首页 > 文献资料
-
自分泌干扰素α在全反式维甲酸诱导RIG-G基因表达中的作用
目的 深入研究维甲酸诱导基因G(RIG-G)表达中干扰素α(IFN-α)和全反式维甲酸(ATRA)两条信号途径间的相互关系.方法 运用急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞和信号转导子与转录激活子(STAT)1缺失的人纤维肉瘤细胞系U3A细胞,检测ATRA作用于NB4细胞后,细胞内STAT2的磷酸化水平,并测定NB4细胞培养液上清及转染了干扰素调节因子1(IRF-1)的U3A细胞培养液上清中的IFN-α水平,以及培养液上清对STAT2的磷酸化和RIG-G基因表达的诱导作用.结果 ATRA处理72 h后,NB4细胞内的STAT2磷酸化水平和细胞培养液上清中的IFN-α浓度均明显升高[ IFN-α:( 7.6±0.3)pg/ml比(1.5±0.5)pg/ml,P＜0.05].该培养液上清能够诱导STAT2发生磷酸化,并上调RIG-G的蛋白水平.U3A细胞转染IRF-1后,培养液上清中的IFN-α浓度也明显提高[(8.8±1.4) pg/ml比(3.4±0.4)pg/ml,P＜0.05].结论 RIG-G基因的表达与ATRA和IFN-α这两条信号途径的协同作用密切相关,ATRA可以通过上调IRF-1的蛋白水平促进细胞分泌IFN-α,所分泌的IFN-α能诱导STAT2发生磷酸化,并进一步增强细胞内RIG-G基因的表达.
-
维甲酸诱导基因G慢病毒表达载体的构建及对肺癌细胞A549的影响
背景与目的：维甲酸诱导基因G(retinoic acid-induced gene G，RIG-G)是从急性早幼粒细胞性白血病细胞系NB4细胞中克隆出的肿瘤抑制基因。我们通过调控基因(Tet-on)系统构建受强力霉素(doxycycline，DOX)诱导RIG-G基因表达的A549细胞系，并观察其对A549细胞增殖的作用。方法：采用实时定量PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)技术扩增RIG-G基因片段，利用LR重组系统构建pLenti6/TO/V5-GIM-RIG-G慢病毒载体，对该慢病毒载体和Tet-on慢病毒载体包装和病毒滴度测定后，感染A549细胞；采用有限稀释法筛选稳定株；使用细胞免疫荧光和蛋白[质]印迹法(Western blot)鉴定RIG-G基因受DOX调控表达的效果；CCK-8试验检测细胞增殖能力。结果：成功构建pLenti6/TO/V5-GIM-RIG-G慢病毒载体，包装后测得其活性滴度为1.0×108TU/mL；慢病毒经Tet-on包装后物理滴度为4×109 VP/mL；RIG-G蛋白成功地在慢病毒感染后的A549稳定株中合成和表达，并且受DOX的诱导调控。RIG-G蛋白表达成功后，A549细胞的增殖与对照组相比显著降低(1.168±0.107vs 2.099±0.162，P<0.05)。结论：本研究成功建立了RIG-G基因可调控表达的A549稳定株；RIG-G蛋白对A549的增殖有抑制作用。
-
干扰素刺激反应元件Ⅰ/Ⅱ在维甲酸诱导基因G表达调控中的作用
目的 深入研究维甲酸诱导基因G(retinoic acid-induced gene G,RIG-G)启动子上所含的干扰素刺激反应元件(interferon-stimulated response elements,ISRE)对RIG-G基因表达的调控作用.方法 根据RIG-G基因启动子所包含的ISRE序列,利用定点突变技术分别构建野生型和位点突变型的报告基因质粒,然后采用报告基因转染实验检测RIG-G基因启动子中ISRE序列的功能活性.结果 研究发现单独突变RIG-G基因启动子上的ISRE Ⅱ元件不影响报告基因的表达,而单独突变ISRE Ⅰ则会对报告基因的表达产生明显的抑制作用;同时突变ISRE Ⅰ和ISRE Ⅱ元件则会使报告基因完全失去对转录因子的反应性.结论 RIG-G基因启动子所包含的ISRE Ⅰ和ISRE Ⅱ元件是诱导该基因表达的转录因子复合物的作用位点,是该基因表达的分子基础,且ISRE Ⅰ元件的作用要优先于ISRE Ⅱ.
