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使用沃特世超高效合相色谱分析短杆菌肽
短杆菌肽是由芽孢杆菌产生的一种常见和已被良好表征的跨膜肽物质,被用作对抗革兰氏阳性和某些革兰氏阴性细菌的局部用抗生素.用反相液相色谱(RPLC)分析疏水性肽和蛋白质难度很大.因为溶液中经常需要使用洗涤剂保持疏水性物质的稳定性,而这些洗涤剂容易发生聚集或沉淀,严重影响它们的回收,这些因素及其他原因使得难以用RPLC分离疏水性肽和蛋白质.在ACQUITY UPC2 TM系统上使用沃特世(Waters(R))超高效合相色谱技术分离典型跨膜肽-短杆菌肽的方法,可得到线性和可重复的结果,测定的OTC制剂浓度为标示量的98.4％,是准确、高精度分析短杆菌肽的方法.
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跨血脑屏障复合功能纳米载体系统的构建
目的 建立跨血脑屏障复合功能纳米载体系统.方法 以O-羧甲基壳聚糖(O-CMC)为原料,制备出具有超顺磁特性的纳米载体粒子,并将跨膜肽(Tat)、人转铁蛋白(Tf)和抗癌药物甲氨喋呤(MTX)与其结合,构建成兼具跨血脑屏障、磁性和受体介导双靶向及抗癌复合功能的纳米载体系统(MTX-O-MNPs-Tat-Tf).应用透射电镜、原子力显微镜、震动样磁力计表征该纳米载体系统的形貌、粒径、磁性能并选择大鼠C6细胞考察MTX-O-MNPs-Tat-Tf载体粒子的抗肿瘤特性.结果 纳米磁性粒子MTX-O-MNPs-Tat-Tf平均粒径为75 nm,具有良好的抗肿瘤特性.初步动物实验表明,采用放射性元素锝标记,经单光子发射型计算机断层显像仪检测,复合功能载体系统成功跨越大鼠血脑屏障.结论 MTX-O-MNPs-Tat-Tf载体系统的建立为今后跨过血脑屏障治疗脑部疾病等提供了良好的应用前景.
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盐酸利多卡因跨膜肽纳米高分子脂质体的制备与体外透皮实验研究
目的 采用赖氨酸壳聚糖十八烷基季铵盐(OQLCS)组装跨膜肽(TAT)包载盐酸利多卡因制备纳米高分子脂质体,并研究其体外透皮渗透情况.方法 采用反相蒸发法制备盐酸利多卡因跨膜肽纳米高分子脂质体(LID-TAT-PLs),使用离体小鼠皮和Franz扩散池进行体外透皮实验,HPLC法测定接收液中盐酸利多卡因的浓度,评价LID-TAT-PLs、未组装跨膜肽的盐酸利多卡因纳米高分子脂质体(LID-PLs)和盐酸利多卡因注射液(LID-IJ)的体外透皮渗透情况.结果 LID-TAT-PLs的体外透皮速度和累积透过量均明显高于LID-PLs和LID-IJ.LID-TAT-PLs组的24 h累积透过量达(88.15±11.11)％,明显高于LID-PLs的(73.91±12.13)％和LID-IJ的(26.31±5.43)％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TAT可以明显促进药物的透皮渗透,LID-TAT-PLs制备简单,具有良好的透皮释放行为.
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LHRH介导的TAT蛋白核心肽PTD的制备及转膜研究
制备重组蛋白pET28a-LHRH-PTD-GFP, 利用绿色荧光蛋白GFP, 研究LHRH的介导和PTD蛋白的转膜作用.以重组质粒pET28a-PTD-GFP为模板, 设计含有LHRH基因序列的PCR引物, 经过PCR扩增后双酶切, 克隆到原核表达载体p ET28 (a) 中, 构建重组表达质粒pET28a-LHRH-PTD-GFP, 并在大肠杆菌中诱导表达, 纯化目的蛋白.通过GFP的荧光特性, 检测LHRH介导的PTD蛋白的转膜作用.成功构建LHRH-PTD-GFP原核表达载体, 融合蛋白相对分子质量约为30 k, 纯化得到蛋白浓度为1.62 mg/m L的LHRH-PTD-GFP重组蛋白.荧光显微镜检测结果显示, He La细胞内显现明显的绿色荧光, 证明LHRH介导的PTD蛋白具有很好的跨膜特性.该研究结果为下一步构建以LHRH为靶向, 以PTD为转膜作用的肿瘤治疗药物提供了理论基础和技术支撑.
