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瘦素的研究现状及展望
1994年Zhang等首次克隆出肥胖基因(ob),由ob编码一个45kb的mRNA表达产物肥胖蛋白.因为它能使肥胖小鼠变瘦,故又名瘦素蛋白或瘦素(LEP),人体血液中成熟的LEP含有146个氨基酸,分子量为16kD,人和鼠有84%的同源性.LEP主要由白色脂肪细胞合成并分泌,具有强亲水性,在血中以单体形式存在,主要经肾排出.LEP同其他激素一样,需要与特异的受体结合,才能发挥其生物学作用.人类LEP受体存在4种异型体(OB-Ra-Rd)其中只有OB-Rb具有信号转导作用,目前认为JAK-STAT途径是LEP受体信号转导的主要途径,其次是Ras-Kaf-MEK-MAPK途径[2].
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人类肥胖基因瘦素蛋白的原核表达
目的:原核表达人类肥胖基因瘦素蛋白.方法:以携人类肥胖基因的pUC119-ob为模板,PCR扩增瘦素蛋白基因片段,并克隆到pET-32a构建重组表达质粒pET-32a-ob,经酶切和测序鉴定后,转化至大肠埃希菌DH5α中表达,SDS-PAGE电泳鉴定表达产物.结果:测序和限制性分析均证明了pET-32a-ob的序列正确,转化的DH5α可高效表达一个30 kD融合蛋白,与预期结果一致.结论:经pET-32a-ob转化的DH5α可有效表达重组人类瘦素蛋白,为进一步研究瘦素蛋白的生物活性提供了基础.
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人肥胖基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
目的克隆中国人的肥胖基因,并在大肠杆菌中高效表达人瘦素蛋白.方法用RT-PCR从培养的中国人脂肪细胞提取的总RNA中扩增出肥胖基因,与TA载体连接后进行核酸序列测定,并将该基因定向克隆至高效表达质粒pBV220,在大肠杆菌中表达.结果克隆出中国人肥胖基因,其cDNA序列与文献报道的一致,构建了重组质粒pBV220-OB,并成功地实现了人肥胖基因在大肠杆菌中的表达.结论人肥胖基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达,为进一步研究该基因在肥胖症及其相关疾病中的作用,以及在脂肪代谢与脂肪细胞分化中的调控机制奠定基础.
