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芪棱汤对脑缺血/再灌注大鼠μ-钙依赖蛋白酶-1 mRNA的影响
目的 探讨芪棱汤及其拆方对局灶性脑缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠神经元的保护作用,并阐明芪棱汤及其拆方对μ-钙依赖蛋白酶-1(calpain-1)mRNA的调节机制.方法 将SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、芪棱汤去养阴药组、芪棱汤组;后3组又随机分为缺血3 h再灌注6、24、36、48和72 h组,每组4只.运用改良线栓法制备大鼠局灶性脑I/R损伤模型,并进行神经行为学评分.采用原位杂交法观察芪棱汤及其拆方对calpain-1 mRNA表达的影响.结果 正常对照组和假手术组神经行为学评分正常,且仅有微量calpain-1 mRNA 阳性表达.芪棱汤去养阴药组和芪棱汤组I/R后各时间点大鼠神经行为学评分较模型组显著下降,以芪棱汤组为佳,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).I/R损伤发生后,calpain-1 mRNA表达增高,并在再灌注发生后24 h和48 h达峰值,形成双峰;芪棱汤及其拆方calpain-1 mRNA阳性表达于I/R后各时间点均低于模型组,其中芪棱汤再灌注各时间点的阳性表达又低于相应时间点的芪棱汤去养阴药组(P＜0.05或P＜0.01).结论 芪棱汤及其拆方可通过抑制calpain-1 mRNA的表达,减少calpain-1的合成,从而减轻脑I/R发生后calpain激活所导致的神经元损伤,发挥神经元保护作用.
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蛋白激酶A抑制剂对血小板膜糖蛋白I bα表达及血小板功能的影响
目的 探讨蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)对血小板膜糖蛋白(Glycoprotein,GP)I bα表达的调控作用.方法 用健康人洗涤血小板与PKA抑制剂H89温育.用Westem blot检测血小板悬液中GP I bα的酶切片段糖萼蛋白(glycocalicin,GC),并用流式细胞术检测GP I bα的膜表达量.用Western blot检测血小板骨架蛋白的酶切程度来确定钙依赖蛋白酶(calpain)活性,并用流式细胞术检测血小板表面calpain的表达.用血小板聚集仪检测PKA抑制剂H89对瑞斯托霉素诱导的血小板聚集功能的影响.结果 洗涤血小板经H89处理后,血小板表面GP I bα被酶切并释放于血小板悬液中,使血小板表面GP I bα的表达水平显著降低(P＜0.05).多种calpain抑制剂与血小板预温育均可减少GP I bα的酶切程度,表明PKA抑制剂所致的酶切是calpain依赖性的.肌动蛋白结合蛋白(actin-bindingprotein,ABP)和踝蛋白(talin)的酶切表明calpain可被PKA抑制剂激活,流式细胞术结果 表明calpain在血小板表面有所表达.血小板经PKA抑制剂处理后,瑞斯托霉素诱导的聚集功能受到抑制.结论 抑制血小板PKA活性,可导致calpain依赖性的GP I bα酶切,使GP I bα膜表达量减低,并导致GP I bα依赖的血小板聚集功能减低.
