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靶向CDC42基因小干扰RNA分子的制备
目的 制备靶向CDC42基因的小干扰RNA分子(siRNA)并检测其对CDC42基因表达的抑制效果.方法 针对CDC42基因的不同区域设计4条siRNA分子,体外转录法合成siRNA分子,将siRNA与CDC42基因真核表达载体共转染HEK 293T细胞,Western blot法测定CDC42蛋白含量.结果 合成了siR1、siR2、siR3、siR4共4条siRNA分子,siR3对CDC42基因表达的抑制率为95%,siR1、siR2以及siR4对CDC42基因表达的抑制作用不明显.siR3对HEK 293T细胞生长无明显影响.结论 体外转录法制备的siR3分子能够高效特异地抑制CDC42基因表达.
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血管内皮细胞特异性敲除cdc42基因的杂合子小鼠与非基因敲除小鼠在急性肺损伤肺组织病理改变以及肺微血管通透性变化的比较
目的 比较血管内皮细胞特异性敲除cdc42基因的杂合子小鼠与非基因敲除小鼠在急性肺损伤肺组织病理改变和肺微血管通透性变化的差异.方法 cdc42flox/flox小鼠与血管内皮细胞特异性表达cre重组酶的小鼠杂交,取其基因型为cde42flox/+Cre+/-的子代小鼠与cdc42flox/flox小鼠回交,得到基因型分别为Cdc420flox/+Cre+/-、Cdc42flox/+Cre-/-、Cdc42flox/floxCre-/-的小鼠,其中Cdc42flox/+Cre+/-为血管内皮细胞特异性敲除cdc42基因的杂合子小鼠,其余两种同一窝出生的非基因敲除小鼠作为对照组,在各组小鼠气道内滴入LPS,制成急性肺损伤模型,比较各组小鼠在肺组织病理改变、病理评分、肺湿干重比值、肺微血管通透系数等指标变化的差异.结果 血管内皮细胞特异性敲除cdc42基因的杂合子小鼠急性肺损伤模型在肺组织病理改变、病理评分、肺湿干重比值、肺微血管通透系数等方面与对照组小鼠比较无明显统计学差异.结论 血管内皮细胞特异性敲除cdc42基因杂合子小鼠与非基因敲除小鼠比较,在急性肺损伤中肺组织病理改变和肺微血管通透性的变化无明显差异.
关键词： 条件性基因敲除 Cre/loxp技术 CDC42基因 急性肺损伤 血管通透性 -
新疆哈萨克族食管癌中Cdc42基因启动子区甲基化与其mRNA表达改变的研究
目的 研究新疆哈萨克族食管癌中Cdc42基因启动子区甲基化状态与其mRNA表达改变的关系.方法 用RTPCR方法测定mRNA表达,甲基化特异PCR方法检测DNA启动子区甲基化状态.结果 在20例癌组织中,有16例表达阳性,占80%,20例癌旁组织中有13例表达,占65%,其中癌组织表达量明显高于癌旁组织的有10例,占50%,癌旁组织表达量高于癌组织的有5例,占25%.肿瘤组织和正常组织该基因启动子区见甲基化条带,未见非甲基化条带.结论 Cdc42基因在肿瘤组织和正常组织均表现为高甲基化状态,新疆哈萨克族食管癌中Cdc42基因mRNA表达增强可能与该基因的甲基化状态没有直接关系,另存在其他机制,有待进一步研究.
关键词： CDC42基因 DNA启动子区甲基化 MSP RT-PCR
