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microRNA-639调控舌鳞状细胞癌上皮间质转化的实验研究
目的：探讨微小RNA（miR）-639对转化生长因子β1（TGF-β1）所诱导的舌鳞状细胞癌（TSCC）细胞上皮－间质转化（EMT）的调控作用。方法应用TGF-β1刺激上皮型SCC9、CAL27细胞，诱导形成相对应的间质型细胞SCC9 TGF-β1、CAL27 TGF-β1。通过实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）、Western blot检测EMT的标记物，通过芯片检测得到一组差异性表达的miRNA，通过实时荧光定量PCR验证芯片检测结果。选取发生EMT的TSCC细胞中低表达的miR-639为研究对象，通过脂质体介导分别将miR-639的反义核苷酸（miR-639 ASO）和miR-639的拟似物（miR-639 mimics）转染上皮型和相对应的间质型细胞，采用实时荧光定量PCR检测转染前后两株细胞中miR-639的表达变化，通过Transwell实验检测各组细胞侵袭、迁移能力差异。两组间均数的比较采用Student′s t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。结果实验组miR-639的表达明显上调或下调，阴性对照组与空白对照组中miR-639的表达无明显变化。 Transwell实验检测转染miR-639 ASO后上皮细胞的侵袭迁移能力显著升高（P＜0.05），并且可以诱导细胞发生EMT；转染miR-639 mimics后诱导所形成的间质型TSCC细胞的侵袭迁移能力显著降低（P＜0.05），同时可逆转EMT。结论 miR-639 mimics对TGF-β1所诱导形成的的间质型TSCC细胞具有调控作用，转染miR-639 mimics可逆转EMT并能有效地抑制间质型细胞SCC9 TGF-β1的侵袭迁移能力。
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miR-639在骨肉瘤组织中的表达及其模拟物转染对人骨肉瘤细胞U20S增殖、迁移、侵袭能力的影响
目的 观察微小RNA-639(miR-639)在骨肉瘤组织中的表达及miR-639模拟物(miR-639 mimics)转染对人骨肉瘤细胞U20S增殖、迁移、侵袭能力的影响.方法 通过GEO数据库和TCGA数据库分析骨肉瘤组织及癌旁组织miR-639表达情况,另分析miR-639高表达与骨肉瘤临床病理参数的关系.取U20S细胞,将miR-639 mim-ics和模拟物阳性对照(miR-NC)转染入U20S细胞中(分别计为观察组和对照组),转染后继续培养24 h,后收集细胞进行后续实验.采用CCK-8实验检测两组细胞集落形成数,EdU实验检测细胞EdU染色数,克隆形成实验检测细胞迁移细胞数,Transwell实验检测细胞侵袭数,荧光定量PCR法和Western blotting法分别检测细胞TUSC5 mR-NA、蛋白.结果 GEO数据库显示,骨肉瘤、癌旁组织中miR-639表达水平分别为11.2 ± 0.4、7.1 ± 0.6,两者比较,P＜0.05;TCGA数据库显示,骨肉瘤、癌旁组织中miR-639表达水平分别为19.5 ± 3.4、7.7 ± 2.2,两者比较,P＜0.05.miR-639高表达与骨肉瘤肿瘤直径、淋巴结转移、解剖部位有关(P均＜0.05).观察组、对照组集落形成数分别为(155 ± 12)、(84 ± 8)个,EdU染色数分别为(14 ± 3)、(6 ± 2)个,迁移细胞数分别为(120 ± 30)、(70 ± 18)个,侵袭细胞数分别为(100 ± 16)、(52 ± 23)个,两组比较,P均＜0.05.观察组和对照组TUSC5 mRNA分别为0.18 ± 0.07、0.84 ± 0.13,TUSC5蛋白分别为0.31 ± 0.06、0.81 ± 0.09,两组比较,P均＜0.05.结论 miR-639在骨肉瘤组织中表达升高;miR-639 mimics转染促进了骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭能力,可能与其抑制TUSC5有关.
