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肺表面活性物质相关蛋白C真核表达载体的构建及体外表达
目的 克隆人肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)基因,构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/SP-C,并检测其在体外的表达,为SP-C的批量生产提供可靠的方法.方法 提取肺癌手术患者病灶周围正常肺组织总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术获得SP-C cDNA序列.用NotI和XhoI内切酶双酶切SP-C cDNA序列和质粒pcDNA3.1(+),胶回收后体外连接.酶切和测序后,用脂质体包裹转染人乳腺癌细胞株MCF-7,采用RT-PCR和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测SP-C的表达.结果 能够正确克隆人SP-C基因并插入至质粒pcDNA3.1(+)中;重组质粒体外转染MCF-7细胞后可以表达SP-C蛋白.结论 采用体外重组技术,成功构建了人SP-C真核表达载体 pcDNA3.1(+)/SP-C,并能在体外表达SP-C,为下一步构建人SP-C乳腺特异表达载体,利用乳腺生物反应器大量生产SP-C奠定了基础.
关键词： 肺表面活性物质相关蛋白C 真核表达载体 克隆 转染 MCF-7细胞 -
骨髓间充质干细胞来源外泌体对烟雾吸入伤大鼠的保护作用
目的 间充质干细胞可以减轻多种原因诱导的急性肺损伤,一些研究表明间充质干细胞来源外泌体具有与母细胞相似的功能,但其对急性肺损伤的作用研究较少.文中旨在探讨骨髓间充质干细胞来源外泌体(BMSC-DEs)对烟雾吸入伤(SⅡ)大鼠的保护作用及其可能机制. 方法 30只wistar大鼠随机均分为对照组,烟雾吸入伤模型组(SⅡ组),骨髓间充质干细胞来源外泌体治疗组(BMSC-DEs组).建立大鼠SⅡ模型,12h后BMSC-DEs组经尾静脉注射0.5 mL大鼠BMSC-DEs(来源于4× 106BMSCs),对照组和SⅡ组注射等量等渗盐水,7d后收集实验标本.HE染色观察肺组织病理变化,BCA法测定肺泡灌洗液中总蛋白含量,ELISA法检测肺组织匀浆中炎性因子TNF-α及角质细胞生长因子KGF的水平,免疫组化检测肺表面活性物质相关蛋白C的表达. 结果 与对照组BALF中总蛋白[(0.164±0.021) ng/L]相比,SⅡ组[(0.355±0.106) ng/L]较高(P＜0.01);BMSC-DEs组BALF中总蛋白含量[(0.234±0.024) ng/L]低于SII组(P＜0.05).与对照组肺组织匀浆炎性因子TNF-α水平相比,SⅡ组和BMSC-DEs组明显升高(P＜0.05),且SⅡ组高于BMSC-DEs组(P＜0.01).SⅡ组肺组织匀浆KGF表达低于对照组(P＜0.05),而BMSC-DEs组KGF表达高于对照组和SII组(P＜0.05).免疫组化染色示:BMSC-DEs组和对照组SP-C表达均高于SⅡ组(P＜0.05),BMSC-DEs组和对照组间差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 骨髓间充质干细胞来源外泌体对烟雾吸入伤大鼠具有保护作用,其机制可能与外泌体减轻炎症反应和促进Ⅱ型肺泡上皮修复有关.
关键词： 烟雾吸入伤 间充质干细胞 外泌体 肺表面活性物质相关蛋白C -
儿童特发性间质性肺疾病与SPC基因外显子4T138N位点基因多态性相关性研究
目的 探讨肺表面活性物质相关蛋白C(surfactant protein-C,SP-C)基因外显子4 T138N位点基因多态性与儿童特发性间质性肺疾病易感性的关系.方法 特发性间质性肺疾病患儿67例为观察组,同期住院非特发性间质性肺疾病患儿102例为对照组,采用高通量测序法检测2组SP-C基因外显子4 T138N位点基因多态性,比较2组SP-C基因外显子4 T138N位点基因型分布和等位基因频率.结果 观察组SP-C基因外显子4 T138N位点CC、CA、AA基因型分布频率(59.7％、31.3％、9.0％)与对照组(50.0％、40.2％、9.8％)比较差异无统计学意义(P＞0.05);观察组SP-C基因外显子4 T138N位点C、A等位基因频率(75.4％、24.6％)与对照组(70.8％、29.2％)比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SP-C基因外显子4 T138N位点基因多态性可能与儿童特发性间质性肺疾病易感性无关.
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肺表面活性物质蛋白C基因I73T突变相关性婴幼儿肺间质疾病一例
病例资料 患儿,男,1岁,因咳嗽20余日,加重2d,伴发热.于我院免疫科病房住院治疗.入院前夜可见咳后伴呻吟及呼吸困难.查体:神志清,反应可,呼吸促,面色可,无发绀,咽充血,双肺呼吸音粗,可闻及干、湿性啰音,左肺呼吸音减低,心音有力,律齐,心率160次/分,各瓣膜听诊区未闻及病理性杂音,腹软不胀,未及包块,肝脾肋下未及,肠鸣音存,四肢活动正常.门诊血常规:示血红蛋白128g/L,白细胞15.19×109/L,中性72.6％,淋巴16.2％,单核10.6％,血小板341×109/L,CRP 14mg/L.门诊CT:示双肺弥漫磨玻璃密度影,右肺下叶肺大泡,双侧支气管管壁增厚,双肺小叶间隔增厚,双肺间质气肿,胸廓入口水平软组织内及纵隔内积气(图1).
