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柴胡总皂苷粗提取物对大鼠肝毒性损伤作用研究
目的 观察长期、大量给予柴胡总皂苷粗提取物致大鼠肝毒性损伤的作用和程度.方法 按45天毒性实验方法,除观察一般状况、肝毒性相关指标外,检测血和肝组织内脂质代谢情况、糖代谢、胆红素(TBIL)水平和肝组织病理检查.结果 柴胡总皂苷粗提取物可导致血中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性增高,肝脏重量和肝体比值增大,血和肝内甘油三酯(TG)含量增加,对血中胆固醇(CHO)和肝内糖原(Gn)影响不明显,仅高剂量组对TBIL有影响;上述变化随剂量的增加而逐渐加重,病理组织学检查可见肝细胞损伤,与蒸馏水对照组相比有明显差异.结论 长期给柴胡总皂苷粗提取物可致大鼠明显的肝毒性损伤,既可致肝功能指标的改变,又可致肝细胞器质性病变.
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香加皮不同组分多次给药对小鼠肝毒性损伤作用研究
目的 比较香加皮水提组分和醇提组分多次给药对小鼠肝毒性损伤的作用程度.方法 给小鼠灌胃香加皮水提和醇提组分,每天1次,连续灌胃7天,按等生药量算,香加皮水提组分高、中、低剂量组分别为15.0,3.12,0.78 g ·kg-1,醇提组分高、中、低剂量组分别为6.0,3.12,0.78 g·kg-1;观察小鼠一般状况,7天后检测肝毒性相关指标,检测血浆清蛋白(ALB)、血清碱性磷酸酶(ALP)、胆红素(TBIL)水平和肝组织病理检查.结果 香加皮不同组分可导致血和肝内丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性增高,肝脏重量和肝体比值增大,血清碱性磷酸酶(ALP)、胆红素(TBIL)水平增加,血浆清蛋白(ALB)降低；肝组织病理可见肝细胞可见水肿、脂肪变性、灶性坏死、片状坏死；上述变化随剂量的增加而逐渐加重,呈现一定的剂量依赖性.肝毒性作用程度醇提组分＞水提组分.结论 较高剂量多次给予香加皮水提组分或醇提组分均可致小鼠明显的肝毒性损伤,即可致肝功能指标的改变,又可致肝细胞器质性病变.
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GLT25D2基因在对乙酰氨基酚诱导肝毒性损伤中对自噬的调控作用
目的 探讨GLT25D2基因在对乙酰氨基酚(APAP)诱导的肝毒性损伤中是否对自噬有调控作用.方法 选择GLT25D2+/+野生型C57BL/6J小鼠和GLT25D2-/-基因敲除C57BL/6J小鼠为研究对象.① 体内实验:将20只野生型小鼠和20只GLT25D2-/-小鼠分别按随机数字表法分为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组和APAP干预组,每组10只.腹腔注射25 g/L的APAP溶液500 mg/kg建立小鼠肝毒性损伤模型;PBS对照组腹腔注射等量PBS.制模成功后立即处死小鼠取肝组织,采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肝组织自噬相关蛋白ATG5、ATG7、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、P62的表达;电镜下观察肝组织超微结构改变,评估自噬水平.② 体外实验:另取野生型小鼠和GLT25D2-/-小鼠各1只,采用两步胶原灌注法提取原代肝细胞并分为两部分:一部分以5 mmol/L APAP溶液干预0、8、12 h后收集细胞,采用Western Blot试验检测肝细胞自噬相关蛋白ATG5、ATG7、LC3、P62的表达;另一部分用绿色荧光蛋白-LC3质粒(GFP-LC3)转染24 h,分别给予PBS(PBS对照组)和5 mmol/L APAP(APAP干预组)温育12 h,荧光显微镜下观察GFP-LC3阳性表达以反映自噬体的形成情况.结果 ① 体内实验结果显示:与相应PBS对照组相比,经APAP干预后,野生型及GLT25D2-/-小鼠肝组织中自噬正性相关蛋白ATG5、ATG7、LC3-Ⅱ表达下调,而负性相关蛋白P62表达上调,说明APAP处理后自噬整体水平降低.与野生型小鼠相比,GLT25D2-/-小鼠肝组织自噬正性相关蛋白ATG7、ATG5表达上调(ATG5/β-actin:1.21±0.29比0.84±0.19,ATG7/β-actin:1.29±0.14比1.54±0.40,均P>0.05),LC3-Ⅱ表达略下调(LC3-Ⅱ/β-actin:0.52±0.06比0.58±0.06,P>0.05),而负性相关蛋白P62表达下调(P62/β-actin:1.13±0.94比1.54±0.40,P>0.05),说明基因敲除后小鼠自噬表达水平高于野生型小鼠.电镜下观察超微结构显示,与相应PBS对照组相比,经APAP干预后,野生型小鼠肝组织自噬体数量无明显变化,但GLT25D2-/-小鼠自噬体数量增多.② 体外实验结果显示:随APAP干预时间延长,野生型及GLT25D2-/-小鼠原代肝细胞自噬正性相关蛋白ATG5、ATG7表达逐渐上调,LC3略有波动,而负性相关蛋白P62表达逐渐下调,12 h分别达峰值或谷值,说明APAP刺激细胞自噬表达增强,并呈一定时间依赖性;与野生型小鼠相比,GLT25D2-/-小鼠12 h原代肝细胞自噬正性相关蛋白ATG5、ATG7、LC3-Ⅱ及负性相关蛋白P62表达上调(ATG5/β-actin:0.93±0.09比0.74±0.06,ATG7/β-actin:0.80±0.09比0.65±0.10,LC3-Ⅱ/β-actin:1.35±0.30比1.15±0.20,P62/β-actin:0.36±0.02比0.31±0.03,均P>0.05),说明基因敲除后自噬水平增强.荧光显微镜下观察显示,经APAP干预后,野生型及GLT25D2-/-小鼠原代肝细胞GFP-LC3阳性细胞均较PBS对照组明显增加;GLT25D2-/-小鼠GFP-LC3阳性细胞比例明显高于野生型小鼠(0.64±0.08比0.36±0.05,P<0.05).结论 GLT25D2是自噬负性调控因子,敲除GLT25D2基因能够增强APAP诱导肝毒性损伤小鼠的自噬水平.
