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S180-S2D9传代细胞的DNA指纹图谱、细胞核型、生物学特性及DNA含量的比较研究
目的:通过比较S180-S2D9传代细胞的DNA指纹图谱、细胞核型、生物学特性及DNA含量,对其进行质量控制.方法:提取S180-S2D9传代细胞的DNA后,进行RAPD分析;细胞培养加秋水仙碱,涂片、染色后,显微镜下计数染色体数目;原代、50代、100代细胞分别接种KM小鼠腹腔,观察腹水的生长情况及小鼠的存活天数;培养的细胞用70%乙醇固定,流式细胞仪测DNA含量.结果:与原代、50代细胞相比,100代细胞的DNA指纹图谱发生变异;50代、100代、100代克隆株1、100代克隆株2、100代克隆株3,其染色体均数做方差分析表明,两两单位比较均无显著统计学差异(P＞0.05).原代、50代、100代细胞分别接种于10只昆明小鼠腹腔,3组的存活天数分别为13～23d、13～20d、10～14d,与原代、50代相比,100代均数有显著统计学差异(P＜0.05),原代与50代均数比较无显著统计学差异(P＞0.05).流式细胞术DNA含量分析表明,5株细胞的相对分子质量分别为0.3575、0.3984、0.3542、0.3919、0.3890.结论:在细胞核型与DNA含量的比较上,5株细胞无显著统计学差异;在DNA指纹图谱与对小鼠致死性方面提示传代细胞发生了变异.
关键词： S180-S2D9细胞 DNA指纹图谱 核型 致死性 DNA含量 -
5个S180克隆细胞株RAPD特征及S180-S2D9传代细胞生物学特性研究
目的研究5个S180克隆细胞株随机扩增多态性DNA(RAPD)特征以及S180-S2D9传代细胞的生物学特性. 方法运用23条引物对S180-S2D9、 S180-S2D7、S180-S1F11 、S180-S1H10 、S180-S1B11的基因组DNA进行RAPD-PCR扩增,以琼脂糖电泳观察结果;对S180-S2D9原代、25代、50代、75代细胞基因组DNA,进行RAPD分析;计数染色体数目;原代、50代细胞分别接种入KM小鼠腹腔,观察腹水的生长情况及小鼠的存活天数;流式细胞仪测DNA含量. 结果筛选出3条在各克隆株扩增产物间有差异的引物,通过这3条引物分析S180-S2D9的RAPD特征,原代、25代、50代、75代细胞之间的RAPD条带无差异;原代、25代、50代、75代细胞的染色体数差异无统计学意义.原代、50代细胞分别接种于10只昆明小鼠腹腔,两组的存活天数分别为13～23 d、13～20 d,原代与50代组存活天数的差异无统计学意义.流式细胞仪测DNA相对含量分别为0.3890、0.3542、0.3575、0.3984.以上结果提示,S180-S2D9传到75代时未发现遗传变异. 结论可以运用RAPD-PCR技术对克隆细胞株进行质量控制.S180-S2D9克隆株性质均一,致瘤特性稳定.
关键词： S180克隆细胞株 引物筛选 S180-S2D9细胞 RAPD特征
