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抗血小板膜糖蛋白Ⅰbα/Ⅲa双特异单链抗体的构建及其功能研究
目的构建、表达抗血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰbα/GPⅢa双特异单链抗体,为其进一步研究、应用奠定基础.方法应用PCR技术,扩增出接头片段和SZ-21单链抗体基因,克隆入pUCm-T载体,测序分析.应用基因重组技术将接头片段、SZ-21单链抗体基因和SZ-2单链抗体基因重组拼接,构建SZ-2/SZ-21双特异单链抗体表达载体pET22-21-L-2scFv,并测序验证.导入大肠杆菌BL21(DE3)Plys,诱导表达.流式细胞术、ELISA、Western blot检测SZ-2/SZ-21双特异单链抗体与血小板结合能力,瑞斯托霉素、凝血酶和ADP诱导血小板聚集试验对表达产物功能进行研究.结果表达载体pET22-21-L-2scFv构建拼接正确;表达产物以包涵体形式为主,表达量占菌体总蛋白的14%;经变性、纯化、复性,表达产物具有与血小板以及血小板GPⅠbα和Ⅲa结合活性,可抑制瑞斯托霉素、凝血酶和ADP诱导的血小板聚集并呈剂量依赖性.结论成功表达了SZ-2/SZ-21双特异单链抗体,该抗体具有与相应2个靶抗原结合活性,并可抑制瑞斯托霉素、凝血酶和ADP诱导的血小板聚集.
关键词： 抗体 双特异性 血小板糖蛋白GPIIb-IIIa复合物 -
vWF及GPIIb/IIIa受体在经皮冠状动脉腔内成形术后再狭窄中的作用
血管性血友病因子(von Willebrand factor, vWF)是由内皮细胞合成分泌的一种多聚糖蛋白.血小板膜糖蛋白(glucoprotein IIb/IIIa, GPIIb/IIIa)受体是血小板表面的一种糖蛋白.二者在介导血小板粘附、聚集及血栓形成等过程中起着重要作用.近年来对vWF和GPIIb/IIIa受体的结构功能进行了深入研究,表明vWF和GPIIb/IIIa受体的升高在经皮冠状动脉腔内成形术(percutaneous transluminal coronary angioplasty, PTCA)后再狭窄的发生方面具有重要的作用.现收集了近几年来的有关资料,对vWF及GPIIb/IIIa受体在PTCA术后再狭窄中的作用综述如下.
