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秀丽莓多糖RAP-B-1理化性质及免疫活性
目的：研究植物秀丽莓（Rubus amabilis）茎中分离得到的多糖RAP-B-1的理化性质以及免疫活性。方法秀丽莓茎经过水煎、醇沉、透析获得粗多糖（crude polysaccharide，RAP）。RAP再经DEAE-纤维素和Sephadex G-100柱色谱分离得到相对分子质量均一的多糖RAP-B-1。采用完全酸水解、高碘酸氧化、Smith降解及甲基化反应，以及毛细管电泳（capillary electrophoresis，CE）、红外（infrared radiation，IR）、磁共振（nuclear magnetic resonance，NMR）和气相色谱-质谱联用（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）等方法研究其理化性质。采用小鼠脾淋巴细胞增殖和腹腔巨噬细胞吞噬实验评价RAP-B-1的免疫活性。结果多糖RAP-B-1的峰位相对分子质量为4.80×104，比旋光度为[α]20D +68.3（c=1，H2O），其单糖组成为木糖：阿拉伯糖：葡萄糖：鼠李糖：半乳糖：甘露糖：葡萄糖醛酸：半乳糖醛酸=1.0：6.9：0.8：1.1：6.9：0.3：0.5：3.3，推测RAP-B-1主要为酸性阿拉伯半乳聚糖，其中阿拉伯糖的连接方式：→1） Ara（2，3→、→1） Ara（5→和→1） Ara；半乳糖的连接方式：→1）Gal（4→、→1）Gal（6→和→1）Gal。生物活性评价结果表明RAP-B-1在1～50μg/ml范围内对小鼠脾脏T细胞有一定促增殖作用（P <0.05），同时增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力（P <0.01）。结论RAP-B-1为一种阿拉伯半乳聚糖，具有一定免疫促进作用。
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秀丽莓干燥茎中的化学成分研究
目的 研究秀丽莓(Rubus amabilis Focke)干燥茎中的化学成分,阐明秀丽莓药效物质基础.方法 采用水提取、柱色谱法以及结晶法对秀丽莓干燥茎进行分离纯化,用核磁共振、质谱等光谱波谱技术对分离得到的化合物进行结构鉴定,并结合高效液相色谱-离子阱-飞行时间质谱法(LC/MS-IT-TOF)对其中的化学成分进行分析,SunFireTM C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),甲醇(A)-0.5％甲酸水溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,电喷雾离子源为质谱离子源,同时采用正、负离子检测模式,获得不同化合物的多级质谱数据.结果 从秀丽莓干燥茎中分离出了5个化合物,分别鉴定为1,2,8-三甲氧基-6-羟基(口山)酮、2α,3α,19α,23-四羟基-乌苏-12-烯-28-酸、齐墩果酸、(+)-儿茶素及(-)-表儿茶素.根据高分辨质谱结果和MS/MS碎片信息,结合对照品质谱信息及相关文献,共鉴定推断出27个化合物,其中1个(口山)酮:1-羟基-3,7,8-三甲氧基(口山)酮;1个单萜:7-epiphlomiol;5个二萜类:对映-贝壳杉-16-烯-9-醇、对映-16β,17-二羟基-贝壳杉-19-羧酸、对映-贝壳杉-3α(β),16β,17-三醇、甜茶苷、甜茶单糖苷;9个三萜类:2α,3β,23α-三羟基-乌苏-12,18-二烯-28-酸、2α,3β,23α-三羟基-乌苏-12,19-二烯-28-酸、19α-羟基熊果酸、2 α,19α-二羟基-乌苏-12-烯-28-酸、2α-羟基乌苏酸、2α,3α-二羟基-齐墩果-12-烯-28-酸、3β,16α,22α,28-四羟基齐墩果-12-烯、3β,16α,22α,23,28-五羟基齐墩果-12-烯及萎陵菜酸;11个黄酮类:原花青素B1 ～ B8、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素及8,3’-二羟基-7,4’-二甲氧基异黄酮.结论 化合物1,2,8-三甲氧基-6-羟基(口山)酮为蔷薇科植物中首次分离得到;化合物(+)-儿茶素与(-)-表儿茶素为首次从悬钩子属植物中分离得到;其余化合物为首次从秀丽莓中发现.
关键词： 秀丽莓 化学成分 高效液相色谱-离子阱-飞行时间质谱法 -
采用GC-MS法分析秀丽莓根精油成分
目的 研究秀丽莓根精油成分的组成及相对含量.方法 采用GC-MS法分离鉴定秀丽莓根二氧化碳超临界流体萃取所得精油化学成分并测定其相对含量.结果 秀丽莓根精油成分得率为3.42％,分离鉴定出39种成分,主要成分为桉叶油二烯-5,11(13)-内酯-8,12、γ-衣兰油烯、β-谷甾醇、榄香醇、圆柚醇、β-桉叶醇、喇叭烯氧化物、维生素A醋酸酯、1,5,9-三甲基-1,5,9-环十二碳三烯、荜澄茄油烯醇、羽扇豆醇乙酸酯、豆甾-4-烯-3-酮、香橙烯氧化物等.结论 二氧化碳超临界流体萃取的精油成分是秀丽莓清肺止咳的药效组分之一.
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响应面分析法优化秀丽莓总糖提取工艺
目的 利用响应面分析法对秀丽莓总糖提取工艺进行优化.方法 以秀丽莓水提液总糖含量为评价指标,选取提取温度(X1)、提取时间(X2)、料液比(X3)、药材粉碎粒径(X4)及提取次数(X5)为单因素进行考察,终确定提取温度、提取时间及料液比为主要影响因素.在该试验基础上选取3个因素的3个水平,根据中心组合(Box-Benhnken)试验设计原理,采用响应面分析法,以水提液的总糖含量为响应值(Yvielded)作响应面及等高线,计算获得可反应3因素与总糖含量之间关系的多元二次线性回归方程,优化设计佳提取工艺.结果 根据计算拟合所得方程确定的佳提取工艺条件为:药材粉碎过40目筛,浸提温度65℃,提取时间2.5h,按料液比1:21加水提取1次.按照该条件提取所得秀丽莓水提液总糖含量可达13.39％,与理论预测值13.77％基本一致.结论 该佳提取条件可靠、稳定、提取率高,基本能满足工业生产的需求.
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秀丽莓中鞣花酸的含量测定和抗氧化活性评测及对接研究
目的 建立秀丽莓中鞣花酸的含量测定方法并对其抗氧化活性进行研究.方法 采用RP-HPLC法,SunFireTM C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-4 mL·L-1磷酸水(20:80)为流动相;流速:1.0 mL·min-1;检测波长:254 nm;柱温:35℃.有机结合计算机分子模拟及体外DPPH·抗氧化活性评价方法对其可能的作用机制及活性进行深入探讨.结果 鞣花酸的线性范围为0.08192～0.40960μg(r=0.9997,n=6);平均回收率(n=6)为99.51％(RSD=2.00％).该成分可通过结构中的酚羟基经氢键、苯环经π-π键作用与受体蛋白的氨基结合起效,具有较维生素C更强的抗氧化活性.结论 该方法可迅速、准确地测定秀丽莓中的鞣花酸含量,可作为该药材中主要抗氧化成分鞣花酸质量控制和评价的有效方法,为该药材的进一步开发提供判断方法.
