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A2b腺苷受体活化降低脂多糖诱导的肺微血管内皮通透性
目的 探讨A2b腺苷受体(Adora2b)在脂多糖(LPS)诱导人肺微血管内皮通透性中的作用及机制.方法 原代培养人肺微血管内皮细胞(HPMECs),进行LPS量效-时效实验及Adora2b激动剂/抑制剂干预实验.① 量效-时效实验:以1、10、100、1 000 μg/L的LPS作用24 h,或以100 μg/L的LPS作用4、8、12、16、24 h后,用细胞毒性实验检测细胞活性,用实时荧光反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测Adora2b表达.② Adora2b激动剂/抑制剂干预实验:将血清饥饿后的HPMECs,用Adora2b激动剂BAY60-6583(0.1、1、10 μmol/L)或Adora2b抑制剂PSB1115(1 μmol/L)预处理1 h,再加入100 μg/L的LPS处理24 h ;同时设立空白对照、LPS、BAY60-6583和PSB1115单独处理组.用异硫氰酸荧光素(FITC)-葡聚糖法检测HPMECs单层通透性,用流式细胞仪测定细胞周期,用RT-PCR检测内皮细胞间连接蛋白和促血管生成因子的表达.结果 ① 量效-时效实验:LPS可诱导HPMECs细胞活性下降,并呈时间-剂量依赖性.与对照组比较,100 μg/L和1 000 μg/L的LPS作用后HPMECs表面Adora2b蛋白表达明显上调;Adora2b mRNA表达呈时间-剂量依赖性增高.② Adora2b激动剂/抑制剂干预实验:与对照组比较,LPS可明显增加HPMECs单层通透性,抑制细胞活性和细胞增殖,降低细胞间连接蛋白和促血管生成因子表达.与LPS组比较,0.1、1、10 μmol/L BAY60-6583预处理可呈剂量依赖性降低HPMECs单层通透性〔通透系数(Pd):(203.06±15.24)%、 (164.15±17.82)%、 (125.69±10.38)%比(218.53±12.05)%〕, 提高细胞活性〔(48.64± 5.05)%、 (59.58±2.71)%、 (94.89±12.17)%比(35.97±5.40)%〕,促进细胞增殖〔S+G2期细胞数:(24.36± 1.40)%、(32.27±0.95)%、 (40.05±2.99)%比(18.83±0.73)%〕;10 μmol/L BAY60-6583预处理还可以上调细胞间连接蛋白的mRNA表达〔钙黏蛋白(VE-cadherin)mRNA(2-ΔΔCt):2.17±0.23比0.56±0.10, 封闭蛋白(occludin)mRNA(2-ΔΔCt):5.32±0.28比0.48±0.11〕,促进促血管生成因子mRNA表达〔血管内皮生长因子(VEGF)mRNA(2-ΔΔCt):4.44±0.34比0.58±0.09,血管生成素1(ANGPT1)mRNA(2-ΔΔCt):5.98±0.73比0.66± 0.10,均P＜0.05〕.PSB1115预处理则可进一步增加HPMECs通透性,降低细胞间连接蛋白表达,加重细胞损伤.BAY60-6583或PSB1115本身对细胞活性、细胞周期分布及促血管生成因子表达均无显著影响.结论在LPS诱导的人肺微血管内皮损伤中,Adora2b表达上调;Adora2b活化通过调节细胞间连接、促进血管生成等机制降低肺微血管内皮屏障通透性.
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A2B腺苷受体在支气管哮喘气道炎症中的作用及其治疗展望
内源性腺苷是一种普遍存在的信号分子,它通过至少4种特异性腺苷受体(A1、A2A、A2B和A3)调节一系列生理和病理反应.功能性A2B受体存在于与支气管哮喘(简称哮喘)发病相关的多种细胞上.本文综述A2B受体在哮喘气道炎症反应中的作用,以及A2B受体拮抗剂在哮喘治疗中的地位.
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缺氧诱导因子在肠缺氧中的研究进展
肠系膜缺血性疾病和危重症病人的肠道血流减少、炎性激活会引起严重的肠缺血、缺氧状态.缺氧诱导因子(HIF)调控下游一系列基因转录,介导机体内源性炎性缓解机制的运行,参与肠道的适应性改变.在缺氧状态下,HIF蛋白转录后分解减少,使其能稳定存在并激活一系列下游基因参与,以缓解缺血后的肠损伤.目前受关注的有细胞内腺苷相关信号通路,尤其是A2B腺苷受体通路及缺氧诱导的神经生长因子-1介导缺血后信号通路.HIF介导的抗炎效应也参与缺血后肠功能的保护.血栓导致的肠缺血HIF还参与肠道血管的再通过程.HIF相关通路的研究为治疗肠缺氧损伤和继发多器官功能障碍提供诸多潜在靶点,针对相关靶点干预措施的研究也取得十分良好的效果,但目前还局限于细胞和转基因动物模型中.将来部分这类新型药物有可能从实验室转入临床,给肠道缺氧性疾病的治疗带来新的思路.以下将对HIF在肠缺氧中的新研究作一综述.
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琥珀酰明胶注射液对脓毒症大鼠A2B腺苷受体介导的肺毛细血管通透性的影响
目的 研究不同剂量琥珀酰明胶注射液(改良明胶,MFG)对A2B腺苷受体(A2BAR)介导的肺毛细血管通透性的影响.方法 50只雄性SD大鼠,随机分为五组,每组10只,假手术组(S组):不结扎,不穿孔,不复苏；生理盐水组(NS组,30 ml/kg);输注MFG 7.5 ml/kg组(MFG1组)；15 ml/kg组(MFG2组);30 ml/kg组(MFG3组).大鼠盲肠结扎穿孔(CLP)术后4h开始液体复苏2h,6h内持续监测HR和MAP,6h后处死动物取相应组织进行检测:肺毛细血管通透性、A2BAR含量、cAMP及PKA表达水平、TNF-α、IL-6和IL-10含量.结果 与S组比较,NS、MFG1、MFG2、MFG3组肺毛细血管通透性、A2BAR表达、cAMP及PKA、TNF-α、IL-6和IL-10含量均升高(P＜0.05或P＜0.01).与NS组比较,MFG组肺毛细血管通透性均降低(P＜0.05)；A2BAR表达,cAMP及PKA含量均升高(P＜0.05或P＜0.01).TNF-α,IL-6和IL-10含量差异无统计学意义.结论 MFG可通过增强内皮细胞上A2BAR的表达及其信号通路的传导来发挥其肺血毛细血管保护作用.
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小儿急性肠梗阻肠坏死A2B腺苷受体、紧密连接蛋白Occludin的表达及临床意义
目的 研究小儿急性肠梗阻A2B腺苷受体、紧密连接蛋白Occludin的表达及临床意义.方法 选择医院小儿科收治的30 例急性肠梗阻肠坏死患儿作为治疗组,30 例消化道畸形患儿作为对照组.两组患儿均行肠切除肠吻合术.检测方法:①免疫组化方式检测肠管黏膜上皮细胞中A2B腺苷受体( A2BAR)、紧密连接蛋白的表达;②蛋白印记(WB)检测两组患儿肠黏膜上皮细胞中p38丝裂原活化蛋白酶(p38MAPK)以及磷酸化p38MAPK (p-p38MAPK)的表达;③酶联免疫吸附测定法( ELIA)检测术前以及术后7 d 血清中的血清肿瘤坏死因子 α (TNF-α)含量.结果 治疗组患儿A2BAR灰度值(139.33 ±34.06)低于对照组(177.60 ±11.58,P＜0.01);治疗组患儿Occludin蛋白灰度值(198.63 ±14.23)高于对照组(175.64 ±18.17,P＜0.01);与对照组比较,治疗组患儿的p38MAPK表达比较差异未见统计学意义(P＞0.05),p-p38MAPK的表达升高,差异有统计学意义(P＜0.05);术前治疗组患儿TNF-α浓度为(95.30 ±9.39)pg/ml,高于对照组的(70.57 ±5.84)pg/ml(P＜0.05);治疗后7 d治疗组患儿TNF-α浓度与对照组比较差异未见统计学意义(P＞0.05).结论 小儿急性肠梗阻肠坏死导致缺血缺氧,促进了细胞的凋亡及TNF-α释放,造成A2BAR表达量增多,紧密连接蛋白表达下降,这可能是导致肠道细菌移位的原因.
