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用原位杂交方法检测虹膜睫状体EP1和FP受体mRNA的表达
目的检测人眼虹膜-睫状体组织内EP1和FP受体mRNA的表达情况.方法以地高辛标记EP1和FP受体探针,用原位杂交方法检测人眼石蜡切片虹膜-睫状体相应受体mRNA的信号表达.结果虹膜的血管、肌肉和内皮层见大量EP1和FP受体mRNA表达.EP1受体mRNA信号见于睫状体所有的肌肉纤维;FP受体杂交信号主要见于睫状体环形肌肉和结缔组织,纵行肌和放射状肌肉的信号未能检测到.结论人眼组织EP1和FP受体mRNA广泛表达于相应有关受体激动剂作用的功能部位.EP1和FP受体mRNA选择性的表达于睫状体环形肌和结缔组织,提示二种受体在增加巩膜脉络膜房水引流过程中起着重要作用.
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PGE2通过上调CXCR4表达促进SKOV3细胞侵袭的机制研究
目的:探讨前列腺素E2(PGE2)上调人卵巢癌SKOV3细胞CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)的表达从而促进细胞侵袭能力的机制.方法:用PGE2、EP1受体激动剂或抑制剂、CXCR4抑制剂、蛋白激酶C(PKC)抑制剂和钙离子螯合剂处理SKOV3细胞,通过real-time PCR、Western blot、Transwell实验检测CXCR4 mRNA水平、蛋白水平以及细胞的侵袭能力.结果:5 μmol/L PGE2处理SKOV3细胞后,CXCR4 mRNA及蛋白水平与对照组相比分别上升了60.33％、122.88％(P均＜0.01),细胞的侵袭能力较对照组增强了112.24％(P＜0.01);而经10 μmol/L CXCR4抑制剂AMD3465处理后,细胞的侵袭水平较PGE2处理组下降了54.00％(P＜ 0.05);5μmol/L EP1受体激动剂17-PT-PGE2处理SKOV3细胞后,CXCR4 mRNA及蛋白水平与对照组相比分别上升了47.90％(P＜ 0.01)、85.56％(P＜ 0.05),细胞的侵袭能力较对照组增强了108.79％(P＜ 0.01);而10 μmol/L EP1受体抑制剂sc-51322处理后,CXCR4蛋白表达水平较PGE2处理组下降了54.86％(P＜ 0.05),细胞的侵袭水平较PGE2处理组下降了65.37％(P＜ 0.05);5μmol/L PKC抑制剂BIS-1、10 μmol/L钙离子螯合剂BAPTA-AM处理后,CXCR4蛋白表达水平较17-PT-PGE2处理组分别下降了57.38％、56.14％ (P均＜0.05),细胞的侵袭水平较17-PT-PGE2处理组下降了52.63％、55.26％(P＜均0.05).结论:PGE2可通过激活EP1受体经Gαq/Ca2+/PKC信号转导通路上调卵巢癌SKOV3细胞CXCR4的表达,从而增强肿瘤细胞的侵袭能力.
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EP1受体介导PGE2对胆管细胞癌HuCCT1细胞MMP2表达和活性的影响
目的:探讨前列腺素E2(PGE2)对人胆管细胞癌HuCCT1细胞基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达与酶活性的影响及与EP1受体的关系.方法:分别用PGE2、EP1受体激动剂或抑制剂、蛋白激酶C(PKC)抑制剂和钙离子螯合剂处理HuCCT1细胞,通过RT-PCR、明胶酶谱法检测MMP2的mRNA水平以及MMP2酶活性.结果:5 μmol/L PGE2和5 μmol/L EPl受体激动剂17-PT-PGE2处理组MMP2 mRNA的表达水平与对照组相比分别上升了89.14％(P＜0.01)和163.89％(P＜0.01)；MMP2酶活性与对照组相比分别增强了69.11％(P＜0.05)和117.65％(P＜0.01)；10 μmol/L EPI受体抑制剂sc-51322处理后,MMP2 mRNA水平以及MMP2酶活性较PGE2处理组分别下降了47.74％(P＜0.05)、84.58％(P＜0.01)；5 μmol/L PGE2或5 μmol=/L 17-PT-PGE2处理稳定转染EP1R-pcDNA3的人胚肾细胞株HEK293细胞,MMP2的酶活性较对照组分别增强了36.07％(P＜0.05)、61.59％(P＜0.05).5 μmol=/L PKC抑制剂BIS-1、10 μmol/L钙离子螯合剂BAPTA-AM处理后,MMP2 mRNA水平较17-PT-PGE2处理组分别下降了44.17％(P＜0.05)、34.42％(P＜0.05)；MMP2酶活性较17-PT-PGE2处理组分别下降了70.95％(P＜0.05)、71.82％(P＜0.05).结论:PGE2可以通过EP1受体上调胆管细胞癌HuCCT细胞MMP2 mRNA的表达以及MMP2的酶活性,此调节作用可能与Ca2+/PKC信号转导通路有关.
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EP1受体介导PGE2对子宫内膜癌Ishikawa细胞CXCR4表达的影响
目的：探讨前列腺素E2（ProstaglandinE2,PGE2）上调人子宫内膜癌Ishikawa细胞CXCR4（chemokine receptor 4）的表达机制。方法用PGE2、EP1受体激动剂或抑制剂、蛋白激酶C（PKC）抑制剂和钙离子螯合剂处理Ishikawa细胞，通过Real-time PCR、Western Blot实验检测CXCR4 mRNA水平以及蛋白水平。结果5μmol/L PGE2处理Ishikawa细胞后，CXCR4 mRNA水平及蛋白水平与对照组相比分别上升了75.7%（<0.05），70.93%（<0.01）；5μmol/L EP1受体激动剂17-PT-PGE2处理Ishikawa细胞后，CXCR4蛋白水平与对照组相比上升了84.82%%（<0.01）；而10μmol/L EP1受体抑制剂sc-51322处理后，CXCR4蛋白表达水平较PGE2处理组下降了54.62%（<0.05）；5？mol/L PKC抑制剂BIS-1、10μmol/L钙离子螯合剂BAPTA-AM处理后，CXCR4蛋白表达水平较17-PT-PGE2处理组分别下降了50.17%，56.33%(均<0.05)。结论 PGE2可通过激活EP1受体经Ca2+/PKC信号转导通路上调人子宫内膜癌Ishikawa细胞CXCR4的表达。
