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抑制γ-突触核蛋白表达对乳腺癌 T47 D细胞放射敏感性的影响
目的：探讨γ突触核蛋白（γ-synuclein，SNCG）对乳腺癌细胞辐射敏感性的影响。方法合成SNCG的siRNA干扰序列并转染T47D细胞。用RT-PCR和Western blot法分别从基因水平和蛋白水平检测SNCG基因的表达。实验设SNCG siRNA干扰组（干扰组）、阴性对照组、空白对照组。各组细胞分别接受不同剂量γ射线照射，集落形成实验检测细胞放射敏感性，CCK-8实验检测细胞增殖能力变化，Western blot法检测AKT及mTOR磷酸化变化。结果 SNCG siRNA干扰组较空白对照组的SNCG基因和蛋白表达都明显下降。在4、6、8 Gy照射下干扰组的乳腺癌细胞数量明显低于未转染SNCG的对照组（t＝5.449、8.882、21.503， P＜0.05），其中6 Gy照射时，干扰组的细胞增殖能力在照后24、48、72 h均较其他对照组低（t＝5.603、4.839、6.115， P＜0.05），且干扰组AKT及mTOR磷酸化水平降低，而总的AKT及mTOR未见明显变化。结论抑制SNCG的表达可增强乳腺癌细胞对射线的放射敏感性，其机制可能与AKT信号通路被抑制有关。
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γ-突触核蛋白的克隆、表达及纯化
目的 对γ-突触核蛋白(synuclein)基因进行克隆,并对其表达及纯化条件进行优化.方法 根据GenBank中γ-突触核蛋白的基因序列,设计PCR引物,从人脑cDNA文库中扩增γ-突触核蛋白的编码DNA序列,将其克隆至pGEX-6p-1载体中,构建重组质粒,将测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达;对培养温度、IPTG的用量、诱导时间等条件进行了优化;用SDS-PAGE和质谱分析表达的目标蛋白;用亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤纯化目标蛋白.结果 γ-突触核蛋白在大肠杆菌中高效、可溶性表达,经质谱鉴定及SDS-PAGE分析,表达产物为γ-突触核蛋白.经过纯化,得到纯度高达98%的γ-突触核蛋白.结论 成功地在大肠杆菌中高效表达了γ-突触核蛋白,并建立了纯化工艺,得到高纯度的重组蛋白,为进一步研究γ-突触核蛋白的晶体结构、生物学活性及功能,探讨其在肿瘤中的发病机制奠定了基础.
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胆管癌组织中SNCG的表达及其临床意义
目的:观察γ-synuclein(SNCG)在胆管癌和正常胆管组织中的表达,并探讨其在胆管癌发生、发展中的临床意义.方法:采用免疫组化方法检测SNCG蛋白在72例胆管癌组织及41例胆管正常组织中的表达水平,并分析其与胆管癌临床病理特征的关系.结果:SNCG蛋白在胆管癌组织中的阳性表达率为73.61％(53/72),高于其在胆管正常组织中的阳性表达率(4.88％,2/41),其差异有统计学意义(P＜0.01).SNCG蛋白的表达与肿瘤的淋巴结转移相关(P＜0.01),但与患者的年龄、性别及肿瘤分化程度无关(P＞0.05).结论:SNCG蛋白的表达与胆管癌的发生、发展正相关,并对胆管癌的浸润转移发挥重要的促进作用.对SNCG蛋白的研究将可能为胆管癌的早期诊断提供新的肿瘤标志物,并为胆管癌的预后判断和诊治提供重要理论依据.
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DNA甲基转移酶3B、γ-突触核蛋白在结直肠癌中的表达及其临床意义
目的 观察DNA甲基转移酶3B (DNMT3B)、γ-突触核蛋白(SNCG)在结直肠癌组织中的表达,探讨DNMT3B、SNCG在结直肠癌组织中表达意义及其相关性.方法 采用免疫组织化学染色方法检测72例结直肠癌组织及30例癌旁正常结直肠组织中DNMT3B、SNCG的表达,分析其在结直肠癌组织中的表达与临床病理参数间的关系.结果 DNMT3B在结直肠癌组织中的阳性细胞表达率55.56％ (40/72)明显高于正常结直肠组织黏膜的表达率23.33％ (7/30),两者差异有统计学意义(P＜0.01).DNMT3B的异常表达与结直肠癌患者年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度无明显相关(P＞0.05),与组织分化程度、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P＜0.01).SNCG在结直肠癌组织中的阳性细胞表达率41.67％ (30/72)明显高于正常结直肠组织黏膜的表达率6.67％(2/30),两者差异有统计学意义(P＜0.01).SNCG的异常表达与结直肠癌患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度无明显相关(P＞0.05),与浸润深度、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P＜0.05).结直肠癌组织中DNMT3B表达与SNCG表达两者呈明显负相关(r=-0.321,P＜0.01).结论 DNMT3B和SNCG在结直肠癌组织中异常表达,参与结直肠癌的发生、发展,两者之间密切相关.
关键词： 结直肠癌 DNA甲基转移酶3b DNA甲基化 γ-突触核蛋白 -
γ突触核蛋白在前列腺癌恶性进展中的作用
目的 观察γ-突触核蛋白(SNCG)在前列腺癌的表达及恶性进展中的作用.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测SNCG在前列腺细胞株的表达.组织免疫组织化学检测正常前列腺组织、前列腺炎、良性前列腺增生、高级别前列腺上皮内瘤及激素依赖性前列腺癌组织的SNCG表达.结果 SNCG在激素依赖性前列腺癌细胞株CWR22、LNCaP的表达明显高于前列腺上皮细胞株RWPE-1.SNCG在10例正常前列腺组织(1/10)、10例前列腺炎组织(0/l0)及10例良性前列腺增生组织(2/10)几乎不表达；在高级别前列腺上皮内瘤(HGPIN)中低表达(3/10)；在122例激素依赖性前列腺癌组织有74例阳性表达.SNCG在激素依赖性前列腺癌中的阳性率为60.66％ (74/122),其高表达与前列腺癌中高危因素[前列腺特异抗原(PSA)≥10 μg/L、Gleason评分≥7、临床分期≥T2b组]及淋巴结转移相关.结论 SNCG在激素依赖性前列腺癌中的异常表达,可能参与前列腺癌恶性进展.
