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一种可用于500μm脑片的高分辨率细胞内标记技术
目的:建立简便高效的、与脑片盲法膜片钳记录相结合的生物胞素细胞内标记染色方法.方法:制备大鼠听皮层脑片(500 μm),采用盲法脑片膜片钳全细胞记录,泳入生物胞素(0.2%)对记录细胞进行标记,经组织化学显色和甘油封片后,沿显微镜Z轴,每隔30 μm拍摄一帧显微数码图像,利用Adobc Photoshop软件对神经元进行三维重建.结果:标记的神经元层次清楚,可在光镜下分辨出胞体、轴树突分支、棘突等细微结构,而且非特异性背景染色浅;不需要进行厚脑片的二次切片即可对神经元进行三维重建.结论:本方法简便易行,结果可靠,分辨率高,而且对设备要求不高.
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猫皮层体感Ⅱ区内脏伤害感受神经元的电生理特性及形态特征
应用胞内记录和标记技术, 观察了猫皮质第Ⅱ感觉区(the second somatosensory cortex, SⅡ)内脏大神经代表区的神经元对电刺激内脏大神经的诱发反应及形态特征. 结果表明, 在251个记录单位中, 有109个为内脏伤害性感受神经元, 其诱发反应分为兴奋性(占总数的38.53%)、抑制性(42.20%)及混合性(19.31%)三类. 在形式上IPSP及EPSP-IPSP序列反应较多. 对其中21个神经元用神经生物素进行细胞内电泳标记, 显示细胞的形态特点是胞体较小, 分布于皮质Ⅱ、Ⅲ及Ⅴ层, 其中兴奋性神经元形态多为复杂的锥体神经元, 抑制性神经元多为星型细胞. 实验证明, 体感SⅡ区存在内脏伤害性感受神经元.
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电生理学特性得到确定的大鼠脊髓背根神经节细胞内谷氨酸和P物质的共存
在离体灌流带脊髓和坐骨神经的标本上,对脊髓背根神经节(DRG)细胞的电生理学特性、对P物质(SP)受体激动剂的反应及谷氨酸(Glu)/SP共存的特点进行了研究.(1)对135个细胞进行了细胞内记录,并依纤维传导速度将其分为Aα/β(＞12 m/s)和C(＜1.3 m/s)两大类,它们的动作电位的快速后超极化(fAHP)有明显区别,C类的fAHP幅度小、时程长,Aα/β类的fAHP幅度大、时程短;(2)SP受体激动剂Sar-SP(10-6mol/L)诱导42%(5/12)的Aα/β细胞和80%(8/10)的C细胞发生去极化反应;(3)后向给予SP受体激动剂的22个细胞内电泳biocytin,固定、切片后进行磷酸激活的谷氨酰胺酶(PAG)和SP免疫荧光组织化学染色并同时显示biocytin,观察到biocytin标记并呈PAG样和SP样阳性的三标细胞在Aα/β类为25%(3/12),C类为80%(8/10),两者差异显著(P＜0.05).结果提示DRG中Aα/β细胞与C细胞的化学解剖和电生理特性不同,SP可能通过作用于节细胞上的自身受体易化冲动的发放.
