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齐墩果酸对IL-1β诱导的SW982细胞炎症反应的抑制作用
在SW982细胞中,研究齐墩果酸对白细胞介素(interleukin,IL)-1ββ刺激的炎症因子表达的作用,并探讨其抗炎作用机制.采用MTT的方法检测齐墩果酸对SW982细胞的毒性作用;酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和实时荧光定量PCR (real-time PCR)实验在蛋白及mRNA水平上检测不同浓度的齐墩果酸(5、10、20 μmol·L-1)对IL-1β刺激炎症因子IL-6、IL-8和基质金属蛋白酶-1(matrix metallopeptidase-1,MMP-1)表达水平的影响;免疫印迹实验分析齐墩果酸对丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase,MAPK)、磷脂酰肌醇(-3)激酶/Akt (phosphatidylinositol-3-kinase/Akt,PI3K/Akt)和核转录因子-κB (nuclear transcription factor-κB,NF-κB)信号通路相关蛋白表达水平的影响.结果显示,不同浓度的齐墩果酸(≤40 μmol·L-1)对SW982细胞几乎无毒性;对IL-6、IL-8和MMP-1等炎症因子的表达有明显的抑制作用;能明显地抑制细胞外信号调节激酶(extracellular signal-related kinase,ERK)、p38、c-jun N末端激酶(c-jun N-terminal kinase,JNK)和Akt蛋白的磷酸化,并且抑制IκB-α蛋白的降解.齐墩果酸可能是通过MAPK、PI3K/Akt和NF-κB信号通路而抑制IL-1β刺激的炎症因子的表达.
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TNF-α处理人滑膜肉瘤细胞株SW982细胞中典型炎症小体的表达及意义
目的 探讨TNF-α处理人滑膜肉瘤细胞株SW982中典型炎症小体的表达及意义.方法 SW982细胞用10μg/L TNF-α处理不同时间后,采用qRT-PCR、Western blot、免疫荧光染色检测NLRP1、NLRP3、NLRC4、AIM2、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、IL-1β、IL-18表达.结果 qRT-PCR显示SW982细胞经TNF-α处理12h后NLRP1、NLRP3、AIM2、IL-1βmRNA表达增加(P＜0.01或0.05)、24h后逐渐减少,而NLRC4、IL-18表达下调(P＜0.01).Western blot发现NLRP3、AIM2蛋白表达在处理早期呈时间依赖性上调、24 h后下调,而NLRC4表达无明显变化.免疫荧光染色显示TNF-α处理24 h后细胞中AIM2和ASC定位于胞浆.结论 TNF-α可能同时激活SW982细胞中NLRP3、AIM2炎症小体.
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Metrigel-VEGF-SW982细胞支架复合物的构建及在滑膜肉瘤小鼠模型上的应用
目的 建立Metrigel-VEGF-SW982细胞支架复合物并利用复合物制作移植瘤动物模型,为其他软组织肿瘤动物模型的建立提供思路.方法 培养扩增SW982细胞,消化收集细胞,用Metrigel对SW982细胞进行重悬,同时加入VEGF,应用Transwell制作Metrigel-VEGF-SW982细胞支架复合物,并进行培养,HE染色观察细胞支架复合物形态结构.选取10只4周龄雌性SCID小鼠,随机分成支架组和对照组.支架组小鼠腋下移植细胞支架复合物,对照组注射移植细胞培养基悬液.8周后,比较两组造模成功率,取材HE染色观察肿瘤的组织形态特点.结果 利用Metrigel对SW982细胞进行立体式培养,能够很好的模拟细胞在体的生长状态.采用细胞支架复合物构建滑膜肉瘤动物模型,成瘤率较对照组明显提高,且肿瘤体积更大,细胞密度更高,肿瘤内部有新生血管.结论 利用Metrigel-VEGF-SW982细胞支架复合物构建滑膜肉瘤动物模型,能够极大地提高模型成瘤率,为滑膜肉瘤的研究提供便利.
