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中性粒细胞胞外捕网在痛风性关节炎中的作用机制
急性痛风性关节炎是痛风常见的首发症状,早期常可于短时间内自行缓解,随着病程进展,发作频率逐渐增加,持续时间逐渐延长,直至无法自行缓解,并伴发痛风石的形成,其具体机制尚未阐明.近年有研究发现,中性粒细胞胞外捕网可以激活免疫系统,同时聚集中性粒细胞胞外捕网可能通过降低细胞因子和趋化因子水平,缓解痛风急性期炎性反应,并且可与尿酸盐结晶紧密结合,参与痛风石的形成.
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分子伴侣性自噬参与LAMP-2抗体诱导中性粒细胞胞外捕网形成
目的 探讨分子伴侣性自噬在LAMP-2抗体诱导中性粒细胞胞外捕网(NETs)形成的作用及机制.方法 采用PolymorphprepTM方法分离健康志愿者和抗中性粒细胞胞浆抗体相关性血管炎(AAV)患者外周静脉血中的中性粒细胞,直接离体或LAMP-2抗体刺激健康人外周血中性粒细胞,通过自噬阻断剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和放线菌酮(CHX)进行干预,免疫荧光观测NETs的形成,免疫荧光法和免疫印迹法检测分子伴侣自噬相关蛋白LAMP-2A、Hsc70的表达.结果 与正常中性粒细胞组相比,AAV患者中性粒细胞LAMP-2A表达增加(P=0.002 3);LAMP-2抗体可诱导中性粒细胞LAMP-2A、Hsc70蛋白表达明显上调(P＜0.01),CHX能明显降低LAMP-2抗体引起的LAMP-2A、Hsc70蛋白表达(P＜ 0.000 1);与3-MA组相比,CHX组能明显减少LAMP-2抗体诱导的NETs形成(P＜ 0.000 1).结论 LAMP-2抗体可诱导人中性粒细胞分子伴侣性自噬增强及NETs形成,放线菌酮可抑制此过程,提示分子伴侣性自噬可能参与了NETs的形成.
关键词： 自噬 抗中性粒细胞胞浆抗体 中性粒细胞胞外捕网 血管炎 -
琼脂糖明胶皮下埋植法富集、分离具有自发NETs倾向的小鼠中性粒细胞
目的 建立小鼠中性粒细胞富集、分离的方法,为进一步探讨中性粒细胞及中性粒细胞胞外捕网(NETs)的免疫损伤效应奠定基础.方法 制备2％琼脂糖0.2％明胶块,埋植于健康6～8周龄C57雌性小鼠皮下富集中性粒细胞,96 h后取出明胶块置于PBS中进行游离释放,收集细胞.荧光染色进行细胞形态学观察,采用Gr-1及CD1 1b进行流式细胞分析鉴定.结果 不同表面积的明胶能够分离出106～ 107数量级细胞,具有中性粒细胞典型的分叶核形态学特征,流式细胞分析鉴定为Gr-1+CD11b+的中性粒细胞,纯度可达95.7％,并观察到典型NETs形成,其数量随分离时间的延长而增加.结论 通过皮下埋植琼脂糖明胶成功富集、分离大量高纯度且具有自发NETs倾向小鼠中性粒细胞.
