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抗人卵巢癌COC183B2/抗CD3单链双特异抗体的构建和表达
目的:构建和表达一种可与卵巢癌细胞和淋巴细胞结合的双特异抗体.方法:利用PCR分别扩增抗人CD3单链抗体(single chain variable fragment, ScFv)重链可变区(variable region of the heavy chain, VH)和轻链可变区(variable region of the light chain, VL),重组抗人CD3 ScFv,经测序后将其克隆入有链间连接肽基因序列的载体pALM中,再将抗人卵巢癌COC183B2 ScFv克隆至紧邻链间连接肽前形成COC183B2/抗CD3单链双特异抗体(single-chain bispecific antibody, scBsAb)的重组.后将COC183B2/抗CD3 scBsAb克隆入表达载体pTMFC中进行表达,同时分别表达抗人卵巢癌单抗COC183B2和抗人CD3单抗的ScFv作为对照组.用ELISA、流式细胞学方法和玫瑰花环实验对scBsAb进行免疫学活性测定.结果:成功构建抗人卵巢癌COC183B2/抗CD3 scBsAb;其表达的蛋白链相对分子质量约60;ELISA结果显示scBsAb可与抗原OC183B2结合,流式细胞学结果显示scBsAb可与抗原CD3结合,花环实验显示scBsAb在体外可引导效应细胞聚集在靶细胞周围.结论:构建和表达抗人卵巢癌COC183B2/抗CD3 scBsAb成功,且具有与抗原OC183B2、CD3结合的免疫学活性.
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慢性乙型肝炎患者外周血中HBV特异性CD3+ T细胞的研究
目的研究慢性乙型肝炎患者外周血中可作用于病毒感染靶细胞的特异性CD3+ T细胞比率.方法筛选HLA-A2患者:将MHC:Ig双体融合蛋白试剂,加入HBV核心蛋白(C)、聚合酶蛋白(P)及表面抗原蛋白(S)中HLA-A2限制性合成肽,与患者CD3+ 细胞作用,采用双重荧光抗体染色,用FACS检测各患者的特异性T细胞比率,同时设立各种对照管.结果 23/54例(42.6 %)患者为HLA-A2.其中15例经用HBV C、P、S肽染色后,5例患者的特异性CD3+阳性细胞比率高于对照管,4例患者有结合S肽的特异性CD3+ 细胞,其中1例同时可结合P肽,1例仅与P肽结合.结论慢性乙型肝炎患者外周血中与特异性肽结合的CD3+ T细胞比率较少.MHC:Ig双体融合蛋白技术使用方便,但非特异性染色率偏高.本技术可用于随访治疗中的慢性乙型肝炎患者免疫状态的变化.
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脐血CD3AK和LAK细胞免疫学特征的比较研究
γIL-2激活的脐血杀伤细胞(LAK)体内外抗肿瘤已有报道,而Anti-CD3McAb作为免疫增强剂,在骨髓、外周血的过继免疫中已取得明显疗效,脐血单个核细胞(MNC)能否被Anti CD3McAb激活为抗肿瘤的杀伤细胞(CD3AK)?是否比其LAK有更多的活性?为探讨这些问题,本实验采用γIL-2+Anti-CD3McAb和单纯γLI-2刺激脐血MNC,观察其表面抗原及细胞因子的变化,并探讨两者对K562和HL-60白血病细胞株的杀伤作用.
