细胞A375;采用流式细胞仪、免疫印迹法(Western blot)、台盼蓝染色法及RT-PCR等方法研究其在不同时间条件下对人黑色素瘤细胞A375诱导凋亡的作用.结果 Apoptin基因瞬间转染的人黑色素瘤A375细胞出现明显的细胞凋亡,凋亡细胞的数量随Apoptin转染时间延长而增多,磷酸化型JNK蛋白在转染Apoptin 24 h开始表达,48h和72h过表达,而非磷酸化型JNK蛋白表达无明显变化.结论 Apoptin基因具有诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡的作用,JNK信号通路的激活可能在Apoptin诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥作用.
关键词： 肿瘤特异性凋亡基因 细胞凋亡 c-Jun氨基末端激酶 -
肿瘤特异性凋亡基因诱导人结肠癌细胞凋亡机制的探讨
目的:研究肿瘤特异性凋亡蛋白基因(apoptin)在诱导人结肠癌细胞凋亡过程中的信号转导机制.方法:用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人结肠癌细胞;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测人结肠癌细胞的凋亡;Westemblot检测Bcl-2/Bax蛋白表达,SPSS13.0统计软件进行数据分析.结果:Apoptin基因瞬间转染的结肠癌细胞可出现典型的细胞凋亡所具有的DNA梯状带;流式细胞术检测发现,实验组细胞凋亡率[(40.45±0.76)%]明显高于正常对照组[(3.25±0.16)]和载体对照组[(3.55±0.12)%]P<0.01);Bax的活性升高,但bcl-2蛋白含量无明显变化.结论:Apoptin基因可通过激活Bax诱导结肠癌细胞凋亡.
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Caspase-3 在Apoptin基因诱导Hela细胞凋亡中的作用
目的: 研究Caspase-3在Apoptin gene诱导Hela细胞凋亡中的作用.方法: 用含有Apoptin基因的真核表达载体pcDNAA3瞬间转染体外培养的Hela细胞;Hela细胞瞬间转染后0、24、48、72和96 h,分为正常的Hela细胞对照组,pcDNA3.1质粒转染对照组和实验组.分别采用RT-PCR、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测Hela细胞的凋亡;以比色法检测Caspase-3的相对活性.结果: 以转染后24、48和72 h Hela细胞的总RNA 为模板,经RT-PCR均可扩增出Apoptin cDNA, 正常Hela细胞和空载体转染细胞均为阴性表明Apoptin 已在转染细胞中表达;Apoptin基因瞬间转染的Hela细胞可出现典型的细胞凋亡所具有的DNA梯状带, 表明有凋亡发生;FCM检测发现, 以Apoptin基因转染后48 h,在DNA直方上的G1峰前,即出现1个明显的亚2倍体峰(亚G1峰,即凋亡峰),并随着转染时间延长而增强.细胞凋亡率与对照组相比较差异显著(P＜0.05 ).Hela细胞经pcDNAA3质粒转染后24 h实验组Caspase-3的活性开始升高,72 h达高峰,明显高于正常细胞对照组和pcDNA3.1对照组(P＜0.01).结论: Apoptin基因可通过激活Caspase-3诱导Hela细胞凋亡.
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Apoptin基因通过激活caspase-3诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡
目的:研究caspase-3在肿瘤特异性凋亡基因诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡中的作用.方法:用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑色瘤细胞A375;采用RT-PCR、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测A375细胞的凋亡;以比色法检测caspase-3的相对活性.结果:Apoptin基因瞬间转染的A375细胞可出现典型的细胞凋亡所具有的DNA梯状带;流式细胞术发现实验组细胞凋亡率明显高于其他各组(P＜0.01);转染后24 h实验组caspase-3的活性开始升高,72 h达高峰,明显高于其他各组(P＜0.01).结论:Apoptin基因可通过激活caspase-3诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡.
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肿瘤特异性凋亡基因诱导人淋巴瘤细胞凋亡的机制
目的:研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptin gene)在诱导人淋巴瘤细胞U937凋亡时, c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的作用.方法: 用含有apoptin基因的真核表达载体, 瞬时转染体外培养的人淋巴瘤细胞U937.采用流式细胞仪、 Western blot、台盼蓝染色及RT-PCR等研究其在不同时间条件下诱导U937细胞凋亡的作用.结果: Apopin基因瞬时转染U937细胞48 h, 可出现明显的凋亡; 而且凋亡细胞的数量与apoptin基因的转染时间有关.诱导后24 h, U937细胞中出现磷酸化的JNK蛋白的表达, 诱导后48 h达高峰; 而非磷酸化的JNK蛋白表达无明显变化.结论: Apoptin基因具有诱导U937细胞凋亡的作用.JNK信号通路的激活, 可能在apoptin基因诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥着重要作用.
关键词： 肿瘤特异性凋亡基因 细胞凋亡 c-Jun氨基末端激酶
