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缺氧缺糖模型的研究现状
脑梗死,又称缺血性脑卒中,是指各种原因所致脑部血液供应障碍,导致脑组织缺血、缺氧性坏死,出现相应神经功能缺损.脑梗死是神经系统的常见病及多发病,是目前导致人类死亡的三大主要疾病之一,并且存活者中多遗有严重残疾,给社会和家庭带来沉重的负担.因此,缺血性脑卒中成为神经系统疾病的研究热点,目前离体实验常用的模型为缺氧缺糖(OGD)模型,大体上分为两类:化学方法和物理方法.本文将具体阐述这两类模型如何建立及各种模型的优缺点.
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黄芪多糖对OGD条件下细胞生存及AKT磷酸化的影响
观察黄芪多糖(APS)对人微血管内皮细胞（HMEC-1）的保护作用以及Akt通路其中发挥的角色,以期探索APS细胞保护作用机制.用MTT法考察APS对HMEC-1细胞活力的影响；用体外缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD模型,在OGD条件下,用LDH法检测细胞死亡率；用Western blotting法,研究APS对Akt通路的调节作用；利用Akt抑制剂Wortmannin作为阻断剂,考察Akt通路在APS细胞保护作用中发挥的角色.结果表明APS对HMEC-1细胞活力无明显影响,对OGD诱导的内皮细胞死亡具有一定的保护作用,可以显著减少细胞死亡率,且其保护作用具有剂量依赖性.且APS能诱导Akt磷酸化,而Akt抑制剂Wortmannin可降低APS对OGD诱导的内皮细胞死亡的保护作用.这些结果提示,APS可能是通过诱导Akt磷酸化,保护细胞减少OGD诱导的细胞死亡.
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苦参碱对缺血性脑中风小鼠神经元及星形胶质细胞的保护作用
目的:观察苦参碱(Matrine)对缺血性脑中风小鼠的神经保护作用及对缺氧缺糖诱导的神经元和星形胶质细胞损伤的减轻作用,并初步探讨可能的作用机制.方法:采用原代培养小鼠大脑皮层神经元及星形胶质细胞缺氧缺糖模型(Oxygen and glucose deprivation,OGD),MTT法和测定乳酸脱氢酶(LDH)观察Matrine对OGD神经元及星形胶质细胞的损伤是否有减轻作用；建立小鼠永久性大脑中动脉阻塞(Permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO)模型,观察Matrine 10 min、1h、3h及6h四个不同时间点给药后,脑梗死面积和神经症状的改善情况及其分子机制是否与抑制神经元及星形胶质细胞NF-κB信号通路有关.结果:经OGD诱导后,原代培养小鼠大脑皮层神经元及星形胶质细胞活力明显下降,与OGD模型组比较,给予Matrine(50 μmol/L)干预后,神经元及星形胶质细胞的存活率明显提高(P＜0.01)；与此同时,OGD可使小鼠大脑皮层星形胶质细胞LDH漏出量增高(P＜0.01),Matrine(50 μmol/L)与模型组比较,LDH漏出量明显降低(P＜0.01)；Matrine(37.5 mg/kg) 10 min、1h两个给药时间点的脑梗死面积与模型组比较明显减少(P＜0.01)；与模型组比较,Martine 10 min、1h两个给药时间点术后24 h的神经症状评分明显降低(P＜0.01)；Matrine可降低pMCAO缺血区IκBα与IKK蛋白的表达水平(P＜0.01,P＜0.05),同时降低细胞核NF-κB蛋白的表达(P＜0.01).结论:Matrine可通过直接保护神经元及星形胶质细胞改善缺血性脑中风症状,其作用时间窗可能在发病1h以内,Matrine保护作用可能与NF-κB信号通路有关.
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川芎嗪对缺氧缺糖损伤大脑皮层神经元的保护作用及初步机制研究
目的：研究川芎嗪（TMP）对缺氧缺糖（OGD）损伤大脑皮层神经元的保护作用，探讨 TMP 神经保护作用的可能机制．方法：建立体外原代大脑皮层神经元 OGD 模型，利用 MTT 法和 LDH 试剂盒分别检测细胞存活率及细胞毒性；Hoechst 染色法检测细胞凋亡；流式细胞仪检测细胞内 ROS 的含量；实时-PCR 检测细胞内线粒体生物合成相关 mRAN（PGC-1α，TFAM）的表达量．结果：经 OGD 损伤4 h 后，细胞活力明显下降，细胞释放的 LDH 含量升高；细胞凋亡形态学特征明显，细胞凋亡率增加；细胞内 ROS 含量增加，同时 PGC-1α和 TFAMmRNA 的表达量明显减少．TMP 预保护后，可以明显提高 OGD 损伤后细胞的存活率，降低 LDH 的释放，改善细胞核形态变化，并且减少细胞凋亡率，抑制细胞内 ROS 的产生，提高 PGC-1α和 TFAM的表达．结论：TMP 对 OGD 损伤的神经元具有神经保护作用，其机制可能与抗氧化，抗凋亡和增加线粒体生物合成相关因子（PGC-1α，TFAM）的表达有关．
关键词： 川芎嗪 原代大脑皮层神经元 缺氧缺糖模型 活性氧自由基 线粒体生物合成相关因子 -
改良的新生大鼠海马脑片缺氧缺糖模型的制备方法
目的:介绍一种经济实用的海马脑片缺氧缺糖模型的制备方法.方法:选出生8～10 d的SD乳鼠,分离大脑海马,切成400μm厚的脑片,转至带有Millicel微孔膜插件的培养皿中.分别培养7 d、14 d、20 d和30 d.倒置显微镜观察形态.碘化丙啶(Propidiumiodide,PI)染色后荧光显微镜下检测脑片活力.充入氮气于不同时相点观察脑片缺氧状况.结果:①培养7 d和14 d的脑片中所有细胞PI染色呈阴性,培养30 d时脑片中部分神经元PI染色阳性,细胞变性坏死.②充入氮气时间越长,海马脑片的死亡细胞越多.③充入氮气1.5 h后正常培养24 h可观察到海马脑片CA1、CA3、DG均出现强荧光显色.结论:脑片存活时间约30d,充入氮气1.5 h可建立稳定的缺氧缺糖模型.
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改良的新生大鼠海马脑片缺氧缺糖模型的制备方法
目的:介绍一种经济实用的海马脑片缺氧缺糖模型的制备方法.方法:选出生8～10d的SD乳鼠,分离大脑海马,切成400υm厚的脑片,转至带有Millicel微孔膜插件的培养皿中.分别培养7d、14d、20d和30d.倒置显微镜观察其形态.碘化丙啶(Propidiumiodide,PI)染色后荧光显微镜下检测脑片活力.充入氮气于不同时相点观察脑片缺氧状况.结果:(1)培养7d和14d的脑片中所有细胞PI染色呈阴性,培养30d时脑片中部分神经元Pl染色阳性,细胞变性坏死.(2)充入氮气时间越长,海马脑片的死亡细胞越多.(3)充入氮气1.5h后正常培养24h町观察到海马脑片CAl、CA3、DG均出现强荧光显色.结论:新生大鼠海马脑片存活时间约30d,充人氮气1.5h可建立稳定的新生大鼠海马脑片缺氧缺糖模型.
