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烯二炔类抗肿瘤抗生素力达霉素的作用机制研究进展
力达霉素(lidamycin,LDM)是一种用精原细胞法筛选得到的链霉菌Streptomyces globisporus C-1027代谢产物中分离获得的九元环烯二炔类抗肿瘤抗生素.LDM对体外试验培养癌细胞有极强的细胞毒作用,体内试验中对移植瘤疗效显著.现主要从断裂DNA、诱导细胞凋亡和裂亡、致细胞产生衰老样表型、抑制血管生成和改变肿瘤侵袭调节基因表达等方面阐述LDM强烈抗肿瘤作用的分子机制.
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细胞裂亡及其分子机制研究
细胞死亡可以根据它们的性质、起原和生物学意义区分为两种完全不同的类型,即程序性细胞死亡(PCD)或称细胞凋亡(apoptosis)和坏死(necrosis).
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一种细胞新型死亡方式--细胞裂亡
细胞死亡方式有细胞凋亡、细胞裂亡与坏死三种.细胞裂亡是指细胞经过一次有丝分裂后才开始死亡的现象,裂亡现象初是在研究X射线杀伤肿瘤细胞机理时发现的.本文综述了细胞裂亡现象的发现过程及细胞凋亡与细胞裂亡的区别.
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hIAP-2 siRNA表达质粒的构建及其对乳腺癌细胞MCF-7的作用
目的:构建人凋亡抑制蛋白2(hIAP-2)基因的小分子干扰RNA(siRNA)的表达质粒,并检测其对乳腺癌细胞MCF-7的作用.方法:利用含U6启动子的mU6pro载体构建hIAP-2 siRNA表达质粒,RT-PCR和Western印迹法检验其对MCF-7细胞的RNA干扰(RNAi)效果.用MTT法分析其对细胞增殖,流式细胞仪检测其对细胞周期,以及Hoechst染色法观察其对细胞形态的影响.同时,用胱天蛋白酶-3(caspase-3) Ac-DEVD-pNA底物法检测caspase-3活性的变化,Western印迹法检测一些相关蛋白质的表达变化.结果:hIAP-2 siRNA表达质粒高效而特异地剔降MCF-7细胞中hIAP-2的表达,抑制肿瘤细胞增殖(P<0.01),阻断MCF-7细胞在G1期.随着hIAP-2基因被沉默,MCF-7细胞变得多核化和巨核化,caspase-3酶原表达升高并被激活(P<0.01).此外,IκBα和p21waf1蛋白表达升高,NF-κB(p65)则降低,Cyt C维持不变.结论:RNA干扰hIAP-2对MCF-7细胞增殖和细胞周期调控有重要影响,细胞裂亡可能是导致其细胞死亡的主要原因,DNA受损后其细胞周期阻滞在G1期可能与上调p21waf1有关.
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力达霉素对人宫颈癌Caski细胞增殖的影响及其机制
目的 探讨力达霉素对人宫颈癌Caski细胞增殖的影响及其可能的机制.方法 将对数生长期的人宫颈癌Caski细胞随机分为低、中、高浓度组及对照组,低、中、高浓度组均加入含力达霉素的RPMI 1640完全培养基100μL,分别调整其终浓度为1、2.5、5 ng/mL,对照组仅加入等体积RPMI 1640完全培养基.作用24h,采用MTT法检测细胞增殖能力(以吸光度值表示),计算细胞生存率;采用流式细胞术检测细胞周期及线粒体膜电位降低比例;透射电子显微镜下观察细胞形态学改变,计算细胞凋亡率及裂亡率.结果 低、中、高浓度组细胞增殖能力及细胞生存率均低于对照组,且高浓度组降低更明显(P均＜0.01).对照组及中浓度组S期细胞比例均高于低、高浓度组(P均＜0.05).低、中、高浓度组G0/G1期细胞比例均低于对照组,G2/M期细胞比例均高于对照组,且中、高浓度组变化更明显(P均＜0.05).低、中、高浓度组及对照组细胞线粒体膜电位降低比例分别为(34.77±5.33)％、(37.87±5.73)％、(18.37±3.91)％、(4.17±0.65)％;低、中、高浓度组细胞线粒体膜电位降低比例均高于对照组,且低、中浓度组均高于高浓度组(P均＜0.05).透射电镜下可见对照组细胞形态正常,低、中、高浓度组存在多种形态的死亡细胞,包括凋亡、坏死、裂亡的细胞.对照组及高、低、中浓度组细胞凋亡率及裂亡率均依次升高,两组间比较P均＜0.05.结论 力达霉素可抑制人宫颈癌Caski细胞增殖,并呈浓度依赖性,其机制可能与诱导细胞凋亡或裂亡有关.
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三氮唑席夫碱衍生物对肝癌细胞裂亡的影响
目的:研究3-吡啶-3-基-4-[(4-甲氧基-苯亚甲基)氨基]-5-甲硫基-1,2,4-三唑(LH-38)对肝癌细胞BEL-7402裂亡的作用.方法:BEL-7402细胞常规培养于RPMI-1640培养液中,细胞生长至对数生长期加LH-38(终浓度分别为1×10-4mol/L和1×10-5mol/L),连续培养48 h或72 h.四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖, 荧光染料Hoechst33258和PI联染检测细胞死亡,免疫细胞化学法检测激活型Caspase-3表达.结果:LH-38抑制BEL-7402细胞增殖并呈浓度依赖关系,IC50为3.0×10-4mol/L; 1×10-5mol/L浓度的LH-38处理细胞72 h,镜下可见多倍体细胞明显增多,可见微核或多核细胞染色体自发性的凝集,有丝分裂异常,存活或死亡的多核或单核巨细胞同时存在,存活细胞的激活型Caspase-3表达阴性;1×10-4mol/L浓度LH-38处理细胞48 h,可明显诱导细胞凋亡.结论:不同浓度LH-38可以引起人肝癌细胞BEL-7402细胞裂亡或细胞凋亡,即两种不同形式的细胞死亡.
关键词： 三氮唑席夫碱类似物 Bel-7402细胞 细胞裂亡 细胞凋亡 -
细胞裂亡及其信号转导通路的研究
细胞死亡有坏死、凋亡、裂亡等多种方式.细胞裂亡是指细胞经过一次有丝分裂后才开始死亡的现象.本文综述了细胞裂亡现象的发现、基本特征、信号转导通路及其在抗肿瘤抗生素研究中的应用.
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存活素siRNA表达质粒mU6/survivin的抑癌机制研究
目的:在本课题组报导存活素siRNA表达质粒(mU6/survivin质粒)能高效剔降乳腺癌细胞MCF-7中存活素表达的基础上,进一步探讨其抑癌机制.方法:采用MTT法、流式细胞术、Hoechst细胞形态染色和Western blotting等检测mU6/survivin质粒对乳腺癌MCF-7细胞多项生物学指标的影响.结果:mU6/survivin质粒作用后,MCF-7细胞的增殖明显地受到抑制;细胞周期被阻滞在G1期,细胞呈现多核化、巨核化;caspase-3被激活,表达升高;IκBα、Cyt C和 P21WAF1蛋白表达升高,NF-κB(p65)蛋白表达无明显改变.结论:mU6/survivin质粒沉默MCF-7细胞中存活素表达后,DNA受损细胞停滞在G1期,细胞增殖受到抑制,此过程与Caspase级联放大、线粒体凋亡通路以及细胞周期调控等有关.细胞逃逸有丝分裂关卡的检查,阻断有丝分裂导致的细胞裂亡是其死亡的主要方式.
