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肝素预处理对脓毒症小鼠血清及肺组织中性粒细胞胞外诱捕网水平的影响
目的 探讨肝素预处理对脓毒症小鼠血清及肺组织中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)的影响及其作用机制.方法 按随机数字表法将雄性C57BL/6J小鼠分为对照组、模型组、肝素干预组,每组30只.腹腔注射脂多糖(LPS)30 mg/kg(溶于100μL生理盐水)建立脓毒症动物模型;肝素干预组于制模前30 min皮下注射普通肝素8 U(溶于20μL生理盐水).各组于制模后6 h取血清和肺组织,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)以及反映NETs水平的组蛋白2AX(H2AX)和中性粒细胞弹性蛋白酶(NE);用PicoGreen荧光染料检测血清游离DNA(cf-DNA/NETs)水平;用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肺组织H2AX、NE蛋白表达.结果 模型组血清TNF-α、IL-6、H2AX、NE、cf-DNA/NETs水平及肺组织H2AX、NE蛋白表达均明显高于对照组〔TNF-α(ng/L):133.0±14.1比2.7±1.0,IL-6(ng/L):3911.2±189.2比298.9±52.5,H2AX(ng/L):545.5±40.0比21.9±8.3,NE(μg/L):6.48±0.12比0.47±0.15,cf-DNA/NETs(μg/L):846.3±137.5比152.7±36.4,H2AX蛋白(灰度值):1.14±0.09比0.68±0.04,NE蛋白(灰度值):0.56±0.03比0.32±0.04,均P<0.05〕.肝素预处理能明显降低脓毒症小鼠血清TNF-α、H2AX、NE、cf-DNA/NETs水平及肺组织H2AX、NE蛋白表达〔TNF-α(ng/L):83.2±7.6比133.0±14.1,H2AX(ng/L):435.0±39.0比545.5±40.0,NE(μg/L):4.26±0.17比6.48±0.12,cf-DNA/NETs(μg/L):606.5±73.9比846.3±137.5,H2AX蛋白(灰度值):0.91±0.03比1.14±0.09,NE蛋白(灰度值):0.42±0.03比0.56±0.03,均P<0.05〕,而对血清IL-6水平无明显影响(ng/L:3919.9±166.6比3911.2±189.2,P>0.05).结论 肝素预处理能降低脓毒症小鼠血清及肺组织中NETs水平,可能是对脓毒症发挥器官保护作用的潜在机制.
关键词： 脓毒症 中性粒细胞胞外诱捕网 肝素 组蛋白2AX 中性粒细胞弹性蛋白酶
