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用高效液相色谱(HPLC)法测定血清维生素C含量
目的: 建立更简便、快速、准确、灵敏的测定血清维生素C(VC)含量的方法,并对血清VC稳定性进行研究. 方法: 血清样品经10%偏磷酸溶液提取,旋涡混匀30 s,离心10 min(4 000 r/min, 4 ℃)后,用带二极管阵列检测(DAD)的高效液相色谱(HPLC)仪对VC进行定性定量分析.流动相为100 mmol/L KH2PO4,pH值为3.0,检测波长为243 nm,流速为11 ml/min. 结果: 在上述色谱条件下,血清中VC能得到良好分离,该法的日内变异系数和日间变异系数分别为0.42%和2.11%;回收率82%～88.5%;VC的低检测限为0.05 μg/ml.在对血清VC稳定性的研究中,发现血清VC在放置过程中很容易被氧化降解,其偏磷酸提取液相对稳定,但在5 d后含量也开始明显下降,到第44 d后血清和提取液中VC含量均几乎完全消失. 结论: 建立了高速、高效、高灵敏度的测定血清VC含量的HPLC法.血清VC应立即测定,或将样品用偏磷酸提取,保存在-70℃,5 d以内分析完毕.
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茶多酚和维生素C对人胚肾293细胞缺糖缺氧损伤保护作用的比较
目的 从细胞水平研究茶多酚(TP)对人胚肾293细胞缺糖缺氧性损伤的保护作用,并与抗氧化剂维生素C(VC)进行比较.方法 采用缺糖培养基并以连二亚硫酸钠消除培养基中的氧,诱导产生缺氧缺糖损伤模型,测定细胞的存活率、乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及总抗氧化能力,并计算IC50.结果 在细胞损伤模型中,TP和VC均表现出极强的抗氧化能力,TP能显著提高细胞的存活率、SOD活性和总抗氧化能力并抑制LDH的活性,TP的作用均大于VC.结论 TP和VC体外具有强大的自由基清除作用,且呈现明显的剂量依赖性,TP在细胞损伤模型中的抗自由基作用均大于VC.
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维生素C对香烟烟雾的氧化应激作用的影响
目的了解维生素C(VC)对香烟烟雾溶液(CSS)作用下的大鼠淋巴细胞产生氧化应激的影响.方法将香烟烟雾溶液作用于经VC预处理的大鼠淋巴细胞,用2',7'-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)检测细胞内活性氧自由基(ROS)水平,用彗星实验评价DNA的损伤状况,同时检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和脂质过氧化物(LPO)水平.结果8×10-3支/mlCSS作用下大鼠淋巴细胞内ROS和LPO水平增高,DNA损伤增强,SOD活性降低.用50 μmol/L VC干预后,与相应非干预组相比细胞内ROS和LPO水平降低,DNA损伤减轻,SOD活性增强,且均有显著性差异.结论50 μmol/LVC能保护大鼠淋巴细胞,减轻CSS导致的氧化应激.
关键词： 维生素C(VC) 香烟烟雾溶液(CSS) 氧化应激 -
氟化钠对体外培养大鼠肾细胞增殖的影响
目的研究不同浓度NaF对体外培养大鼠肾细胞增殖反应的影响以及VE、 Vc、 Se和GSH对其保护效应.方法大鼠肾细胞分离培养,分别施加不同浓度NaF、一定浓度V E、Vc、Se和GSH,采用ELISA方法测定OD值,计算肾细胞增殖率.结果 NaF对肾细胞增殖反应具有双向性作用,即低浓度刺激、高浓度抑制.结论一定浓度V E、Vc和GSH能拮抗1 mmol/LNaF对大鼠肾细胞增殖反应的抑制作用.
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维生素C对磁场损伤胚胎神经细胞保护作用
目的 探讨维生素C(VC)对稳恒磁场致大鼠胚胎中脑神经细胞损伤的保护作用.方法 以离体培养的大鼠胚胎中脑神经细胞为研究对象,分别加入浓度为5,10,25,50,100μmol/L的VC后,再置于强度为60 mT的稳恒磁场中作用72 h,以中脑神经细胞的存活率、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性为实验指标,反映VC预处理后对稳恒磁场作用致胚胎中脑神经细胞损伤的影响.结果 经VC作用过的胚胎中脑神经细胞存活率明显增加,MDA含量减小,SOD、GSH-Px活性增加,并且VC高剂量组效果更明显.结论 VC可以提高胚胎中脑神经细胞的抗氧化能力,保护神经中脑神经细胞,减轻稳恒磁场作用所致的胚胎中脑神经细胞的损伤.
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VC与VD3联合应用对结肠炎豚鼠肠粘膜保护作用
目的 探讨不同剂量维生素C(VC)联合维生素D3(VD3)对结肠炎豚鼠肠粘膜通透性的影响.方法 24只雄性Dunkin-Hartley豚鼠适应性喂养7d后,按体重随机分为4组,每组6只:对照组(100 mg/kg VC)、模型组(100 mg/kg VC)、低、高剂量VC组(10、200 mg/kg VC),采用改良豚鼠灌胃方法给予各组豚鼠剂量为200 IU/kg的VD3,同时按组别给予相应剂量VC,连续5周;模型组、低、高剂量VC组豚鼠自由饮用2％葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液4d,对照组豚鼠自由饮用蒸馏水.采用放射免疫法检测血清中25-(OH)D3和1,25-(OH)2D3水平,酶联免疫法检测血清中二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸和内毒素含量;取远端结肠组织,常规石蜡包埋,苏木素-伊红(HE)染色,显微镜下观察,进行组织病理学评分.结果 与对照组比较,模型组、低、高剂量VC组豚鼠结肠大体形态评分和组织病理学评分均明显升高(P＜ 0.05);与对照组比较,模型组、低、高剂量VC组豚鼠血清中DAO含量[分别为(252.02±1.74)、(253.06±2.54)(250.60±0.82)U/mL]均明显升高(P＜0.05),低、高剂量VC组豚鼠血清中内毒素水平[分别为(109.74±13.37)、(111.58±12.49)EU/mL]均明显降低(P＜0.05).结论 在一定剂量的维生素D3基础上,VC对结肠炎豚鼠肠粘膜屏障功能具有一定保护作用.
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海藻糖氧钒对小鼠胃肠道的氧化损伤以及Vc和GSH的抗氧化保护作用
目的 探讨海藻糖氧钒(VT)对小鼠胃肠道的氧化应激损伤、GSH/GSTs通路基因表达的影响以及维生素C(Vc)和还原型谷胱甘肽(GSH)的保护作用.方法 30只雄性昆明小鼠随机分组:VT组(B组)、Vc+VT组(C组)、GSH+VT组(D组)、Vc+GSH+VT组(E组),每天灌服VT(125 mg/kg),而正常对照组(A组)灌服等量生理盐水,Vc和GSH在VT给药前1 h灌服,连续15 d.取各组小鼠胃和十二指肠,DTNB法测定GSH含量,谷胱甘肽氧化法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,实时荧光定量PCR法检测GSH/GSTs通路相关基因GCLC、GSS、GSR和GSTpi的表达.结果 VT组胃、十二指肠的GSH含量、GSH-Px活性及GCLC、GSS、GSR和GSTpi的表达均低于A组(P<0.05).C、D、E组各指标显著提高,但仅E组小鼠胃组织的指标恢复到正常对照组水平.C组和D组除十二指肠中GSR表达显著差异外,其余指标差异均无统计学意义.结论 灌服VT对小鼠胃肠道产生一定的氧化应激损伤,并可影响GSH含量和GSH-Px活性以及GSH/GSTs通路相关基因的正常表达.外源补充Vc、GSH及两者联用有一定的抗氧化保护作用,降低了VT的毒性,且两者联用的效果更优,使胃中的相关指标达到正常水平.
