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磁性脂质体传shRNA特异性抑制非小细胞肺癌生长的体内外观察
目的 评价磁性脂质体作为基因载体在外加磁场的介导下发夹RNA (shRNA)对体内外人非小细胞肺癌生长的抑制作用和评价外加磁场对于体外磁转染效率的影响.方法 构建表达绿色荧光蛋白(GFP)和肺癌胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)基因的shRNA的质粒pGFPshIGF-1R,由磁性氧化铁纳米颗粒CombiMAG和脂质体lipofectamine2000组成磁性脂质体,将pGFPshIGF-1R转染进肺癌A549细胞,此过程被称为磁转染,通过外加不同强度和不同作用时间的磁场,评价磁场对磁转染效率的影响；将质粒pGFPshIGF-1R分别通过磁转染,脂质体转染传递到A549细胞中,通过Western印迹评价两种转染方法下A549细胞IGF-1R蛋白过表达下调情况；在荷瘤鼠肺癌模型中静脉注射质粒pGFPshIGF-1R与磁性脂质体或单纯脂质体的复合物,比较两者体内抑瘤效果.结果 外加磁场的作用时间和磁场强度可影响磁转染效率.体外脂质体转染和磁转染的shRNA都明显的抑制了A549细胞IGF-1R的蛋白过表达,干扰率分别达56.1％±6.0％和85.1±3.0％(P＜0.01).体内脂质体转染和磁转染的shRNA都明显的抑制了荷瘤鼠皮下移植瘤的生长,对照组、体内脂质体转染组和磁转染组裸鼠移植瘤瘤重分别为(0.46±0.12)、(0.27 ±0.05)、(0.16±0.04)g,脂质体转染组和磁转染组的抑瘤率分别为41.3％ (P ＜0.01)和65.2％ (P ＜0.01).结论 以磁性脂质体作为基因载体的磁转染可能会成为靶向肺癌治疗的重要的转染方法,其转染效率受到外部磁场的影响.
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螯合α-甲基色氨酸的超顺磁性氧化铁纳米粒子用于颞叶癫(癎)MRI的佳扫描时间探讨
目的 探讨螯合α-甲基色氨酸的超顺磁性氧化铁纳米粒子探针(α-MTrp-SPIONs)MRI特异定位颞叶癫(癎)致(癎)灶的佳扫描时间.方法 将α-MTrp-SPIONs分别于颞叶癫(癎)急性期(癫(癎)大发作后72 h)、慢性期(癫(癎)大发作后8周)经尾静脉注入模型大鼠体内,于注射前及注射后1、2、4、8、24h同步行T2序列同参数MRI,测量T2值.数据间的比较行单因素重复测量方差分析.结果 急、慢性期癫(癎)大鼠在注射α-MTrp-SPIONs后各时间点的MRI示病灶局部组织T2信号发生负增强,急性期注射前,注射后1、2、4、8、24 h T2值分别为112.08±5.85、107.83±6.59、105.08±6.79、95.58±5.14、100.92±5.81、105.17±6.31,慢性期各时间点T2值分别为112.08±7.53、107.75±7.10、102.75±5.50、96.17±5.01、97.75±4.37、102.92±4.74,给药前后差异均有统计学意义(均P＜0.01);注射后4hT2值下降明显.结论 α-MTrp-SPIONs MRI能在分子水平上精确定位致(癎)灶,MRI佳扫描时间是注射后4h.
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5-羧基荧光素标记葡聚糖Fe3 O4超顺磁性纳米颗粒的制备及性能检测
目的 构建5-FAM标记的葡聚糖(dextran)Fe3O4超顺磁性纳米颗粒,检测其物理和磁学性质、细胞毒性,并观察其在磁场下标记细胞的能力.方法 在超声波乳化作用下,用化学共沉淀法制备5-FAM-dextran-Fe3 O4纳米颗粒;用透射电镜和粒度分析仪观察微粒形态和大小;红外分析仪检测微粒表面结合的功能团;分光仪观察微粒的光学显像能力;振动样品磁强计检测微粒的磁响应性;MTT法检测5-FAM-dextran-Fe3 O4、dextran-Fe3 O4和Fe3 O4微粒对神经元细胞的生物毒性;共聚焦显微镜观察将荧光纳米颗粒与细胞共同孵育并给予不同外加磁场后,纳米颗粒标记神经元细胞的面积.采用单因素方差分析处理数据.结果 制得的5-FAM-dextran-Fe3 O4纳米颗粒均匀一致,直径为15~25 nm,平均粒径22 nm;其比饱和磁化强度、比剩余磁化强度、矫顽力(矫顽磁场强度)分别为86.02 A·m2·kg-1、15.05 A·m2·kg-1、5414.01 A/m,表现为超顺磁性;红外分析仪示Fe3 O4被dex-tran包裹并与5-FAM形成复合粒子;分光仪示纳米颗粒在紫外光下呈均一绿色荧光;MTT结果提示5-FAM-dextran-Fe3O4无明显细胞毒性;共聚焦显微镜下,500 mT磁场组细胞标记面积大[(0.880±0.046)mm2;F=320.298,P<0.05].结论 制备的5-FAM-dextran-Fe3 O4纳米颗粒可作为新型荧光-磁载体或探针应用于多种实验和临床研究.
