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通过环介导恒温扩增技术检测空肠弯曲杆菌
目的 建立基于DNA环介导恒温核酸扩增法(LAMP)快速检测空肠弯曲杆菌.方法 以空肠弯曲杆菌马尿酸酶基因(hipO基因)为靶序列,设计6套特异性引物进行LAMP反应,通过比较扩增效率筛选出佳引物用以快速检测空肠弯曲杆菌.对检测方法的特异性进行验证,敏感性与PCR法比较.结果 实时浊度仪监测反应结果表明,LAMP反应在62℃恒温条件60 min 内完成;如果在反应前添加钙黄绿素与氯化锰混合液(FD),黄绿色的阳性结果明显区别于橙色阴性结果.LAMP法低检出限为6.97×102拷贝/μl,敏感性为PCR法(6.97×103拷贝/μl)的10倍.结论 LAMP法用于快速检测空肠弯曲杆菌具有检测过程简单、实验装置简便、反应结果判读方便、敏感性高、特异性强等特点,特别适于现场和基层检疫及医疗机构快速诊断.
关键词： hipO基因 DNA介导恒温核酸扩增法 快速检测 空肠弯曲杆菌 -
TagMan PCR快速检测食品中空肠弯曲菌
目的:利用荧光定量PCR技术,建立食品中空肠弯曲菌污染的快速检测方法.方法:以空肠弯曲菌的hipO基因为靶序列,设计引物和探针,优化引物、探针浓度比和Mg2+浓度,对反应体系进行评价.并初步应用于样品的检测.结果:所建反应体系特异性、敏感性和稳定性良好.定量检测低限15cfu/ml.结论:建立了适用于食品中空肠弯曲菌污染快速检测的荧光定量PCR方法.
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空肠弯曲菌hipO基因的Real-time PCR检测研究
目的 建立基于新型Taqman荧光探针的荧光实时(Real-time)PCR方法用于空肠弯曲菌的筛选检测与快速鉴定.空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是近十几年来在世界范围内广泛重视的人畜共患病原菌,可以导致人类的急性肠炎与食物中毒,并能引发格林-巴利综合征等并发症.为更好地利用分子生物学技术对空肠弯曲菌进行快速、准确的基因检测,本研究从样品增菌液与单菌落中提取细菌DNA,建立了针对空肠弯曲菌特异的hipO (hippuricase,马尿酸酶)基因的Real-time PCR方法,用于空肠弯曲菌的快速筛选检测与可疑菌落快速鉴定.试验结果表明,该方法检测细菌的灵敏度为1～10CFU,人工布菌鸡肉的检测灵敏度为1～10CFU.本研究所建立的空肠弯曲菌荧光实时PCR方法具有准确、可靠、快速的特点.
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应用多重PCR快速检测空肠弯曲菌
目的:建立能快速、特异检测空肠弯曲菌的多重PCR技术.方法:选用针对空肠弯曲菌外膜蛋白A(mapA)基因和马尿酸酶(hipO)基因的2对引物,在同一扩增体系中进行PCR,优化反应体系,测定特异性和灵敏度,并进行了鸡肉模拟样品检测.结果:该方法扩增目的基因片段分别为589 bp和323 bp,特异性和灵敏度均高.细菌纯培养物的检测灵敏度为105 cfu/ml,鸡肉模拟样品42℃预增菌36 h后检测灵敏度能达到101 cfu/ml.结论:初步建立能快速、灵敏、特异地测定空肠弯曲菌的多重PCR检测技术.
