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黄连的组培再生及遗传转化研究
目的 建立黄连的组培再生及遗传转化体系.方法 以黄连子叶和下胚轴为外植体,用不同的基本培养基添加不同种类及浓度的植物生长调节剂进行组培再生研究；利用基因枪转化法研究黄连胚性愈伤组织和遗传转化.结果 子叶和下胚轴在MS培养基上愈伤诱导率分别可达86.31％和54.34％;与MS培养基相比6,7-V培养基可获得更高的愈伤诱导率和增殖率；诱导愈伤组织适宜的激素组合为0.5 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L KT;不同细胞分裂素培养的愈伤组织颜色和质地差异明显；0.5 mg/L KT+0.5 mg/L IAA与1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA组合可诱导出胚性愈伤组织,产生体细胞胚；无激素的6,7-V培养基可维持胚性愈伤组织的不断生长；含1 mg/L GA3+0.5 mg/L IBA的6,7-V培养基可使体细胞胚萌发成苗；转化后的胚性愈伤组织经3 mg/L除草剂Basta筛选,检测到β-葡萄糖苷酸酶(GUS)阳性,PCR检测再生植株膦丝菌素乙酰转移酶基因(bar)阳性.结论 建立并完善了黄连的组织培养再生体系,并在此基础上利用转基因技术获得了具有相关性状的植株,实现了黄连的遗传转化,为黄连性状的遗传改良奠定了基础.
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影响胡萝卜体细胞胚诱导与发育因素的研究
为了建立胡萝卜体细胞胚快速、大量诱导及发育的条件体系,以七寸人参胡萝卜为材料,采用组织培养方法,研究了不同外植体、激素、光照、愈伤组织传代时间及酵母对胡萝卜体细胞胚诱导和发育的影响.结果表明:激素2,4-D和KT有利于胡萝卜胚性愈伤组织的诱导,但却抑制了体细胞胚的发生和发育;酵母能显著地提高体细胞胚的诱导频率,促进体细胞胚的同步化发育,并减少畸形胚的产生;光照对体细胞胚的诱导频率无显著影响;子叶和下胚轴来源的愈伤组织对体细胞胚的诱导频率没有明显的差异,但在体细胞胚的数量和发育方式上略有差别.愈伤组织的继代时间显著地影响了体细胞胚的诱导.胡萝卜体细胞胚的发生发育受多因素的影响.
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人参体细胞胚胎发生及植株再生研究
通过比较不同外植体、植物生长调节物质种类及配比对人参体细胞胚发生的影响,建立了人参胚状体培养方法并获得再生植株;结果表明诱导愈伤组织的培养基MS+2,4-D 4.0 mg/L+BA 0.2 mg/L;在MS+2,4-D 1.0 mg/L+KT 0.2mg/L培养基上继代培养,转变为胚性愈伤组织;在去掉2,4-D的培养基上进行胚状体的诱导,转入无任何激素的MS培养基上使胚状体快速生长,之后在1/2MS培养基上进一步生长获得再生植株.
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杜仲不同发育时期未成熟种胚离体培养研究
目的 了解激素对杜仲不同发育程度完整未成熟种胚的影响.方法 以杜仲三个不同发育时期的完整未成熟种胚为实验材料(分别标记为Ⅰ#:心形胚早期,胚长约0.5 mm;Ⅱ#:鱼雷形胚,胚长约1～ 2mm;Ⅲ#:胚长约5mm,约为成熟胚的1/2),以MS为基本培养基,添加不同激素及组合(包括2,4-D、NAA、6-BA、TDZ、GA3)进行离体培养,观察不同激素对完整幼胚的影响.结果 实验结果显示,Ⅰ#材料接种后15天几乎全部死亡,显示简单的无机盐培养基不能满足发育早期种胚离体培养的营养需求;Ⅲ#材料接种后生长迅速,在附加细胞分裂素的培养基中多数萌发形成了幼苗;Ⅱ#材料在培养30天及60天进行结果统计显示:①2,4-D促进疏松愈伤组织形成,抑制不定芽形成;②细胞分裂素类,包括6-BA、TDZ,均能诱导形成不定芽,培养60天诱导率显著增加;在6-BA 2mg/L中不定芽发生率达91％;③在附加0.5mg/L 2,4-D的培养基中,在培养约90天后40个外植体中有3个形成体细胞胚.结论 Ⅱ#鱼雷形胚对激素的反应与杜仲成熟胚或幼苗离体培养结果相近,该发育状态的幼胚可能适合于诱导胚状体.
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华重楼体细胞胚诱导研究
目的:以华重楼植物芽轴为外植体,建立一套华重楼体细胞胚诱导方法.方法:先将华重楼根茎上未萌发的芽体进行消毒和预培养,然后将预培养后体积明显膨大的芽体切去芽鞘,再将芽轴从中央进行纵切后接入愈伤组织诱导培养基中进行培养,接着将由芽轴产生的已愈伤化的组织进行培养获得华重楼胚性组织,然后将胚性组织进行诱导培养产生白色圆球形的体细胞胚.结果:本实验设置的三个因素中对体细胞胚的诱导影响大的是6-BA,其次是NAA,影响小的是头孢曲松钠,华重楼体细胞胚诱导的佳培养基配方为LS+ 6-BA 3.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+头孢曲松钠400 mg/L,诱导率为40.16％.结论:体细胞胚具有植物胚的特性,在条件允许的情况下可快速生长为再生植株,可有效解决华重楼种苗短缺的问题,为华重楼植物的快速繁殖提供一条有用的新途径.
