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出血性大肠杆菌O157:H7 vero细胞毒素抗体的保护性研究
目的:在体外研究vero细胞毒素抗体的保护作用.方法:用从出血性大肠杆菌O157:H7中纯化的一种新的vero细胞毒素来免疫家兔,获得多克隆抗体.用不同剂量抗体,在不同时间段与此vero细胞毒素进行vero细胞毒性试验.结果:高剂量的抗体预先处理过的vero细胞,可以受到抗体保护,毒素的细胞毒作用被抑制.预先用毒素作用vero细胞后,一小时内给予大剂量抗体可以部分抑制毒素的细胞毒作用.结论:本试验提示用抗毒素紧急预防和治疗Vero细胞毒素引起的疾病是可行的.
关键词： 出血性大肠杆菌O157:H7 Vero细胞毒素 抗体保护作用 -
出血性大肠杆菌O157:H7 DNA文库的构建
目的为建立出血性大肠杆菌O157:H7DNA文库,筛选致病岛LEE.方法提取EHEC O157:H7EDL933染色体,Xmal部分酶切并与pJB8X连接、包装,感染E.coli DH5α,鉴定库容.结果库容约700克隆子,大于608个理论值,构建成功.结论成功构建了出血性大肠杆菌O157:H7 DNA文库,为目的片段筛选打下良好基础.
关键词： 致病岛 DNA文库 出血性大肠杆菌O157:H7 -
EHEC O157:H7基因文库中含eae基因的LEE克隆子的筛选
PCR扩增EHEC O157:H7 ese基因的特异片段并制成杂交探针,采用斑点杂交和酶切方法从自构建的基因文库中筛选不含Sma Ⅰ的LEE片段.结果筛选到长约23kb的LEE片段.表明筛选片段长度与预测不符,可能存在变异,需进一步证实.
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抗出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体的制备及鉴定
目的制备抗出血性大肠杆菌O157:H7 (E.coli O157:H7)特异性单克隆抗体(MAbs).方法福尔马林灭活的E.coli O157:H7免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合技术建立分泌抗E.coli O157:H7 MAbs的杂交瘤细胞株,对配对较好的6株 MAbs用ELISA法测定其免疫球蛋白类及亚类,用ELISA法、凝集法和Western blot鉴定 MAbs的特异性.结果 6株 MAbs免疫球蛋白均为小鼠IgM.这些 MAbs均能与27个E.coli O157:H7菌株发生凝集反应,与部分弗劳地杆菌发生凝集反应,与11株鼠伤寒沙门氏菌、7株伤寒杆菌、2株痢疾杆菌、致病性大肠杆菌、产毒性大肠杆菌、侵袭性大肠杆菌、出血性大肠杆菌O26:H11和O111、肠集聚性大肠杆菌、42株非定血清型大肠杆菌、霍乱弧菌O1群和O139群不发生凝集反应;ELISA结果显示6株 MAbs与粪链球菌、变形杆菌、粘质沙雷氏菌、肺炎克雷伯杆菌均无交叉反应;ELISA和Western blot结果显示,3株 MAbs针对E.coli O157:H77酚相脂多糖.结论 6株 MAbs具有较高的特异性,有可能用于制备检测E.coli O157:H7的病原检测试剂.
关键词： 出血性大肠杆菌O157:H7 单克隆抗体 脂多糖 胶体金 免疫层析 -
出血性大肠杆菌O157:H7四株菌株的vero细胞毒性比较
目的:研究出血性大肠杆菌四株菌株的vero细胞毒性,从而筛选出vero细胞毒性强的菌株,为进一步研究vero细胞毒素(VT)提供基础.方法:用超声法破碎菌体,用倒置显微镜观察法检测vero细胞毒性,并用毒素中和试验检测毒素提取液中的vero细胞毒素.结果:国际菌株933和中国流行菌株882364的毒素提取液的vero细胞毒性强,其毒素提取液的vero细胞毒性可以被VT1抗体和VT2抗体部分中和.结论:在出血性大肠杆菌中国流行菌株中,882364菌株vero细胞毒性强,并含有多种vero细胞毒素.
关键词： 出血性大肠杆菌O157:H7 Vero细胞毒素 -
O139群霍乱弧菌及出血性大肠杆菌O157:H7细菌性腹泻新病原
感染性腹泻(infectious diarrhea)为一组广泛存在并流行于世界各地的胃肠道传染病,也是当今全球性重要的公共卫生问题之一,其发病率仅次于上呼吸道感染.在我国感染性腹泻的发病率居所有传染病之首位[1].
关键词： 病原学 诊断 治疗 O139群霍乱弧菌 出血性大肠杆菌O157:H7 -
出血性大肠杆菌O157∶H7的脉冲场凝胶电泳分型方法研究
目的 应用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)对肠出血性大肠杆菌O157:H7进行基因分型,了解不同来源分离株的相关性.方法 选择在广西食品污染物检测地区食品样本中分离到的7株出血性大肠杆菌O157:H7,采用琼脂糖包埋胶块法制备基因组DNA,以Xba Ⅰ限制性内切酶进行酶切,选定脉冲电泳参数进行脉冲场凝胶电泳,照相记录结果;Nei的公式计算相似性和遗传距离,并用PHYLIP程序非加权成对算术平均法聚类分析.结果 PFGE可生成14～18条清晰条带的分离株DNA指纹图谱,由聚类分析树状图可将7株分离株分为6个基因群.结论 广西不同地区食品分离O157:H7血清型菌株存在多个分子亚型,提示不是一个克隆株,研究发现脉冲场凝胶电泳分型技术重复性高,在分子流行病学研究中有较大的应用前景.
关键词： 出血性大肠杆菌O157:H7 脉冲场凝胶电泳 聚类分析
