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乳腺癌患者血清人表皮生长因子受体2胞外域检测的临床研究现状
目前,全世界用于人表皮生长因子受体（human epidermal growth fator receptor,HER)－2/neu 基因的检测方法很多,主要有免疫组织化学法(immuno－histochemistry,IHC)、酶联免疫法(enzyme－linked immunosorbnent assay,ELISA)、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)、显色原位杂交(chromogenic in situ hybridization.CISH)和非荧光原位杂交、聚合酶链式反应 (polymerase chain reaction,PCR)等[1].
关键词： 乳腺肿瘤 人表皮生长因子受体2 胞外域 -
构建的FIt3L胞外域原核表达载体在大肠杆菌中的表达
目的:构建含组氨酸标签的FMS样酪氨酸激酶3配体(Fms-like tyrosine kinase 3 ligand,FIt3L)胞外域蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达.方法:依据FIt3L基因序列设计引物,以RT-PCR的方法从小鼠脾脏总RNA中克隆FIt3L基因并构建其胞外域原核表达载体,测序鉴定后在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中诱导表达,用免疫印迹鉴定.结果:克隆到FIt3L编码区全长序列,经DNA测序证明与已报道的序列相同;构建羧基端带有His6标签的FIt3L胞外域蛋白的原核表达载体,转化大肠杆菌后SDS-PAGE分析显示在BL21(ED3)中获得较高表达;免疫印迹分析表明IPTG诱导后表达的FIt3L胞外域蛋白的相对分子质量(Mr)为19 000,与理论值相符,此蛋白与抗His6标签的抗体发生特异性反应.结论:成功克隆FIt3L基因,构建其胞外域蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得表达.
关键词： fms样酪氨酸激酶3配体 胞外域 原核表达 组氨酸标签 -
人EGF受体胞外域在大肠杆菌中表达、复性及抗原性鉴定
目的构建人EGF受体(EGFR)胞外域的原核表达载体并在大肠杆菌中表达,制备EGFR特异性抗体,对表达产物进行鉴定.方法以PCR方法从克隆的EGFR胞外区cDNA中扩增编码胞外结构域L1、S1、L2 (EGFR-LSL)的DNA片段,并在其3'端加入编码His6标签的序列,与pET-3c连接构建EGFR-LSL原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达;同时以纯化的EGFR L2结构域蛋白(EGFR-L2)制备抗血清,以此抗血清鉴定表达产物.结果 EGFR-LSL在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,抗His6抗体免疫印迹分析表明,表达产物全部以包涵体形式存在,通过Ni2+-NTA柱上复性获得纯化的可溶性EGFR-LSL蛋白;免疫印迹分析表明,EGFR-LSL与小鼠抗EGFR-L2抗血清具有高特异性反应.结论从大肠杆菌中获得具有特异抗原性的可溶性EGFR-LSL蛋白.
