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MicroRNA335对鼻咽癌细胞侵袭的调控作用
目的 探讨MicroRNA335对鼻咽癌细胞侵袭的调控作用.方法 用5-杂氮-2-脱氧胞苷处理鼻咽癌细胞,观察MicroRNA-335基因甲基化和表达情况及细胞侵袭能力的变化.结果 5-杂氮-2-脱氧胞苷能使鼻咽癌细胞中甲基化的MicroRNA-335基因去甲基化而重新表达,细胞的侵袭能力明显减弱.5-杂氮-2脱氧胞苷处理前的CNE 2细胞侵袭数(14.32±2.36)明显多于5-杂氮-2脱氧胞苷处理后的CNE 2细胞侵袭数(7.80±1.24)(t=6.373,P<0.01).结论 MicroRNA-335表达与其基因甲基化有关,MicroRNA-335可抑制鼻咽癌细胞侵袭.
关键词： 鼻咽癌 甲基化 MicroRNA-335 侵袭 -
miR-335启动子活性鉴定及药物干预
目的:探讨miR-335上游片段是否具有转录活性以及罗格列酮和胰岛素对miR-335启动子区域转录活性的影响.方法:利用PCR技术克隆位于MEST内含子中miR-335上游区域的不同片段,采用双荧光素酶报告基因系统鉴定其转录活性.使用1 μmol/L的罗格列酮及不同浓度的胰岛素进行干预并观察转录活性有无变化.结果:不同的miR-335启动子区域转录活性不同,在miR-335上游约600个碱基区域活性高.未使用药物干预组细胞中,miR-335启动子区域活性的表达与基础值相比差异无统计学意义(P＞0.05);使用1 μmol/L罗格列酮干预后,miR-335启动子区域活性显著升高(P＜0.01),使用10～12 mol/L的胰岛素干预时,启动子活性升高,但当胰岛素浓度上升后,启动子活性变化并没有统计学差异.结论:miR-335上游约600个碱基为启动子关键区域,同时,miR-335有可能通过自身的转录调控机制参与肥胖与胰岛素抵抗的发生发展.
关键词： MicroRNA-335 启动子 罗格列酮 胰岛素 -
microRNA-335对人非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭及增殖能力的影响
目的:研究microRNA-335(miR-335)在非小细胞肺癌中的表达及其对细胞迁移、侵袭能力与增殖能力的影响.方法:采用荧光实时定量PCR检测miR-335在12对非小细胞肺癌与癌旁正常组织中的表达差异,以及miR-335在非小细胞肺癌SPCA-1细胞与肺正常上皮细胞16HBE中的表达差异；应用Lipofectamine 2000瞬时转染anti-miR-335下调SPCA-1细胞中miR-335的表达,并通过荧光实时定量PCR验证；划痕实验检测miR-335对SPCA-1细胞迁移能力的影响；Transwell侵袭实验检测miR-335对SPCA-1细胞侵袭能力的影响;MTT实验及克隆形成实验检测miR-335对SPCA-1细胞增殖能力的影响.结果:与癌旁正常组织比较,miR-335在非小细胞肺癌组织中显著高表达(P＜0.05)；与16HBE细胞比较,miR-335在SPCA-1细胞中显著高表达(P＜0.05)；利用Lipofectamine 2000瞬时转染anti-miR-335入SPCA-1细胞24 h时miR-335表达明显减弱(P＜0.01);抑制miR-335表达对SPCA-1细胞迁移和侵袭能力有显著的抑制作用,抑制率分别为(42.8±2.7)％(P＜0.0l)及(73.25±4.4)％(P＜0.01)；抑制miR-335表达对SPCA-1细胞的增殖能力无明显影响.结论:miR-335在非小细胞肺癌中呈高表达,miR-335低表达能显著抑制SPCA-1细胞的迁移和侵袭能力,但对SPCA-1细胞的增殖能力无明显影响.
关键词： MicroRNA-335 非小细胞肺癌 迁移 侵袭 增殖 -
急性缺血性脑卒中患者外周血白细胞miR-335基因启动子甲基化状态及意义
目的 探讨急性缺血性脑卒中(AIS)患者外周血白细胞microRNA-335(miR-335)基因启动子区甲基化状态及在发病中的意义.方法 应用生物信息学分析并使用亚硫酸氢钠测序(BSP)法检测30例AIS患者及30例健康对照者外周血白细胞miR-335基因(MIR335)启动子区甲基化状态,比较并分析与卒中严重程度(NIHSS评分)和血浆miR-335水平的关系.结果 生物信息学分析显示MIR335启动子区与CpG岛区域重叠;AIS患者外周血白细胞中MIR335启动子区呈高甲基化水平,明显高于健康对照组(P＜0.01);AIS患者MIR335甲基化水平与miR-335表达水平呈负相关(r=-0.72,P＜0.01),与病情严重程度呈正相关(r=0.74,P＜0.01).结论 AIS患者外周血白细胞MIR335启动子区呈明显高甲基化状态,可能参与了脑卒中缺血后调控.
关键词： 缺血性脑卒中 DNA甲基化 MicroRNA-335
