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分子模型法在脂多糖研究中的应用
脂多糖是医药领域的研究热点.运用分子模型的方法可以使人们从理论上预测脂多糖的空间构型,模拟它与其它分子的作用过程,从而对脂多糖高效吸附材料以及小分子中和剂等的设计具有一定的指导意义.目前分子模型法已逐渐成为脂多糖研究中的一种新的手段.
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大肠杆菌类脂A及抗类脂A抗体的制备及鉴定
目的比较不同剂量抗原、不同免疫途径类脂A抗体的产生.方法应用水解法制备出大肠杆菌的类脂A作为抗原,分别进行皮下免疫和静脉注射免疫.结果两种免疫方法所获得的抗血清效价相同,静脉免疫途径获得抗体历程时间短,抗原制备相对简单.结论就获得同等效价抗类脂A抗体的方法而言,静脉免疫途径较皮下免疫途径简易、快速.
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以类脂A为靶点应用生物传感器技术筛选抗内毒素中草药
目的 以细菌内毒素活性中心类脂A(Lipid A)为靶点,应用生物传感器技术,从42种中草药水煎液中筛选拮抗内毒素作用的中药.方法 将Lipid A包被于生物传感器的疏水性样品池,通过生物传感器测定中药与Lipid A的结合能力;对具有高亲和力的中药与内毒素作用,再次测定其与Lipid A的结合能力,并通过定量的内毒素中和实验进一步的对生物传感器的测定结果 进行验证.结果 在筛选的42种中草药中,观察到赤芍、大黄、青果、栀子等中药能与Lipid A高亲和力结合;通过与内毒素作用后的二次检测,发现赤芍、大黄、青果等中草药含有较高Lipid A结合的有效成分,定量内毒素中和实验的测定结果 与生物传感器的定性检测结果 一致.结论 以Lipid A为靶点,应用生物传感器技术,筛选拮抗内毒素中草药的方法 ,具有快速、高效、直观、准确的优点.
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类脂A和内毒素对人肾小球内皮细胞线粒体脱氢酶活性的影响
目的:为证明构成内毒素(LPS)的主要核心部分类脂A(Lipid A)在LPS直接损伤内皮细胞中所起的作用.方法:分离培养人肾小球内皮细胞(HGVEC),把细胞分为正常对照组、LPS时间梯度组、LPS浓度梯度组和Lipid A浓度梯度组.线粒体脱氢酶(Mitochondria dehydrogenase,MtDH)活性采用MTT法测定.结果:时间梯度组:1 μg/ml LPS使内皮细胞线粒体脱氢酶活性呈进行性下降,在12 h时比正常对照组下降显著(P<0.01).浓度梯度组LPS在0.9 μg/ml使线粒体脱氢酶活性显著下降,而Lipid A在0.6 μg/ml处即可出现显著下降.结论:LPS和Lipid A均可直接损伤HGVEC,使其线粒体脱氢酶活性下降,Lipid A的损伤作用强于LPS,证明Lipid A在LPS引起的内皮细胞直接损伤中起主要作用.
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鸡抗内毒素卵黄抗体IgY的制备
目的研究分别应用内毒素(LPS)、类脂A(LipidA)和大肠杆菌突变株J5免疫鸡后其蛋黄中抗内毒素抗体IgY的产量、纯度、效价并筛选佳免疫抗原.方法分别应用内毒素(LPS)、类脂A(LipidA)和大肠杆菌J5突变株作为抗原免疫25周龄Leghorn鸡,水溶法(WD)提取蛋黄中抗体IgY,双紫外光测定抗体含量,SDS-PSGE电泳检测抗体纯度,细菌酶联染色和ELISA检测抗体特异性、效价及筛选佳免疫抗原.结果 3种抗内毒素IgY含量和效价分别为14.4 mg/ml和1∶12 800(J5)、10.61 mg/ml和1∶12 800(LPS)、9.26 mg/ml和1∶3 200 (LipidA),抗体纯度均为95%左右.结论大肠杆菌突变株J5和内毒素(LPS)为佳免疫抗原,免疫鸡后其蛋黄中抗内毒素抗体IgY的产量和效价高.
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特异性抗内毒素鸡蛋黄抗体的制备
目的制备特异抗内毒素鸡蛋黄免疫球蛋白(Egg yolk immunoglobulin,IgY),探索防治内毒素血症的新途径.方法用大肠杆菌J5株、内毒素(Lipopolysaccharide, LPS)及类脂A(Lipid A)作抗原免疫25周龄Roman鸡,改良水溶法提取抗体,进行紫外分光光度计检测、SDS-PAGE及Western blot免疫印迹分析,通过酶联染色反应检测其免疫学活性.结果大肠杆菌J5株、LPS及Lipid A抗体含量分别为11.4、9.2、9.3 mg/mL蛋黄液,质量分数分别为92.3%、87.13%、90.4%,分子质量为 180 000 u,初步鉴定其对内毒素具有特异性结合作用.结论用大肠杆菌J5株、LPS及Lipid A免疫鸡制备的IgY效价高、特异性强、产量大,将是一种防治内毒素血症的新方法.
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新型细菌内毒素竞争性受体拮抗剂Lipid A结构类似物的研究现状
细菌内毒素(ET)是存在于革兰氏阴性菌细胞壁上的脂多糖(LPS),其通过诱导机体内的单核巨噬细胞释放多种介质分子而发挥其生物学效应.LPS的活性部分为类脂A(Lipid A).以内毒素的活性中心Lipid A的分子母核为模板,对其结构类似物进行分子合成,并获得具有能拮抗内毒素受体CD14的竞争性拮抗剂,是一项有着十分广阔应用前景的工作.
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多黏菌素B及其模拟肽与脂多糖类脂A结合的比较研究
目的观察多黏菌素B(PMB)及其模拟肽与脂多糖(LPS)、类脂A的结合能力.方法将100 μg/L的LPS、类脂A分别包被于生物传感器,再将0.01μg/L的PMB、PMB模拟肽1、PMB模拟肽2各5μl分别加入疏水样品池,比较PMB及其模拟肽与LPS、类脂A的结合能力.结果(1)PMB模拟肽1几乎没有与LPS、类脂A结合的活性,PMB及模拟肽2均与LPS、类脂A高亲和力结合.(2)PMB模拟肽2与LPS结合的峰值(98.41±7.31)rad/s高于PMB与LPS结合的峰值(83.58±5.42)rad/s(P＜0.05);PMB及其模拟肽2与类脂A结合的峰值基本一致.(3)PMB与LPS结合的峰值明显低于其与类脂A结合的峰值(P＜0.05),但PMB模拟肽2与LPS、类脂A结合的峰值比较,差异无显著性意义(P＞0.05).(4)PMB模拟肽2能在较短时间内与LPS、类脂A结合并达到高峰.结论与PMB比较,PMB模拟肽2与LPS、类脂A能更好更快地结合,且亲和力相近;模拟肽2与LPS中的类脂A结合没有空间位阻,可能会发挥较好的抗LPS作用.
