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Rothmund-Thomson综合征责任基因RECQL4与肿瘤关系的研究进展
Rothmund-Thomson综合征(RTS)是一种少见的常染色体隐性遗传病,有早衰及骨肉瘤、皮肤癌易发倾向等特点,RECQL4基因突变是部分病因.RECQL4蛋白功能复杂多样,其与DNA复制、DNA损伤修复、染色体端粒维持以及基因组稳定性相关.RTS患者RECQL4突变导致其解螺旋酶活性缺失,并出现基因组不稳定,可能是其癌症易发的原因.在其他类型肿瘤如乳腺癌、前列腺癌中,RECQL4则表现为癌基因的特性,其可促进肿瘤的生长、存活、侵袭及转移,RECQL4高表达提示预后不佳.此外,RECQL4还与胃癌化疗耐药相关.RECQL4与肿瘤关系密切,在此作一综述.
关键词: RECQL4 肿瘤 Rothmund-Thomson综合征 -
靶向 RECQL4基因的 shRNA 慢病毒表达载体的构建及鉴定
目的:构建介导 RECQL4 RNA 干扰的 shRNA 慢病毒表达载体。方法将人工合成的 RECQL4 siR-NA 经 PCR 扩增后与线化的 pLKO.1慢病毒表达载体连接,经测序鉴定后,将 pLKO.1-RECQL4-shRNA 与慢病毒包装质粒共转染入 HEK -293T 细胞,产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度。体外感染人结肠癌细胞 RKO 后,实时定量 PCR 和 Western blot 检测 RECQL4 mRNA 和蛋白的沉默效果。设置未加入任何慢病毒表达载体的 RKO 细胞为未感染组,感染 pLKO.1-scramble -shRNA 慢病毒载体为阴性对照组。结果基因测序结果证实成功构建 pL-KO.1-RECQL4-shRNA 慢病毒表达载体。测定包装后的慢病毒颗粒滴度为6.70×107 IU/mL。感染 RKO 细胞后,RECQL4的 mRNA 和蛋白表达量均低于阴性组和未感染组。结论成功构建靶向 RECQL4基因的 shRNA 慢病毒表达载体,可有效抑制人结肠癌 RKO 细胞 RECQL4 mRNA 和蛋白的表达。