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Bcl-2抑制剂ABT-263对鼻咽癌细胞5-8F增殖和凋亡的影响
目的 研究B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)抑制剂ABT-263对鼻咽癌细胞5-8F增殖和凋亡的影响.方法 采用细胞计数试剂盒8检测不同浓度下Bcl-2抑制剂ABT-263对鼻咽癌细胞5-8F增殖的影响;AnnexinV-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测不同浓度ABT-263对鼻咽癌细胞5-8F凋亡的影响;应用免疫印迹法检测抑制剂ABT-263对Bcl-2、Bcl-xL、髓细胞白血病1(Mcl-1)及佛波醇-12-肉豆蔻酸-13-乙酸酯诱导的蛋白质1(又称Noxa)等蛋白表达水平的影响.结果 Bcl-2抑制剂ABT-263处理细胞后,0.125、0.25、0.5、1、2、4、8μmol/L组吸光值低于0 μmol/L组(0.696±0.020,0.527±0.015,0.465±0.022,0.323±0.010,0.133±0.004,0.057±0.002,0.028±0.002比0.856±0.017)(P＜0.05).在0.5 μmol/L浓度下诱导约6％鼻咽癌细胞的凋亡,其诱导凋亡的机制可能主要是通过正调控促凋亡蛋白Noxa完成的,在1μmol/L ABT-263的作用下能够引起鼻咽癌细胞中Noxa近7倍左右的升高.结论 ABT-263可以通过上调促凋亡蛋白Noxa促进鼻咽癌细胞的凋亡,具有应用于鼻咽癌治疗的潜力.
关键词： 鼻咽癌 细胞凋亡 ABT-263 B细胞淋巴瘤/白血病2 -
ABT-263对顺铂耐药食管癌细胞的抑制作用
目的 研究ABT-263对顺铂耐药食管癌细胞EC109/CDDP的作用.方法 采用MTT法检测ABT-263对耐药细胞EC 109/CDDDP及其亲代细胞EC109的细胞毒作用;通过克隆存活实验检测ABT-263对食管癌细胞再生能力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡的情况,并通过Western blot检测细胞PARP蛋白的变化.结果 MTT实验结果显示ABT-263对EC109及EC 109/CDDP的细胞活力均有显著抑制作用;克隆存活实验结果显示ABT-263可以抑制食管癌细胞的再生能力(P＜ 0.01);流式凋亡结果分析显示ABT-263诱导食管癌细胞发生细胞凋亡(P＜0.01);Western blot结果显示ABT-263显著上调细胞PARP蛋白的剪切(P＜0.05或P＜0.01).结论 ABT-263抑制食管癌EC 109/CDDP细胞及其亲代细胞EC 109的细胞活力和增殖能力,诱导细胞发生凋亡.
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抗癌药ABT-263
ABT-263是由雅培制药(Abbott Laboratories)开发的一种可诱导细胞凋亡的小分子Bcl-2抑制剂.药理学研究显示,本品对小细胞肺癌(SCLC)和急性成淋巴细胞性白血病(ALL)小鼠的总有效率(overall response rate,ORR)为100%;在接种了Bcl-2依赖的SCLC细胞系NCL-H146的小鼠中,本品(剂量等于或高于100 mg*kg-1*d-1)的疗效明显高于紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、环磷酰胺和依托泊苷等药.目前,一系列旨在评价本品治疗复发或难治性淋巴系统恶性肿瘤、复发或难治性慢性淋巴细胞性白血病(CML)、SCLC或其它非血液系统恶性肿瘤的安全性、药动学及疗效的I/IIa期临床试验正在进行中.
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ABT-263诱导A431细胞凋亡及其对AKT下游信号通路影响
目的 观察抗凋亡蛋白抑制剂ABT-263对人皮肤鳞状细胞癌细胞系A431细胞功能的影响,并探讨相关分子机制.方法 ①取对数生长期的人永生化表皮细胞(HaCaT细胞)与A431细胞提取总蛋白,采用蛋白印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)和BCL-XL的蛋白表达水平.②分别以浓度为50 μmol/L的ABT-263(抑制剂组)和二甲基亚砜(对照组)处理A431细胞,培养4和9h后,采用透射扫描电子显微镜(TEM)检测各组细胞的形态变化.③以剂量为0、10、25、40和50 μmol/L的ABT-263处理A431细胞24 h后,采用CCK-8法检测细胞活力.④以不同剂量的ABT-263处理A431细胞,采用蛋白印迹法检测活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)、活化聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1(PARP-1)、磷酸化蛋白激酶B(pAKT)ser473、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(pGSK3β)和磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)的蛋白相对表达水平.结果 A431细胞中的BCL-2和BCL-XL蛋白相对表达水平均高于HaCaT细胞(P＜0.01).TEM检查结果显示,抑制剂组A431细胞从正常的形态逐渐变化为凋亡的形态,表现为微绒毛消失,核染色质密度增高并凝聚在核膜周边,核仁裂解.10、25、40和50 μmol/L剂量组A431细胞的细胞活力均低于对照组(P＜0.05).10、30和50 μmol/L剂量组A431细胞的活化Caspase-3和活化PARP-1蛋白的相对表达水平均高于对照组(P＜0.05).10、25、40、50 μmol/L剂量组A431细胞的pAKT(ser473)和pGSK3β的蛋白相对表达水平均低于对照组(P＜0.05),γH2AX蛋白相对表达水平高于对照组(P＜0.05).A431细胞活力和pGSK3β蛋白相对表达水平均随抑制剂剂量的增加而减少(P＜0.01),活化Caspase-3和γH2AX的蛋白相对表达水平均随抑制剂剂量的增加而增加(P＜0.01),均呈剂量-效应关系.结论 ABT-263可诱导A431细胞发生线粒体途径的凋亡,并可诱导AKT/GSK3β信号通路失活,从而促进A431细胞凋亡,呈一定程度的剂量-效应关系.
