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过表达Bmi1基因对人胚胎干细胞体外造血分化产生集落的影响
目的 观察过表达Bmi1基因对人胚胎干细胞H1体外造血分化产生集落的影响.方法 人胚胎干细胞H1与小鼠骨髓间充质干细胞OP9共培养的方法体外模拟造血分化,在共培养第8天用磁珠分选筛选出CD34+造血前体细胞进行集落形成实验,诱导产生各系造血集落.用实时荧光定量PCR和Western印迹分别检测Bmi1基因和BMI1蛋白在人胚胎干细胞H1体外造血分化产生CD34+前体细胞过程中的表达变化.将过表达Bmi1基因的人胚胎干细胞H1用同样方法进行造血分化,比较其与正常的人胚胎干细胞H1体外造血分化产生集落的情况.结果 Bmi1基因在人胚胎干细胞H1体外造血分化产生CD34+前体细胞过程中的表达先升高后下降,过表达Bmi1基因的H1细胞相比正常H1细胞,集落形成实验产生红系集落和混合系集落的数目明显增加.结论 过表达Bmi1基因促进人胚胎干细胞H1体外造血分化过程中红系和混合系集落的产生.
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人诱导多能干细胞体外扩增生成红系集落并构建红系祖细胞株的研究
目的 将人诱导多能干细胞(hiPSCs)分化成为红系祖细胞并构建稳定的红系祖细胞株.方法 采用与滋养层细胞共培养的方式,添加10 ng/mL的TPO、5 U/mL的EPO、25 ng/mL的SCF、5 ng/mL的Flt-3、20 ng/mL的IL-3的诱导因子,诱导hiPSCs分化成为红系集落,构建稳定的红系祖细胞株;倒置显微镜观察获得的细胞株形态,瑞氏染色并计数,MTT法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞表面标志物.结果 hiPSCs诱导构建的红系祖细胞株遗传性状稳定并可长期传代,细胞呈集落样生长,外观上与正常红系祖细胞无差异.分类计数构建的红系祖细胞株比例(％):P0与P5代细胞为84.90±4.93 vs 72.20±6.24(P ＜0.05);流式检测,hiPSCs诱导构建的红系祖细胞株细胞表面标志物CD235a阳性率(％)表达:P0与P5代细胞为3.02±0.75 vs 5.87±0.37(P＜0.05).结论 诱导hiPSCs生成的红系祖细胞株在表面标志继承性和遗传性状方面都是稳定的.
